共查询到20条相似文献，搜索用时 812 毫秒
1.
《中国动物传染病学报》2017,(2)
将泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因从pMD18-T-CP15重组质粒中切下,连接至pET-28a(+)原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。结果显示,重组表达载体pET-28a-CP15在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白分子量约为17 kDa。Western blot显示重组蛋白能被泰泽隐孢子虫感染小鼠血清所识别。ELISA结果显示重组蛋白免疫小鼠血清能和泰泽隐孢子虫卵囊可溶性抗原特异性反应,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。 相似文献
2.
《中国畜牧兽医》2020,(7)
为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白(命名为rMseno)对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1 632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组(P0.05;P0.01)。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平。 相似文献
3.
《中国预防兽医学报》2015,(8)
为研究细粒棘球绦虫原头蚴(Eg)重组蛋白14-3-3(r Eg14-3-3)诱导小鼠的免疫反应以及其对小鼠的免疫保护力,本研究将r Eg14-3-3免疫ICR小鼠,在三免后4周,采用原头蚴攻击感染,并采用ELISA法对小鼠血清中Ig G及其亚型、Ig E抗体水平和IL-21细胞因子水平进行检测。结果表明:免疫组小鼠血清Ig G、Ig G1、Ig G2a水平显著高于对照组(p0.05),Ig E水平则无显著性差异。免疫组小鼠和对照组小鼠在免疫后和攻击感染后IL-21水平迅速升高并在较长时间内维持相对较高水平;而且免疫组保护效率为84.47%。本研究表明r Eg14-3-3能够诱导小鼠产生高水平的特异性体液免疫反应,并且Tfh细胞也参与体液免疫应答,表明该重组蛋白可以作为预防Eg的候选亚单位疫苗或重组疫苗的有效免疫抗原。 相似文献
4.
《中国预防兽医学报》2018,(10)
本实验室前期研究通过基因组序列比对发现SEZ ATCC 35246株Ide Z基因与化脓链球菌抗体降解蛋白IdeS基因有较高同源性。为进一步了解马链球菌兽疫亚种(SEZ)中Ide Z基因编码蛋白的生物学功能及其可能在细菌抵抗吞噬过程中的作用,本研究利用pCold-SUMO重组系统表达可溶性重组蛋白IdeZ,采用体外模拟抗体降解的试验检测IdeZ蛋白降解IgG抗体的活性。结果显示,在37℃条件下,IdeZ蛋白表现出高效的抗体降解活性,体外反应10 min即可用SDS-PAGE检测到IgG降解产物;借助巨噬细胞Raw264.7细胞模型,体外模拟巨噬细胞吞噬SEZ试验检测IdeZ蛋白对抗体介导的巨噬细胞吞噬SEZ活性的影响,结果显示,IdeZ蛋白可有效抑制SEZ免疫小鼠血清或其纯化的IgG的吞噬功能。表明IdeZ蛋白有助于SEZ抵抗巨噬细胞的吞噬功能。本研究为进一步揭示SEZ抵抗巨噬细胞吞噬机制提供了新的切入点。 相似文献
5.
《中国兽医学报》2015,(8):1284-1289
根据GenBank上旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KaSPI)基因编码序列设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,将所获PCR产物克隆至pEASY-T1载体后转入克隆感受态Tans5α,经过PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后进行测序。将所获目的基因与载体pET-30a(+)相连接,然后将鉴定正确的重组表达质粒pET-TsKaSPI转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE电泳分析所得融合蛋白大小约为38 000,与预测蛋白理论值大小相符,主要以包涵体形式存在。对纯化后的重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被感染旋毛虫小鼠阳性血清所识别,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白经腹腔注射到小鼠体内检测其对小鼠的免疫保护性,结果表明,旋毛虫肌幼虫减虫率为38.3%。通过间接ELISA法检测血清抗体水平,结果显示重组蛋白免疫小鼠血清的抗重组蛋白抗体IgG总体水平显著高于感染对照组和佐剂组。 相似文献
6.
7.
根据GenBank中MIC3基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3(MIC3)基因片段,克隆到pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)后进行PCR、酶切及测序鉴定.重组质粒pcDNA3-MIC3肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测血清特异抗体;经腹腔攻击感染弓形虫GJS株速殖子,观察小鼠的生存时间.结果成功构建了pcD-NA3-MIC3质粒;免疫组小鼠血清检测到特异性抗体;攻击感染后免疫组小鼠平均存活时间较对照组明显延长.表明该核酸疫苗具有较好的免疫原性,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用. 相似文献
8.
为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白（命名为rMseno）对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1 632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组（P<0.05;P<0.01）。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平。 相似文献
9.
《中国预防兽医学报》2017,(6)
为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33(pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽r MP。纯化后的r MP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。 相似文献
10.
为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱导小鼠体液免疫应答能力,以及体外免疫血清对毒素的中和作用。结果显示,各组免疫小鼠均可以产生高滴度抗LTA和STa抗体,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠,其中蛋白免疫组血清抗体效价更高。体内外中和试验证明,实验组小鼠三免后的血清能够中和LT和STa毒素对实验鼠的毒性作用,并且能够中和LT对Y-1细胞的毒性作用,蛋白免疫组血清抗体中和效价可达到1∶89.13,明显高于灭活菌免疫组。研究表明,重组蛋白LTA192-STa13对小鼠具有良好的免疫原性,能够诱导免疫鼠产生良好的体液免疫应答,可以作为ETEC亚单位疫苗的候选抗原。 相似文献
11.
试验旨在构建pET-28a-S-SEA融合表达质粒,并评价S-SEA蛋白的免疫原性。根据大肠杆菌密码子偏嗜性,对我国猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株(GenBank:LT906620.1)的S基因与金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因(GenBank:MH053151.1)进行优化,通过柔性连接肽(GGGGS)连接后,克隆至表达载体pET-28a,得到pET-28a-S-SEA重组质粒,转化至宿主菌BL21(DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测后,对最佳表达条件进行摸索。在此基础上,将亲和层析后的重组蛋白,免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,对免疫小鼠的血清特异性抗体水平和淋巴细胞增殖指数进行检测。结果成功构建pET-28a-S-SEA质粒,且在大肠杆菌中获得高效表达;小鼠试验结果表明,纯化的S-SEA蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,促进淋巴细胞增殖,具有良好的免疫原性,为进一步研究猪流行性腹泻亚单位疫苗提供帮助。 相似文献
12.
将铝胶、ISA206和CpG三种佐剂分别与热盐酸提取的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. zooepidemicus)ATCC35246株类M蛋白配合,制成疫苗接种20日龄的小鼠,并设不加佐剂的类M蛋白亚单位疫苗免疫对照组.二次免疫后用ATCC35246株活菌攻击,铝胶、ISA206、CpG和对照组的保护率分别为75%(12/16)、81.25%(13/16)、68.75%(11/16)和56.25%(9/16).试验结果表明ISA206的免疫增强作用高于其他两种佐剂,可望与类M蛋白亚单位疫苗配合,用于预防猪链球菌病. 相似文献
13.
通过对日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中移码序列分析,设计合成1对引物,利用PCR扩增出NS1’移码片段,并将移码片段克隆入pET-32a表达载体中。重组质粒转化大肠杆菌BL21后,经IPTG于20℃过夜诱导,实现了目的片段的可溶性表达。对表达产物进行SDS-PAGE鉴定,可检测到分子质量约为25 ku的融合蛋白。以日本脑炎病毒野毒株和弱毒株感染小鼠血清为一抗,进行Western blot分析,原核表达蛋白仅与野毒感染小鼠血清发生特异性反应,说明该蛋白具有区分临床野毒感染和疫苗免疫的潜力。 相似文献
14.
为研究日本血吸虫凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP）重组蛋白诱导BALB/c小鼠的免疫保护效果,利用PCR技术扩增SjIAP基因,构建重组表达质粒pET-28a（＋）-SjIAP,诱导表达重组SjIAP蛋白,并利用重组蛋白制备兔源多克隆抗体血清。然后,选用SjIAP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用ELISA检测免疫小鼠血清中的特异性抗体水平,以及免疫小鼠脾脏淋巴细胞在SjIAP重组蛋白刺激后产生的细胞因子水平。强化免疫后,将小鼠进行血吸虫尾蚴攻虫试验,感染38 d,进行剖杀,计算虫体减虫率及肝脏减卵率。Western blot结果表明本研究制备的兔源多抗血清能特异性识别SjIAP重组蛋白。ELISA检测表明免疫SjIAP重组蛋白可诱导较高水平的IgG及IgG亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3）抗体和IFN-γ、IL-2及IL-4细胞因子。动物试验表明,免疫SjIAP重组蛋白的小鼠与PBS组相比分别获得了31.5%的减虫率和37.2%的肝脏减卵率。免疫SjIAP重组蛋白能诱导小鼠获得一定减虫和减卵保护效果,提示血吸虫凋亡蛋白抑制因子可作为抗血吸虫病的疫苗候选分子。 相似文献
15.
本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应。通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a （+）质粒上。重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）工程菌后进行过夜诱导表达，收集菌体，超声破碎后取上清，纯化出巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。将巴氏杆菌糖酵解酶进行SDS-PAGE后转入PVDF膜上，孵育C51-17株感染康复血清，孵育二抗后进行ECL显色。将糖酵解酶免疫C57BL/6小鼠，待免疫组均产生高水平特异性抗体后使用C51-17株攻毒，比较各组存活率。测序结果显示，本研究成功将巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员的基因克隆到pET-28a （+）质粒上，经诱导表达和纯化成功获得了巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。Western blotting结果显示，磷酸葡萄糖异构酶（PGI）、丙糖磷酸异构酶（TPI）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GPD）、磷酸甘油激酶（PGK）、丙酮酸激酶（PYK）能与巴氏杆菌C51-17株感染康复血清反应。免疫保护力试验显示，PGI、醛缩酶（ALD）、GPD、PGK、磷酸甘油酸变位酶（PGM）、烯醇化酶（ENO）具有一定的免疫保护作用。本研究结果表明，巴氏杆菌糖酵解酶部分成员具有一定程度的免疫保护作用，为巴氏杆菌病防控研究提供了新的依据。 相似文献
16.
谷氨酸脱氢酶(GDH)在猪链球菌35个血清型中都存在,是一种具有免疫原性的保护性抗原。本试验PCR扩增出GDH基因,酶切定向插入pET-32a中构建表达载体pET-32a-GDH,将其转化E.coli BL21(DE3)表达菌中,培养并诱导表达rGDH蛋白,产物纯化后免疫新西兰白兔,免疫攻毒保护试验检验该蛋白的免疫原性。PCR试验获得约1 300 bp的GDH基因,双酶切pET-32a-GDH表达载体获得5.4和1.3 kb的片段,IPTG诱导表达获得融合蛋白,免疫保护结果达到70%。结果表明,本试验成功构建表达猪链球菌GDH蛋白的原核表达载体pET-32a-GDH,rGDH蛋白以蜂胶为佐剂免疫模型动物后,免疫保护率达到70%,为猪链球菌亚单位疫苗的研制提供了技术支持。 相似文献
17.
绵羊肺炎支原体Y98 P30基因的克隆、表达及免疫试验 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）跨膜蛋白P30基因序列设计引物,通过PCR克隆出绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）膜蛋白P30基因片段。通过对该序列的同源性分析表明MOP30基因与Mhp P30基因核苷酸序列同源性为79%。抗原表位及跨膜结构预测的结果表明,MO P30基因与Mhp P30基因的抗原表位及跨膜结构均具有高度的一致性。该片段中含1个TGA编码Trp,而不是终止密码子。将P30基因与原核表达载体pET-28a连接构建pET-28a-P30表达质粒,转化受体菌Rossta得到重组菌株Rossta（pET-28a-P30）。经诱导后SDS-PAGE表明有30 000左右的目的条带出现;Western blot表明Rossta（pET-28a-P30）表达的30 000蛋白主要以包涵体的形式存在;小鼠免疫试验表明Rossta（pET-28a-P30）原核表达的蛋白对小鼠具有一定的保护作用。 相似文献
18.
LI Shu-guang ZHANG Na CHENG Li-kun MIAO Li-zhong LIU Ji-shan YANG Li-fang SHEN Zhi-qiang 《中国畜牧兽医》2015,42(10):2594-2599
Glutamate dehydrogenase (GDH) which exists in 35 serotypes of Streptococcus suis,is an immunogenic protective antigen.Therefore,the GDH gene was amplified by PCR method,and the GDH gene PCR fragment was inserted oriented to pET-32a to construct a new recombinant expression vector pET-32a-GDH.The E.coli BL21(DE3)(pET-32a-GDH) was cultured and induced to express the rGDH protein.New Zealand White rabbits were immunized by the purified rGDH protein for immunity protective test to determine the immunogenicity of the protein.The results showed that the recombinant expression vector pET-32a-GDH was successfully constructed,and the rGDH protein was efficiently and solubly expressed.70% of model animals immuned by the rGDH protein with propolis as adjuvant were protected after injection of Streptococcus suis type 2 as a virulent pathogen.The experiment results provided technical support for the development of subunit vaccine of Streptococcus suis. 相似文献
19.
鞭毛蛋白FliC与外膜蛋白TolC均具有免疫保护效果,其中FliC蛋白具有疫苗佐剂的特性,但目前尚未有关迟缓爱德华菌(E.tarda)FliC-TolC融合产物免疫动物的免疫效果的相关报道。为研究E.tarda FliC-TolC融合蛋白的免疫特性,本研究利用融合PCR方法扩增获得fliC-tolC片段,构建重组载体pET-28a-fliC-tolC,并利用E.coli BL21表达系统表达了融合蛋白FliC-TolC。将纯化的FliC-TolC、TolC、FliC蛋白免疫小鼠后,以E.tarda强毒株攻毒评估免疫效果;并利用斑马鱼模型进行了平行试验。结果显示,本研究克隆了E.tarda fliC-tolC基因并表达和纯化了相应重组蛋白FliC-TolC;FliC-TolC蛋白激发小鼠产生的抗体水平优于FliC、TolC蛋白单独免疫组,表明FliC-TolC蛋白具有优良的免疫原性。攻毒试验表明FliC-TolC蛋白组小鼠对强毒株可产生较好的抵抗力,相对保护率为95%;斑马鱼攻毒试验相对保护率为60%。本研究证实了E.tarda重组蛋白FliC-TolC的免疫效力,为进一步研制E.tarda亚单位疫苗提供了参考和借鉴。 相似文献
20.
根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(outer membrane protein P5,OMP5)基因序列设计1对特异性引物,以江西分离株NC0807基因组DNA为模板,扩增出OMP5基因。将其克隆到pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-OMP5,质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况和反应原性。重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫豚鼠,测定其免疫原性和保护效率。结果表明,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。表达的蛋白分子质量约为43 ku,能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别。动物试验结果表明,重组蛋白免疫后能诱导产生高水平的OMP5特异性抗体,并可显著保护豚鼠抵抗副猪嗜血杆菌强毒菌株的攻击,提示OMP5是副猪嗜血杆菌的保护性抗原。 相似文献