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2013年12月新疆伊犁州霍城县发生不明山羊疫情,根据临床症状和剖检变化怀疑为小反刍兽疫感染。对3只病死山羊病料、8只患病山羊分泌物棉拭子样品和6只患病山羊血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用竞争ELISA试剂盒对6份血清样本进行抗体检测,结果全部为阳性。利用抗原捕获ELISA试剂盒,在11只病羊样品中都检测到小反刍兽疫抗原。利用能特异性检测小反刍兽疫病毒的荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊样品中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用特异引物进行PPRV N基因片段RT-PCR反应,从11只病羊样品中检测到PPRV核酸。针对2号样本病原核酸N基因和F基因片段进行序列同源性比较,结果该毒株与西藏流行株序列片段相似性分别为96.5%和97.5%。遗传进化分析,该病原属于谱系4,与巴基斯坦等国流行毒株遗传关系最近。 相似文献
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为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV阳性样品的F基因扩增产物进行了序列测定与分析。用该套式RT-PCR对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒等进行了检测,结果无交叉反应,表明该检测方法具有良好的特异性。本研究首次用套式RT-PCR技术证实了我国部分省的牛群中存在BRSV感染。 相似文献
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2018年下半年和2019年上半年上海浦东新区兽医实验室对各乡镇规模羊场及散养户进行羊小反刍兽疫的血清学和病原学调查,血清抗体检测采用ELISA方法,病毒检测采用荧光RT-PCR方法。2018年下半年共采集血清样品833份,抗体阳性数750份,抗体阳性率为90.03%;采集口鼻棉拭子样品356份,检测结果全为阴性。2019年上半年共采集血清样品471份,抗体阳性数432份,抗体阳性率91.72%;采集口鼻棉拭子样品171份,检测结果全为阴性。羊小反刍兽疫的免疫抗体平均阳性率90.64%,病原学检测结果为阴性。通过本次调查,得知上海浦东新区羊小反刍兽疫的免疫状况比较良好,发生该疫病的风险比较低,同时为评估该区羊小反刍兽疫的防控状况提供了科学依据。 相似文献
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《现代畜牧兽医》2016,(10)
根据羊传染性脓疱病毒GeneBank基因序列,设计合成一对引物。通过对PCR反应条件的优化,敏感性及特异性试验,成功建立了用于检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。该方法成功扩增出390 bp的目的基因片段,敏感性试验证明可以检测出320×10~(-2)ng/L的DNA。特异性试验羊痘病毒、山羊关节炎脑炎病毒均未扩增出相应片段。重复性试验对3份羊传染性脓疱病毒阳性病料进行检测,结果均为阳性。临床应用对临床送检的16份疑似羊传染性脓疱病毒感染病料用上述建立优化的PCR方法进行检测,结果显示,9份为阳性,阳性样品的PCR扩增产物克隆后进行序列分析显示均为羊传染性脓疱病毒。证明该方法具有良好的敏感性和特异性,可以用于临床诊断。 相似文献
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为了解黑龙江大兴安岭地区鸟类携带禽流感病毒(AIV)的情况,于2015～2017年春、秋季候鸟迁徙重点时期,在该地区双河国家级自然保护区、南瓮河国家湿地公园等重点区域,采集雀形目等林栖鸟咽、肛拭子2547份,采用SPF鸡胚分离病毒,通过血凝试验筛选疑似阳性样品后再对其进行RT-PCR鉴定。在2 547份被检样品中,有4份样品呈血凝阳性,其余样品的血凝效价结果均为阴性。RT-PCR检测结果显示所有样品均为禽流感病毒核酸阴性。该研究结果为了解黑龙江大兴安岭地区鸟类AIV带毒情况以及候鸟迁徙路线上禽流感的监测提供了基础数据。 相似文献
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我国首例小反刍兽疫诊断报告 总被引：30，自引：10，他引：30
2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用次敏感的PPRV普通RT-PCR方法,从8只病羊组织中检测到PPRV核酸。针对1号样本病原核酸N基因和F基因片段进行遗传发生分析,该病原属于4系。利用竞争ELISA试剂盒对送检的13份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性。将1号组织样本接种Vero细胞分离病毒,透射电镜观察下,发现了500纳米左右的病毒粒子。对分离毒株进行PCR检测同样证实其为PPRV。 相似文献
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为调查宁夏生猪屠宰场猪流感流行情况,采集2009年12月至2011年4月份猪双孔鼻拭子和对应血清,同时收集2010年4月至2011年10月每月送检的猪双孔鼻拭子。采用血凝抑制试验对1600份血清样本进行H1和H3亚型抗体检测;采用RT-PCR方法对2391份鼻拭子进行病原学检测。血清学调查结果显示,SIV隐性感染阳性样品247份,阳性率为15．4％,临床感染阳性样品414份,阳性率25．9％;病原学调查结果表明,对鼻双孔拭子检测SIV阳性率为12．7％,对血清学检测阳性样本616份进行RT-PCR检测,阳性率为70．9％,对血清学检测阴性样品984份进行RT-PCR检测,阳性率为13．3％。调查发现,我区屠宰场SIV隐性感染十分普遍,11—4月份生猪带毒率和发病率较高,制约了宁夏养猪业的发展;生猪长途调运屠宰能加速猪流感病毒的扩散和蔓延;同时由于与其它病原微生物混合感染日趋复杂化,使得对猪病防控的难度也越来越大。 相似文献
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以地高辛(DIG)标记鸡传染性支气管炎病毒(IBV)pol基因的保守片段制成核酸探针,与IBV参考株、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽流感病毒、正常鸡胚尿囊液及正常鸡肾组织等的RT-PCR产物进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与IBV毒株的RT-PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒和组织的RT-PCR产物杂交呈阴性.敏感性试验显示,探针最低能检出约3.4pg的IBV RT-PCR产物.用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性;而用RT-PCR法扩增IBV S2基因确诊为阳性的只有29份.对人工接种IBV H52弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性.结果表明,利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性. 相似文献
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《福建畜牧兽医》2015,(6)
为初步了解该病在泉州市的流行情况,以科学有效地防控猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),采用荧光定量RT-PCR方法对2010-2012年来自泉州市各县(市、区)养殖场(户)的212份临床疑似病例样品和441份健康生猪拭子进行PRRSV病原学检测,结果显示54份疑似病例样品为阳性,阳性率为25.47%;49份拭子样品阳性,阳性率为11.11%。将PRRSV阳性病料(拭子)进行CSFV、PCV-2、PRV检测,仅有38份样品表现为PRRSV单独感染,其他均有一种或多种其他病毒感染,占样品检测数的36.89%,混合感染的占样品检测数的63.11%。通过调查表明,PRRS感染在泉州市猪群中还普遍存在和流行,并有从单一感染向混合感染扩大的趋势。 相似文献
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根据已发表的口蹄疫病毒(FMDV)基因序列设计了一对引物,扩增FMDV 3D后1/3区段,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从组织培养液中扩增出大小为489 bp的基因片段,建立了FMDV RT-PCR检测方法.该方法灵敏度高,可检测出0.01个TCID50的病毒含量;特异性好,不与其他病毒如PRV、PRRSV、JEV等发生交叉反应.阳性样品的检测结果与反向间接血凝(IHA)检测结果的符合率为100%.应用所建立的RT-PCR方法,对采自3个奶牛场的55份鲜奶样品及40份牛鼻拭子样品进行检测.结果表明,所建立的检测方法可用于奶牛隐性感染FMDV的检测. 相似文献
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塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)是最近新出现的可引起猪水泡样病变的单股小RNA病毒。为了解SVA的流行状况,采集对2016—2018年从我国辽宁等省份猪群的164份病料和2018年从我国福建等7省份35个屠宰场的458份组织混合样品和95份血清样品,用荧光实时定量RT-PCR方法进行SVA检测和分析。结果显示:在2016年的48份样品中,从3个省份检测出7份阳性样品,阳性率为14.6%。2017年的32份病料中,从5个省份检测出7份阳性样品,占比为21.9%;2018年的84份病料中,从3个省份检测出19份阳性样品,占比为22.6%。屠宰场组织样品中,从6个省份检出55份SVA阳性样品,阳性率为12.0%;血清样品中,从1个省份检出7份阳性样品,阳性率为7.4%。结果表明,我国猪群SVA感染年份至少可追溯到2016年;SVA在我国流行面相对较广,且猪群中存在隐性带毒,因此须重视猪群的SVA监视和监测。 相似文献
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为正确评估野(候)鸟在禽流感流行病学中的作用,从2005年5月开始对青海湖地区野(候)鸟进行了血样、喉气管拭子、泄殖腔(粪便)拭子和病死禽(脑组织)样品的采集,到2007年8月底,共采集样品2403份,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试验对喉气管拭子、泄殖腔(粪便)拭子和病死禽(脑组织)样品进行了病原学检测,结果出现阳性10份,其余均为阴性;采用HA和HI试验进行了禽流感血清抗体的检测,结果在4种野(候)鸟的11份血样中检出了5份AIV阳性抗体,全部为H5亚型。 相似文献
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为了快速检测并鉴别鸡舍内外空气中的新城疫病毒(NDV),应用AGI-30气体收集器在一大型商品肉鸡舍舍内外收集气体,同时采集鸡的气管和泄殖腔拭子,采用兼并引物RT-PCR检测气体样品和拭子中的NDV,并鉴别NDV的毒力;同时分离、纯化气体样品中的NDV,用常规毒力学试验鉴别分离株的毒力.结果RT-PCR检测到舍内2/15的气体样品和4/15的拭子中同时有强毒和弱毒株,3/15气体样品和13/15的拭子只有弱毒,舍外上风向5 m处气体样品检测结果均为阴性,舍外下风向5 m处1/3的样品只有弱毒;其他样品均为阴性;从RT-PCR检测为阳性的样品中分离到3株强毒和4株弱毒株;从RT-PCR检测为阴性的样品中均未分离到NDV.结果表明兼并引物RT-PCR可直接、快速对气体样品进行检测及鉴别诊断. 相似文献
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为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒（REV）的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病（RE）净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7～70日龄鸡（每隔1周）的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。结果显示：对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。对7～70日龄鸡（每隔1周）进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方... 相似文献