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1.
牛新孢子虫病PCR检测方法的建立和应用 总被引：1，自引：0，他引：1
犬新孢子虫感染是导致妊娠母牛流产的主要原因之一，准确快速地诊断是有目的治疗该病的前提。本研究根据已知的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列，设计了一对特异性引物，建立了检测犬新孢子虫的PCR技术。利用本方法可以从感染牛胎儿的脑脊液及实质脏器中扩增出1条大小为350bp的特异性核酸片段。在吉林省延边龙井地区的应用检测结果表明，流产牛胎儿中新孢子虫感染率为17％（15／90）。本方法在实际应用中快速、灵敏、特异性高，可以用于牛和其它动物新孢子虫病的快速诊断和流行病学调查。 相似文献
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乳牛流产胎儿中新孢子虫的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
在血清学调查的基础上，进行了流产胎牛体内新孢子虫的鉴定。取新孢子虫血清抗体阳性乳牛的流产胎牛的脑、心、肺、脾、肝等组织进行病理学检查，经HE染色观察到脑组织中存在类似于新孢子虫包囊样结构，经免疫组织化学染色排除刚地弓形虫包囊的存在，确认该包囊为新孢子虫包囊。同时提取流产胎牛脑组织DNA，应用新孢子虫特异性引物Np6／Np21进行PCR扩增，扩增出的特异性目的争带的序列与新孢子虫标准株Nc-1的gene5序列的一致性为98％。首次证实我国大陆流产胎牛脑组织中存在新孢子虫。 相似文献
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为了解延边黄牛犬新孢子虫NcSAG1基因特性,试验提取延边黄牛流产胎牛脑组织中犬新孢子虫DNA,应用PCR技术扩增延边黄牛犬新孢子虫NcSAG1基因,并将此基因克隆到pMD18-TSimple载体上,筛选获得重组质粒,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中,对PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的菌株进行测序,用DNASIS序列分析软件将目的基因与已发表的核苷酸序列进行同源性比较分析。结果表明:克隆的基因片段长度为681 bp,编码226个氨基酸,与GenBank中发表的NcSAG1基因(AY113004)核苷酸序列同源性为99.7%。 相似文献
4.
刘伯淳 《上海畜牧兽医通讯》1992,(5)
作者在考察468例牛流产中,确定95例胎儿的脑组织病变是原虫感染。用犬新孢子虫抗血清的免疫组织化学法进一步检查这些胎儿的组织,约94％(95例中的89例)的胎儿组织有用犬新孢子虫抗血清作免疫组织化学法着染的原虫。所有感染胎儿均源出舍饲乳牛,多数(623％)是妊娠5-6个月。感染牛群有屡发流产的报道。总的说来,在4-5年期问,从19％的流产牛检测出这种孢 相似文献
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6.
《畜牧与兽医》2020,(7)
为了查明科布多省牛只是否感染犬新孢子虫(Neospora caninum)并造成流产隐患,本文应用PCR方法,以新孢子虫NC-5为诊断靶基因,对随机采集科布多省3个检测点的120份牛血样进行DNA提取、扩增诊断,并基因测序。结果显示,成功获得了231 bp目的片段;测序结果经BLAST比对,与犬新孢子虫新西兰株(GenBank登录号:AY459289.1)同源性达99%,构建的系统发育树中,本株与犬新孢子虫聚为一支,置信度达99%。说明科布多省牛只已感染了新孢子虫;在3个检测点中,艾尔登特苏木乡感染率最高,为12.7%(7/55),总感染率为7.5%(9/120)。本文初次报道蒙古国科布多省牛群不同程度的感染新孢子虫,应该引起重视。 相似文献
7.
为了解犬新孢子虫Nc-GFP株的生物学特性,本试验采用Vero细胞培养的犬新孢子虫速殖子,腹腔接种BALB/c小鼠,观察小鼠的临床症状及发病情况,脱颈处死濒死期小鼠,无菌分离小鼠脑组织,接种Vero细胞进行连续培养,并提取脑组织DNA进行NcMAG1基因的PCR鉴定。结果显示:BALB/c小鼠接种犬新孢子虫Nc-GFP株速殖子后,先后出现被毛逆立、共济失调等临床症状;小鼠脑组织接种Vero细胞14 d后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光的犬新孢子虫Nc-GFP株速殖子和包囊;小鼠脑组织经NcMAG1基因的PCR检测,扩增出1 047 bp的目的基因条带,经测序与GenBank中发表的NcMAG1(EF580924.1)核苷酸序列的同源性为99.6%。本试验成功地从BALB/c小鼠脑组织中分离出了犬新孢子虫Nc-GFP株,为Nc-GFP株生物学特性的深入研究奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2019,(5)
为了解徐州地区家鼠犬新孢子虫的流行情况,从徐州不同地区采集家鼠脑组织样本,采用酚-氯仿法提取其总DNA,运用基特异PCR检测徐州家鼠犬新孢子虫感染情况,并将PCR阳性样本进行测序验证。共检测123份脑组织样本,41份为犬新孢子虫阳性,经测序验证均为犬新孢子虫的特异性序列,阳性率为33.3%(41/123),其中,小家鼠阳性率为42.4%(14/33),大家鼠阳性率为30%(27/90)。本研究首次报道我国家鼠犬新孢子虫的感染情况,表明家鼠作为重要的中间宿主之一,在犬新孢子虫流行中发挥一定的作用,应引起有关部门的重视。 相似文献
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新孢子虫荧光PCR检测方法的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
根据已知的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列,设计荧光定量PCR引物和荧光探针,经反应条件的优化,建立了检测新孢子虫的荧光定量PCR方法。该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应。通过对系列稀释的重组质粒进行重复性检测,Ct值的变异系数为0.50%~1.18%。应用该方法对50份牛全血和8份流产胎儿样本进行检测,有5份全血和1份流产胎儿样本为阳性,阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率（7%）高。且具有较好的特异性和可重复性,可用来对新孢子虫病快速准确检测。 相似文献
10.
本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231 bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499 F/SN/T 3499 R的最低检测量相同,为19.9 fg/μL,F2/R2最低检测量为199 fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9 pg/μL和199 fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。 相似文献