共查询到20条相似文献，搜索用时 31 毫秒
1.
参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒(PRV)gH基因与猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRV gH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.8℃和86.7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝/μL和180拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。 相似文献
2.
3.
参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒（PRV）gH基N与猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRVgH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEMTEasy载体,转化大肠杆菌DH5a,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRv荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80．8℃和86．7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝／μL和180拷贝μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。 相似文献
4.
《畜牧兽医学报》2018,(12)
为了评价中药活性成分牛蒡苷元(arctigenin,ACT)对猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)人工感染仔猪体内病毒的复制及组织病变的影响,选取16头30日龄健康断奶仔猪,随机分为空白对照组、攻毒对照组、给药组1(20μg·kg~(-1))和给药组2(50μg·kg~(-1))。两个给药组连续肌内注射给药3 d(空白和攻毒对照组注射生理盐水)后进行攻毒,在攻毒前2 d和攻毒后0、7、14、21 d分别采集仔猪外周血进行PCV2定量检测;攻毒后21 d将试验仔猪全部剖杀,采集腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体、肺和脾组织进行PCV2定量检测和组织病理学观察。结果显示,两个给药组均能显著降低攻毒后7、14和21 d仔猪外周血病毒核酸拷贝数(P 0. 05或P 0. 01);攻毒后21 d,给药组1(20μg·kg~(-1))能显著抑制腹股沟淋巴结(P 0. 05)、肠系膜淋巴结(P 0. 05)组织中PCV2的增殖,给药组2(50μg·kg~(-1))能显著抑制腹股沟淋巴结(P 0. 001)、肠系膜淋巴结(P 0. 01)、扁桃体(P 0. 05)和肺(P 0. 05)组织中PCV2的增殖;并且两个剂量均能减轻PCV2感染造成的上述器官组织的病理损伤。ACT对PCV2在人工感染仔猪体内的增殖有明显的抑制效果,并能减轻由PCV2感染引起的病理变化。 相似文献
5.
为了解贵阳地区规模化猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)流行情况,从贵阳市6个区(市、县)30个规模化猪场采集病死猪组织共154份,采用荧光定量PCR方法,分别进行猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸检测。结果显示,PRV和PCV2检出率分别为10.39%(16/154)和18.83%(29/154),PRV和PCV2混合感染率为5.19%(8/154)。结果表明,贵阳地区规模化猪场存在PRV和PCV2感染情况,且PCV2感染阳性率高于PRV,且存在混合感染。本次调查为今后贵阳市规模化猪场PRV和PCV2的防控提供一定的参考数据。 相似文献
6.
本试验选取11头6周龄健康仔猪(母源抗体呈阳性4头为A组;母源抗体呈阴性7头,随机选取其中4头为B组;剩余3头为C组,作为空白对照),A、B组进行人工攻毒,获得了实际生产中PCV2亚临床感染状态,采用荧光定量PCR与组织病理切片技术相结合,旨在探究机体各脏器(心、脾、肺、肾、淋巴结)组织中PCV2病毒载量与病理损伤的相关性。结果显示,A组以淋巴结、脾免疫器官的组织病毒载量最高,然而,B组,淋巴结、脾免疫器官的组织病毒载量反而偏低;组织病理学发现PCV2主要引起淋巴结、脾免疫器官的淋巴细胞坏死、损耗,肺脏间质性肺炎,肾脏间质性肾炎,心脏心肌炎等病变。相同脏器的组织病毒载量和病理损伤程度相关性统计结果表明:不同个体其相同脏器的组织病毒载量与病理损伤程度呈正相关性,而相同个体其不同的脏器之间组织病毒载量与病理损伤程度的规律性还有待进一步试验。本试验为PCV2的实践病理诊断,疫苗免疫效力评价,疾病防控提供理论参考。 相似文献
7.
为探索 H9N2 AIV感染蛋鸡致输卵管功能异常的机理,对蛋鸡感染 H9N2亚型 AIV后输卵管不同部位病毒载量与病理变化进行检测与观察。以 H9N2亚型 AIV 人工感染非免疫蛋鸡,在感染后3、5、7 d 分别采取鸡输卵管组织,real-time PCR 检测感染鸡输卵管组织中 AIV 病毒载量,同时 HE 染色后观察病理组织学变化。结果表明,real-time PCR 从鸡输卵管膨大部、峡部、子宫部和阴道部均检出了禽流感病毒,其中以膨大部和子宫部病毒载量最高,分别达5．27×104拷贝／μL±3．55×103拷贝／μL 和5．52×10 4拷贝／μL±3．14×103拷贝／μL。组织病理学观察发现蛋鸡感染 H9N2亚型 AIV 后输卵管膨大部、峡部和子宫部病变明显。观察到上皮细胞脱落坏死,炎性细胞浸润腺体,腺体间隙变大甚至溶解,腺体组织充血出血。本研究证实蛋鸡感染 H9N2亚型 AIV 后输卵管组织中 AIV 病毒载量与其病理变化存在明显的正相关。 相似文献
8.
《养猪》2021,(1)
为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)安徽分离株的毒力特征,研究以小鼠为动物模型,对13株PRV安徽分离株(代号为AH1601～AH1604、AH1701～AH1704、AH1801～AH1805)进行半数致死量(LD_(50))测定、病理剖检及病理组织学观察、各组织脏器的病毒载量检测。结果显示,13株PRV对小鼠的LD_(50)在10~(2.569)～10~(5.167)TCID50之间,其中AH1802和AH1803的LD_(50)最低,分别为10~(2.569)TCID50和10~(2.833)TCID50。病理剖检可见攻毒小鼠的肝、脾、肺、肾、脑等部位均有不同程度的出血、肿大,对照组无异常;病理组织HE检查13株PRV引起小鼠各组织脏器的病变存在差异,以AH1802和AH1803引起的病变最为严重。13株PRV安徽分离株在小鼠各组织脏器中的病毒载量存在差异,其中AH1802和AH1803在脑、肝脏、脾脏中的病毒载量显著高于其他11株(P0.05),AH1802和AH1703在肺脏中的病毒载量显著高于其他11株(P0.05),AH1601在肾脏中的病毒载量最高,AH1703、AH1704和AH1804在脑和肺脏中的病毒载量显著高于肝脏、脾脏和肾脏。结果表明,13株PRV安徽分离株对小鼠均具有较强的致病性,但来源于不同地区的各毒株之间对小鼠的致病力呈现不同。此研究丰富了安徽猪伪狂犬病流行病学资料,为深入研究PRV安徽分离株的抗原性奠定基础。 相似文献
9.
猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒，该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性，本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株，命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明，该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪，每组试验猪5头，并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示：PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象；病毒血症时间超过14 d,但21 d消失，病毒的组织分布结果表明，PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官，在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高；感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病... 相似文献
10.
实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究 总被引：3，自引：1，他引：2
根据发表的猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-GreenⅠ嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在10^7～10^1范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0．997,扩增效率为E=0．920;对质粒标准品检测下限值为8．2拷贝／μL,检测变异系数低于2．0％。该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）比较,其敏感性提高10^3倍以上。采用该法对PCV2人工感染猪的心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,在多种脏器中均可检9n,4到病毒,其中腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高（为3．4×10^9拷贝儋～1．7×10^10拷贝／g）,这表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病料的病毒载量达到10^9-10拷贝／g。实验表明,实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。 相似文献
11.
为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d~28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。 相似文献
12.
《中国兽医学报》2017,(3):398-403
将16头断奶仔猪随机分成两大组即直接感染组和间接感染组,再将每大组用ELISA测抗体水平并排序分成两小组,即高抗体水平的4头为高起始抗体组,低抗体4头为低起始抗体组。直接感染组注射PCV2攻毒后再注射钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激,间接感染组不注射与直接感染组混养。Q-PCR检测血清中病毒拷贝数,血常规检测全血中淋巴细胞数,定时称量体质量,屠宰后采样制作HE染色病理切片。结果,HE染色病理切片和临床分析显示感染猪只表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状;直接感染组和间接感染组攻毒后抗体水平持续降低,且分别在攻毒后20、30d降到相对最低值。直接感染组在攻毒后4d检测到抗原,攻毒后7d低起始抗体组病毒拷贝数显著高于高起始抗体组,间接感染组分别在攻毒后4、7d检测出抗原,攻毒后24、29d低起始抗体组抗原显著高于高起始抗体组;两组中外周血淋巴细胞数量在攻毒后减少,攻毒期间两大组中低起始抗体组和高起始抗体组体质量无差异。结果表明,PCV2+KLH能够复制出PMWS症状;PCV2母源抗体的半衰期为15d左右;低起始抗体组更容易感染病毒;攻毒后起始母源抗体的高低对断奶仔猪增重差异不明显。 相似文献
13.
为研究伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染猪场伪狂犬病的净化,采用PCR和ELISA进行病毒核酸与抗体检测,采用不同的净化方法,选取云南省3个自繁自养种猪场,A场同时净化PRV和PCV2,免疫接种PRV疫苗;B场净化PRV,免疫接种PRV疫苗;C场同时净化PRV和PCV2,免疫接种PRV和PCV2疫苗。结果表明,C场实施猪伪狂犬病净化前gE阳性率为15.94%,gB阳性率为86.96%,实施猪伪狂犬病净化3年后gE阳性率为1.43%,gB阳性率100%。结果提示,C场在同时净化PRV和PCV2,同时接种猪伪狂犬病和圆环病毒2型疫苗的模式下,净化效果最优,为地区种猪场提供疾病净化思路。 相似文献
14.
根据GenBark中登录的猪圆环病毒2型基因序列,应用PrimerPremier5.0设计筛选一对扩增ORF2基因引物,建立从猪病料中直接检测PCV2感染的PCR方法。扩增PCV2阳性样品出现一条447bp的特异性DNA条带,扩增产物测序结果证实为PCV2ORF2基因序列。应用本方法扩增猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等常见猪病原均未出现特异性条带,表明方法特异;敏感性试验结果表明,样品DNA模板检测浓度可达到9.8×10-4ng/μL;重复性和稳定性试验结果表明,用本试验建立的PCR方法进行PCV2检测,结果稳定可靠。经病猪临床检测应用,在66份病猪样本中,PCV2感染阳性率为27.27%,且多与PRRSV、PRV、HCV、PPV等一种或多种病毒混合感染,混合感染比例达72.22%。 相似文献
15.
《中国兽医学报》2020,(1):9-13
为了能够同时检测和鉴别猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)。本研究参考GenBank中公布的PRV gE基因和PCV3基因组序列,且基于PRV gE和PCV3 Rep基因的保守区域,利用Primer 5.0引物设计软件设计了2对特异性引物,随后对其扩增条件进行优化,建立了能够同时检测PRV和PCV3的双重PCR检测方法。该方法可以同时扩增PRV的429 bp和PCV3的344 bp特异性片段,而对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。PRV和PCV3的最低检测值分别为502.0和91.2 copies/μL。结果表明该方法具有良好的特异性和灵敏性。本试验建立了能够同时快速检测PRV和PCV3,且具有高度特异性和灵敏性的双重PCR检测方法,为PRV和PCV3的检测提供技术支持。 相似文献
16.
通过对PCV2阳性猪剖检,采集了心脏、肝脏、肾脏、肺脏、肾脏、大脑、肠、胃等组织样品,使用定量PCR(qPCR)对PCV2衣壳蛋白Cap基因、ERS和自噬标志基因进行定量分析。结果显示,肺脏中PCV2载量最高,其次为肝脏和肾脏含有较多病毒,小肠、心脏与大脑中病毒载量较少,胃内并未检测到PCV2。ERS和自噬在肺脏中发生最多,其次为小肠,再次为肝脏和肾脏,ERS和自噬水平较高,心脏与大脑中仅发生少量ERS与自噬,而在胃中几乎没有发生。通过透射电子显微镜观察心脏、肝脏、肾脏、肺脏、大脑、肠等组织样品。观察结果显示,所有器官中均可观察到PCV2感染,除肺脏内含量较多外其余各组织中差异不大。各组织中均可见不同数量的自噬小体与内质网应激,其中以肺脏内数量最多,其次为肠道,其余各组织中数量差异不大。电镜观察结果与qPCR检测结果一致,肺脏为病毒载量最大的器官同时也是ERS与自噬发生最多的器官,胃中几乎无病毒感染同时也几乎没有ERS与自噬发生。试验结果表明,除了小肠以外的各组织中ERS与自噬发生情况均与PCV2载量成正相关。为深入研究PCV2诱导细胞ERS和自噬的机制提供了新的理论依据。 相似文献
17.
《中国兽医学报》2016,(3):378-383
参照GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因以及猪圆环病毒2型(PCV2)中ORF2特异性序列,设计特异引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PRV野毒株和猪圆环病毒(PCV2)的双重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果表明,该方法检测PRV和PCV2灵敏度分别可达2.23×101、4.5×102拷贝/μL,均比常规PCR检测方法高100倍;同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、均为阴性,无交叉反应;对30份疑似病料进行检测并与普通PCR进行比较,结果显示,二者检测PRV的总符合率为96.67%,检测PCV2的总符合率为93.33%。本试验建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法可同时对PRV野毒株和PCV2进行早期快速诊断,可应用于病原学监测,流行病学调查等。 相似文献
18.
《中国兽医学报》2019,(7):1250-1255
为建立一种快速、特异、敏感的SYBR greenⅠ实时定量PCR方法,检测猪圆环病毒3型(PCV3)在感染猪体内的分布情况和病毒含量,本研究根据PCV3的cap基因序列设计1对引物,对反应条件、反应体系进行优化,建立了检测PCV3 cap基因的SYBR greenⅠ实时定量PCR方法,并对动物回归试验后剖检的病料组织进行了检测。结果,该方法比传统PCR方法灵敏度高100倍,可达3.04×10~2拷贝/μL,且具有良好的特异性和重复性。在不同病料组织中均可检测到PCV3,但不同感染猪、不同组织病毒检出及含量有差异,其中肝脏、肺脏、颌下淋巴结中病毒含量显著高于心脏、心包肌、肾脏等;肝中病毒拷贝数最高,达1.16×10~6拷贝/μL,表明PCV3具有一定的组织嗜性。该方法可用于PCV3的病原学监测、流行病学调查及定量研究。 相似文献
19.
为了解目前母猪和仔猪猪圆环病毒2型(PCV2)感染情况,本试验对来自于15个猪场的85份母猪血清和29个猪场的55份仔猪可疑病料(脾脏、淋巴结、肾脏等),分别采用间接ELISA和PCR法进行PCV2抗体和病毒核酸检测。结果显示,在15个猪场中,1个猪场母猪抗体呈阴性,其他14个猪场母猪抗体均呈阳性,猪场PCV2阳性检出场为93.3%(14/15),85份母猪血清抗体总阳性率为75.3%(64/85)。29个猪场的仔猪,PCV2核酸检测阳性猪场为19个,猪场阳性率为65.5%(19/29),55份仔猪可疑病料病毒核酸检测总阳性率61.8%(34/55)。可见,母猪和仔猪感染PCV2相当普遍。对母猪群PCV2抗体阳性率及其仔猪群病毒核酸阳性率进行比较发现,母猪群PCV2抗体阳性率越高其仔猪群病毒核酸阳性率却越低。 相似文献
20.
《中国兽医杂志》2019,(6)
本试验针对当前对养猪业危害严重的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV),分别建立了检测CSFV和PRRSV的双重RT-PCR方法和检测PCV2、PRV及PPV的多重PCR方法。所建立的方法对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV和PPV核酸的检出量分别为7.5 pg/μL、14.2 pg/μL、6.9 pg/μL、9.2 pg/μL和8.6 pg/μL。应用建立的方法分别对陕西省的陕南、陕北、关中等地区部分猪场采集的118份血清进行病毒检测。5种病毒的检出率分别是,CSFV为4.23%(5/118),PRRSV为22.01%(26/118),PCV2为15.25%(18/118),PRV为22.88%(27/118),从血清样品中未检测到PPV。本研究建立的检测RNA病毒双重RT-PCR和DNA病毒的多重PCR方法,为猪主要病毒其快速检测提供了可选择方法。 相似文献