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为拓宽噬菌体宿主谱,本研究通过将产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)特异性噬菌体v B_Eco M_JS09与肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7细菌进行多轮共培养,筛选到了6株能够同时裂解ETEC和EHEC O157∶H7的噬菌体,并多次传代和宿主谱鉴定,选择其中1株噬菌体Bp47-12鉴定其生物学特性。双层琼脂平板试验结果表明,噬菌体Bp47-12在平板上均呈现出了典型的裂解性噬菌体特征,空斑透亮,边缘整齐清晰,无晕环噬菌斑;宿主谱鉴定结果表明,ETEC和EHEC O157∶H7菌株均对噬菌体Bp47-12敏感,实现了噬菌体在ETEC和EHEC O157∶H7菌株之间的交叉裂解反应,拓宽了亲本噬菌体JS09的宿主谱;噬菌体Bp47-12能够耐受60℃左右高温,在p H值3~9时效价稳定;最佳感染复数为1;潜伏期为30 min,爆发期为70 min,平均爆发量分别为15;体外裂解试验结果表明,在5 h之内噬菌体Bp47-12能够有效裂解ETEC和EHEC O157∶H7菌株,OD600值下降约0.66;吸附曲线结果表明,在25 min之内,效价为105 PFU/mL的噬菌体Bp47-12能够完全吸附到宿主菌表面。本研究具有潜在的应用价值,也为拓宽裂解性噬菌体宿主谱和应用噬菌体提供了科学依据。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(6):21-25
本试验从猪粪中分离得1株大肠杆菌的烈性噬菌体ФNJ14。用实验室保存的大肠杆菌对其裂解谱进行检测,发现ФNJ14能裂解27株大肠杆菌,是一株对肠道内和肠道外大肠杆菌均有效的宽宿主谱的噬菌体。电镜观察结果表明,ФNJ14头部呈狭长的六面体,有一个可伸缩的尾部,属于肌尾噬菌体科成员。ФNJ14的生物学特性鉴定结果显示,其效价为1.28×1010PFU/m L,最佳感染复数(MOI)为100;对60℃以下的温度具有较好的耐受力,在70℃培养20min后活力显著下降;ФNJ14对碱的耐受力较强,在p H4~11之间都能保持较高的活力;一步生长曲线检测结果显示,ФNJ14潜伏期为20 min,复制周期为140 min。提示噬菌体ФNJ14对致病性大肠杆菌具有一定的防控潜力。 相似文献
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《家畜生态学报》2021,42(7)
为了解撒坝猪源大肠杆菌噬菌体分离株的生物学特性。自撒坝猪源大肠杆菌中分离到一株裂解性噬菌体,利用PCR扩增噬菌体衣壳蛋白gp23基因,并通过同源性比对及遗传进化分析来鉴定噬菌体。经增殖纯化培养后测定噬菌体的效价和对菌株的裂解效应,而后测定其最佳感染复数、热稳定性、pH稳定性及绘制生长曲线以探究该噬菌体的生物学特性。结果表明,分离株衣壳蛋白gp23基因与噬菌体slur14亲缘关系最近,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科T4-like噬菌体;分离株具有较高的效价,达8.67×10~9 pfu/m;针对实验室保存的92株已确定血清型的大肠杆菌裂解率为61.95%,完全裂解率为27.17%;在60℃条件下作用30 min,或在pH5和pH9时,噬菌体的效价表现明显下降;生长曲线绘制后可知该噬菌体感染宿主菌的潜伏时间约为30 min,爆发时间约为120 min,裂解量为41 pfu/cell。该试验成功分离得到裂解能力较强、裂解谱较广且对理化因素耐受力较强的T4-like噬菌体。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(11)
为了解决目前严重的抗生素耐药性,寻找抗生素的替代品,作者探究了大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的基本生物学特性及其对致病性大肠杆菌1019的治疗效果。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析显示其效价可达到10~9pfu·mL~(-1),透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。热稳定性较好,在60℃保温1h后噬菌体效价仍可达到10~7pfu·mL~(-1)以上。对pH值的适应范围较宽,在pH4~10内仍能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适pH在7.0左右。最佳感染复数(MOI)为0.1,感染宿主菌的潜伏期20min,爆发期70min。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3对大肠杆菌1019有较强的裂解能力,可使SPF鸡肠道内大肠杆菌1019的数量降低96.5%。该大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3在治疗特定的大肠杆菌感染中具有较大的应用潜能。 相似文献
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肠出血性大肠杆菌O157：H7噬菌体的分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
分离纯化了抑制肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E coli,EHEC）0157：H7的噬菌体,并对其进行效价测定。将宿主菌EHEC0157：H7培养制成悬液后与污水样品37℃共培养16h,将培养物离心、过滤除菌后得到该菌的噬菌体原液。噬菌体原液采用双层琼脂平板法进行5次纯化,得到直径相同的噬菌斑。纯化后噬菌体的效价达到12×10^pfu。电镜观察表明,该噬菌体呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,该噬菌体属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。 相似文献
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本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058（avian pathogenic Escherichia coli）为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生长曲线测定、温度和酸碱耐受性测定、体外裂解能力测定以及全基因组测序及分析来研究该噬菌体的生物学特性和基因组特征。结果显示：噬菌体PNJ1809-36能够形成清晰透明的噬菌斑,其电镜照片显示为具有收缩尾部的肌尾科噬菌体;宿主谱分析结果显示,该噬菌体能够特异性裂解具有K1荚膜的大肠杆菌;最佳MOI为0.01;一步生长曲线结果显示,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min;噬菌体PNJ1809-36在40和50℃下存活良好,60℃ 30 min可使噬菌体完全失活;噬菌体在pH3~11之间均可存活,最适pH为6;体外裂解试验表明,该噬菌体可在6 h内完全抑制宿主菌的生长。经基因组测序与分析,噬菌体PNJ1809-36基因组全长为152 343 bp,GC含量为39.11%,含有277个开放阅读框（ORF）,11个tRNA基因。同源性分析显示其与早期发现的K1特异性的短尾噬菌体（如K1F、K1E）的同源性较低,而与噬菌体nepoznato、PVP-SE 1和phAPEC8等K1特异性噬菌体同源性较高,基因序列相似性达90%。噬菌体PNJ1809-36是一株特异性识别K1荚膜大肠杆菌的烈性噬菌体,属于肌尾科噬菌体新的系统发育分支。其针对K1荚膜的特性,提示该噬菌体在鉴定K1型大肠杆菌和治疗K1型大肠杆菌引起的疾病方面存在潜力。 相似文献
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【目的】分离有效裂解沙门氏菌的噬菌体,为探索新的沙门氏菌防控方法提供理论依据和参考。【方法】以鸡白痢沙门氏菌X-1014为宿主菌,通过双层琼脂平板法从污水中分离并纯化出噬菌体。采用噬菌斑与电子显微镜观察、宿主谱测定、生物学特性测试、体外抑菌试验及噬菌体的全基因组测序分析方法评估该噬菌体。【结果】分离纯化出1株能裂解沙门氏菌和大肠杆菌的裂解性噬菌体,命名为ZH5(GenBank登录号：OM864357.1)。双层平板法结果显示,噬菌斑透亮且边缘清晰。电镜观察显示,噬菌体ZH5头部呈二十面体、头部直经约50 nm,尾部长度约20 nm。宿主谱分析结果显示,噬菌体ZH5能裂解3株沙门氏菌和1株大肠杆菌。生物学特性结果显示,最佳感染复数为10,潜伏期和爆发期分别为20和60 min,裂解量约为139 PFU/cell;酸碱耐受范围为pH 4.0～10.0,且在温度为4～50℃的环境中能存活30 min。体外抑菌结果显示,当感染复数为10时,噬菌体ZH5对沙门氏菌X-1014和CVCC 1806抑制效果最佳。全基因组分析结果显示,该噬菌体全长为42 949 bp, GC含量为51.41%,其中已... 相似文献
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《畜牧兽医学报》2020,(7)
此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌(ETEC),本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌(其中包括5株ETEC),采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数(MOI)为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。 相似文献
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1株跨属感染猪霍乱沙门菌和大肠杆菌烈性噬菌体的分离及其生物学特性 总被引：2，自引：2，他引：0
从健康猪肠道内容物分离鉴定猪霍乱沙门菌（Salmonella choleraesuis,S.choleraesuis）的烈性噬菌体,并对其进行生物学特性分析。以S.choleraesuis 13122为宿主菌,用双层平板法从猪肠道黏膜和食糜样品中分离噬菌体,用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在大肠杆菌上的宿主谱,用浊度法测定其裂菌效力。分离到1株猪霍乱沙门菌噬菌体,命名为沙门菌噬菌体L6jm（Salmonella phage L6jm）。L6jm头部呈正多面体直径约75 nm,具有非收缩性的尾部,长约190 nm,其基因组无整合酶基因和细菌基因组,故判定为烈性噬菌体;L6jm可感染S.choleraesuis 13122并跨属感染1株大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）244,同时,可裂解9株大肠杆菌,包括1株产肠毒素大肠杆菌（ETEC）;L6jm在S.choleraesuis 13122和E.coli 244上的最佳感染复数分别为0.01和0.001;潜伏期均为15 min,暴发期分别为145和125 min;L6jm在≤50℃,pH为3~11时稳定;L6jm在液体培养基中对S.choleraesuis 13122有显著（P<0.05）的抑菌效果,对ETEC104在MOI 100时也可产生显著（P<0.05）的抑菌效果。L6jm可跨属感染S.choleraesuis和E.coli,且能裂解1株ETEC,具有防治沙门菌和大肠杆菌感染的应用潜力。 相似文献
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旨在为鸡大肠埃希氏菌病防治提供噬菌体材料。使用双层琼脂平板法从鸡场污水中分离纯化得到1株鸡埃希氏菌裂解性噬菌体vB-EcoM-IME540(IME540),并通过噬菌斑、透射电镜观察该噬菌体的噬菌斑和形态特征,测定其最佳感染复数、耐热稳定性、pH敏感性等生物学特性,并对其进行全基因组测序及进化分析。结果表明,噬菌体vB-EcoM-IME540的噬菌斑呈透亮的圆形,直径0.8 mm~1.1 mm,边缘整齐无晕环,裂解谱较窄(3/45);透射电镜下其头部呈椭圆形且具有收缩尾与尾丝,头尾被颈圈分开,头大小约106.7 nm×73.3 nm,尾长约140 nm×16.7 nm;全基因组大小为170237 bp,G+C为39.46%;基因序列与大肠埃希氏菌噬菌体Bp7的相似性为97.44%;最佳MOI=0.000001,潜伏期约为20 min,暴发时长约为130 min,裂解量约为23 PFU/cell;在80℃条件下20 min活性全部丧失;在pH为4.0~13.0内均有很高的活性。说明噬菌体vB-EcoM-IME540是一株具有一定耐热、耐酸碱能力的肌尾科的大肠埃希氏菌裂解性噬菌体。 相似文献
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金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的分离鉴定和最佳保存方法研究 总被引：1，自引：0，他引：1
基于细菌rRNA区域序列的PCR技术,通过设计特异性引物从奶样中快速、准确地鉴定奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌。采用金黄色葡萄球菌与挤奶前从奶牛乳房上洗刷下来的污水经过3次富集的方法,通过双层琼脂平板法,分离纯化得到了强裂解性的奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌的噬菌体。本试验分离的是可收缩尾的噬菌体,其头部为二十面体,约50 nm×62.5 nm,尾部长约187.5 nm,尾宽约37.5 nm,有尾鞘、基板等结构。纯化后在双层琼脂平板上形成的噬菌斑大而整齐,边缘光滑,透明,直径约2 mm,具有明显的强裂解性噬菌体特性,通过测定,该噬菌体的最佳感染复数为0.01,效价大于109 PFU/mL。对噬菌体的不同保存方法进行比较,结果表明,将噬菌体置于-80 ℃加入7% DMSO冷藏是较好的保存方法。 相似文献
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Pasteurella haemolytica (biotype A, serotype 1) isolates (n = 15) from the upper respiratory tract of clinically normal cattle, as well as from lung lesions from cases of fatal bovine pasteurellosis, were examined for the presence of bacteriophage after irradiation with UV light. Treatment of all P haemolytica isolates with UV irradiation resulted in lysis of bacteria due to the induction of vegetative development of bacteriophages. The extent of growth inhibition and bacterial lysis in irradiated cultures was UV dose-dependent. Bacterial cultures exposed to UV light for 20 s reached peak culture density between 60 and 70 minutes after irradiation; thereafter, culture density declined rapidly, so that by 120 minutes, it was approximately 60% of the original value. When examined ultrastructurally, lytic cultures from each isolate revealed bacteriophages with an overall length of approximately 200 nm and that appeared to have a head with icosahedral symmetry and a contractile tail. Cell-free filtrate from each noninduced bacterial isolate was inoculated onto the other bacterial isolates in a cross-culture sensitivity assay for the presence of phages lytic for the host bacterial isolates. Zones of lysis (plaques) did not develop when bacterial lawns grown from the different isolates were inoculated with filtrates from the heterologous isolates. 相似文献
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本研究旨在探讨噬菌体对断奶仔猪生长性能、肠道内容物pH、挥发性脂肪酸含量和二糖酶活性的影响。试验采用单因素试验设计,选用120头遗传背景相似、健康状况良好、胎次接近、初始体重为(7.35±0.03)kg的25日龄断奶仔猪,随机分为4个组,每组5个重复,每个重复6头仔猪。4组仔猪分别饲喂对照饲粮[添加50 mg/kg奎烯酮(有效含量25 mg/kg)和75 mg/kg金霉素(有效含量11.25 mg/kg)]及添加200、400和600 mg/kg噬菌体的饲粮。试验21 d后,屠宰取样,测定肠道内容物pH、挥发性脂肪酸含量及二糖酶活性。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加400、600 mg/kg噬菌体可显著提高仔猪全期增重(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,仔猪全期增重呈显著线性和二次曲线变化(P=0.001和P=0.003)。而且400、600 mg/kg噬菌体组仔猪腹泻指数也显著低于对照组与200 mg/kg噬菌体组(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,仔猪腹泻指数呈显著线性和二次曲线变化(P=0.024和P=0.015)。2)与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg噬菌体能够显著降低仔猪回肠pH(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加400和600 mg/kg噬菌体显著提高了盲肠中乙酸、丁酸和总酸的含量(P<0.05),且随着饲粮中噬菌体添加量的提高,盲肠乙酸、丁酸和总酸含量呈显著线性和二次曲线变化(P<0.01和P<0.01,P=0.017和P=0.014,P<0.01和P<0.01);600 mg/kg噬菌体组盲肠中戊酸含量显著高于对照组和200、400 mg/kg噬菌体组(P<0.05),且丙酸含量显著高于200 mg/kg噬菌体组(P<0.05)。相比较于对照组,饲粮中添加400和600 mg/kg噬菌体显著提高了仔猪结肠中乙酸和总酸含量(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,结肠乙酸含量呈显著先升高后降低的二次曲线变化(P=0.008)。而400 mg/kg噬菌体组仔猪结肠丁酸含量显著高于200和600 mg/kg噬菌体组(P<0.05)。4)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组仔猪十二指肠黏膜蔗糖酶和乳糖酶活性显著增加(P<0.05),十二指肠黏膜乳糖酶活性呈显著先升高后降低的二次曲线变化(P=0.029),空肠黏膜麦芽糖酶活性显著升高(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加噬菌体可提高仔猪的生长性能,降低腹泻指数,同时降低仔猪肠道内容物pH,提高肠道挥发性脂肪酸含量和二糖酶活性,改善仔猪肠道的消化吸收功能。 相似文献
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A bacteriophage to a serotype 02, nonmotile Escherichia coli was isolated from municipal waste treatment facilities and poultry processing plants. A study was conducted to determine the efficacy of multiple vs. single intramuscular (i.m.) injections of bacteriophage to treat a severe E. coli respiratory infection. The birds were challenged at 7 days of age by injection of 6 x 10(4) colony-forming units (cfu) of E. coli into the thoracic air sac followed by an i.m. injection into the thigh with either heat-killed or active bacteriophage. There were 16 treatments with three replicate pens of 10 birds. There were four control treatments, which included untreated birds, birds injected with either heat-killed or active bacteriophage, and birds challenged only with E. coli. In the remaining treatments, birds were injected with heat-killed or active bacteriophage either once immediately after E. coli challenge or immediately after challenge and at 8 and 9 days of age, once at 8 days of age or at 8, 9, and 10 days of age, and once at 9 days of age or at 9, 10, and 11 days of age. Mortality was significantly decreased from 57% to 13% in the birds given a single i.m. injection of bacteriophage immediately after E. coli challenge, and there was complete recovery in birds treated immediately after challenge and at 8 and 9 days of age, which was a significant improvement from the single injection treatment. There was a significant reduction in mortality from 57% to 10% in the birds treated with bacteriophage once at 8 days of age and those birds treated at 8, 9, and 10 days of age, with no difference between single or multiple treatments. The mortality in the single or multiple phage treated birds that started at 9 days of age was reduced from 57% to 28% and 27%, respectively, but was not statistically different from the control. These data suggest that bacteriophage can be an effective treatment when administered early in this experimental E. coli respiratory disease and that early multiple treatments are better than a single treatment. The efficacy of bacteriophage treatment diminishes as it is delayed, with no difference between single or multiple treatments. Bacteriophage may provide an effective alternative to antibiotics, but like and biotic therapy, the effectiveness of phage to rescue animals decreases the longer treatment is delayed in the disease process. 相似文献