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1.
试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮（zearalenon，ZEN）对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组（C）、ZEN （30 μg/mL ZEN）、ZEN+0.5 Se （30 μg/mL ZEN+0.5 μmol/L低聚壳聚糖硒，以Se计）、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组。待细胞长至60%~70%汇合时，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液，C和ZEN组更换为正常培养液，12 h后向含ZEN组加入30 μg/mL ZEN，继续培养24 h。收集各组细胞培养液，检测碱性磷酸酶（AKP）活性；Western blotting法检测闭锁连接蛋白（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）的表达，免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况。AKP活性检测结果表明，与对照组相比，ZEN、ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se组AKP活性均显著升高（P<0.05），ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著（P>0.05）；与ZEN组相比，ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低（P<0.05）。Western blotting检测结果表明，与对照组比，ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）；与ZEN组比，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著（P>0.05），但随着Se浓度的增加，ZO-1表达水平逐渐升高，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高（P<0.05）。免疫荧光结果表明，低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象，并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布。由此说明，低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高，上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降，并调节其定位分布。 相似文献
2.
试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L），小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后，检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量，并进行体外受精（IVF）；体外受精后6 h统计受精率，24 h统计卵裂率，96 h统计囊胚率。结果显示，与对照组相比，10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；当藏红花素浓度继续增加时，卵母细胞的第一极体排出率下降，30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05），10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比，10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05），15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05），对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明，在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率，显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量，但对受精后的胚胎发育无显著影响。 相似文献
3.
【目的】 探究过氧化氢(H2O2)诱导山羊乳腺上皮细胞(GMEC)氧化损伤的最佳条件,构建可靠、稳定的氧化损伤模型,为今后探究紫大薯花青素对氧化损伤的保护机制提供模型条件。【方法】 试验采用二因子完全随机设计,第一因素为H2O2处理浓度,分别为0(对照组)、350、430、460、490、520和550 μmol/L,第二因素为对GMEC的处理时间,分别为8、11、14、17 h。舍弃细胞存活率低于60%的处理组,并根据结果重新调整处理浓度与时间。然后通过细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及培养液内乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定确定最佳的H2O2处理条件。【结果】 与对照组相比,各H2O2处理组作用8 h后GMEC存活率均显著降低(P<0.05),其中350、430、460 μmol/L H2O2处理8 h时细胞存活率分别降低至64.6%、72.9%、66.2%,基本符合细胞存活率的筛选需求(70%)。因此,选择350、430、460、490、520 μmol/L H2O2处理4、6、8、10 h进行后续试验。调整后,除4 h 430 μmol/L处理组外,各处理组LDH活性在不同处理时间下均显著高于对照组(P<0.05),并随着时间的延长逐渐升高,10 h时各处理组LDH活性均达到最大值,且与浓度呈正比;各处理组ROS含量在6 h时均显著高于对照组(P<0.05),且8 h时各处理组ROS含量较6 h均大幅度显著升高(P<0.05),说明8 h为ROS含量变化的转折点;430、490、520 μmol/L处理组MDA含量在处理8 h后均显著高于对照组(P<0.05),其中430 μmol/L处理组MDA含量在8和10 h时显著高于对照组(P<0.05);各浓度组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性在处理6~8 h时均出现不同程度的降低,且8 h时仅430 μmol/L处理组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著低于照组(P<0.05)。【结论】 430 μmol/L H2O2处理GMEC 8 h为构建GMEC氧化损伤模型最佳条件。 相似文献
4.
《动物营养学报》2021,33(9)
本试验旨在探究低聚壳聚糖硒拮抗玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的影响。试验设定为:对照组(C组)、 ZEN组(30μg/mL ZEN)、 ZEN+0.5 Se组(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、 ZEN+1.5 Se组(30μg/mL ZEN+1.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+3.0 Se组(30μg/mL ZEN+3.0μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)。测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位变化、氧化应激和内质网应激(ERS)相关蛋白的表达。结果表明:与对照组相比,添加ZEN显著增加LDH活性(P 0.05),极显著增加ROS含量(P 0.01),极显著降低线粒体膜电位(P 0.01),显著降低细胞存活率(P0.05);添加低聚壳聚糖硒可显著降低LDH活性(P0.05),极显著降低ROS含量(P0.01),显著增加线粒体膜电位(P0.05),极显著增加细胞存活率(P0.01);相比于对照组,添加ZEN显著降低转录因子E2相关因子(Nrf2)蛋白表达量(P0.05),添加低聚壳聚糖硒极显著降低Nrf2蛋白表达量(P0.01);相比于对照组,ZEN和ZEN+0.5 Se组血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达量显著降低(P0.05),ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3.0Se组与ZEN组无显著差异(P0.05),但ZEN+1.5 Se、ZEN+3.0 Se组与对照组也无显著差异(P0.05);相比于对照组,添加ZEN显著或极显著增加葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)(P 0.05)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶/蛋白激酶R样内质网激酶(P-PERK/PERK)(P 0.05)、转录激活因子4(ATF4)(P0.05)、C/EBP同源蛋白(CHOP)(P0.01)蛋白表达量;添加低聚壳聚糖硒可显著或极显著降低GRP78(P0.05)、P-PERK/PERK(P0.01)、ATF4(P0.01)、CHOP(P0.05)蛋白表达量。综上所述,低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的IPEC-J2细胞氧化损伤和内质网应激。 相似文献
5.
试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度（0、0.1、1、10和20 μmol//L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5 ℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37 ℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组（P<0.05）,而其他各冷冻组之间无显著性差异（P>0.05）;10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组（P<0.01）,极显著低于未添加白藜芦醇冷冻组（P<0.01）。温度耐受性试验结果表明,不同浓度白藜芦醇冷冻组精子37 ℃水浴1 h后的精子弯尾率以10 μmol/L冷冻组最高,与其他各冷冻组间差异极显著（P<0.01）;精子弯尾率随着孵育时间的延长而呈逐步下降的趋势,当孵育4 h时,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率与对照组无显著差异（P>0.05）。透射电镜结果表明,10 μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组（P<0.05）。上述结果表明,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可显著改善山羊冻精质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10 μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。 相似文献
6.
【目的】 研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对仔猪原代肝细胞药物性损伤的缓解作用及机理。【方法】 通过二步灌流法获得仔猪原代肝细胞，将肝细胞分为对照组(C)、JNK抑制剂组(SP)、模型组(M)和治疗组(T)，每组6个重复。对照组细胞不添加药物，SP组用2 μmol/L SP600125处理细胞，M组用80 μg/mL脂多糖(LPS)+20 μg/mL恩诺沙星(ENR)处理细胞，T组用80 μg/mL LPS+20 μg/mL ENR +2 μmol/L SP600125处理细胞，处理12 h后，收集上清测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性，收集细胞测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及肝细胞核因子-1(hepatocyte nuclear factor 1，HNF-1)和谷胱甘肽-S-转移酶A1(glutathione S-transferase alpha 1，GSTA1)mRNA的相对表达量。【结果】 与对照组相比，M组肝细胞培养液上清中ALT和AST活性均显著升高(P<0.05)，M组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均极显著降低(P<0.01)，MDA含量极显著提高(P<0.01);与M组相比，T组肝细胞培养液上清中ALT、AST的活性均显著下降(P<0.05)，T组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均显著提高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】 JNK抑制剂SP600125可通过调控细胞的抗氧化能力及HNF-1和GSTA1的表达缓解由LPS/ENR导致的仔猪原代肝细胞的药物性损伤。 相似文献
8.
旨在探讨牛分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后PERK/ATF4/CHOP通路对NLRP3炎性小体的调控作用。在BCG单独感染或与PERK小干扰RNA共处理THP-1细胞后,采用qRT-PCR和Western blot方法检测NLRP3炎性小体相关分子和PERK/ATF4/CHOP通路标志性分子在mRNA、蛋白水平的表达;在BCG单独感染或与PERK抑制剂GSK2656157共处理THP-1细胞后,分别采用qRT-PCR和Western blot方法检测NLRP3炎性小体相关分子和PERK/ATF4/CHOP通路标志性分子在mRNA、蛋白水平的表达,采用ELISA方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的释放量,采用CCK-8方法检测THP-1细胞活率,采用免疫荧光检测NLRP3与ASC的共定位。结果表明：在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,PERK、NLRP3、ASC和Caspase-1在蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高,且在24 h达到最高(P<0.001),IL-1β和IL-18的释放随时间递增,24 h达到最高(P<0.001)。在BCG单独感染或与PERK小干扰RNA共处理THP-1细胞24 h后,与未感染对照组相比,siNC+BCG感染组NLRP3、ASC、Caspase-1、PERK、ATF4、CHOP分子的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著(P<0.001)上调,而siPERK+BCG感染组与siNC+BCG感染组相比,NLRP3等关键分子的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著下调(P<0.01,P<0.001);在BCG单独感染或与GSK2656157共同作用THP-1细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组NLRP3、ASC、Caspase-1、PERK、ATF4、CHOP分子的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调,IL-1β和IL-18的释放极显著增加(P<0.001),细胞活率极显著下调(P<0.001),而BCG+GSK2656157感染组与BCG单独感染组相比,上述分子的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著下调(P<0.01),IL-1β和IL-18的释放显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少,细胞活率显著上调(P<0.05),免疫荧光的结果显示NLRP3与ASC存在共定位,且GSK2656157可以极显著抑制BCG感染引起的NLRP3和ASC的表达上调(P<0.001)。以上研究结果表明,PERK/ATF4/CHOP通路对BCG感染巨噬细胞后NLRP3炎性小体的活化具有调控作用。 相似文献
9.
试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD50为1.36×107拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC50),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC50为28.6 μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53) μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log2拷贝/mg,107 μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53 μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107 μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107 μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429 μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858 μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53 μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53 μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215 μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429 μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 相似文献
10.
试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E2+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E2组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E2+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E2+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E2+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E2+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。 相似文献
11.
本试验旨在研究黄曲霉毒素B1(AFB1)日粮添加乳酸菌(LAB)对肉鸡的生长性能、养分消化率及屠宰性能的影响。试验选用1日龄AA肉鸡公鸡240只,随机分为4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。正对照组:无AFB1日粮;负对照组:1~21d:正对照组日粮＋40μg/kgAFB1,22~42d:正对照组日粮＋80μg/kgAFB1;LAB组:负对照组日粮＋1.5×1011CFU/kgLAB;HSCAS组:负对照组日粮＋3g/kgHSCAS。试验期42d。试验结果显示,负对照组日粮显著降低了肉鸡平均日采食量和体增重(P<0.05),显著提高了料重比(P<0.05),添加LAB和HSCAS均明显改善了生产性能,且LAB组的效果优于HSCAS组。1~21d时,与负对照组相比,添加LAB干物质、能量、粗脂肪、钙和磷的表观消化率分别提高9.6%(P<0.05)、9.5%(P<0.05)、10.1%(P<0.05)、15.2%(P<0.05)和18.9%(P<0.05),添加HSCAS能将干物质、能量、粗脂肪和磷的表观消化率提高9.7%(P<0.05)、6.6%(P<0.05)、6.3%(P<0.05)和17.4%(P<0.05),且LAB组能量和钙的表观消化率显著高于HSCAS组(P<0.05)。LAB组的全净膛率和胸肌率也显著高于HSCAS组(P<0.05)。综上所述,在AFB1污染日粮中添加LAB制剂,对肉鸡的生产性能、养分表观消化率和屠宰性能均具有显著的改善作用,其作用效果显著优于HSCAS脱霉剂。 相似文献
12.
为探究葛根素对松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化的调控作用,在细胞诱导液中分别添加0、10、20、40、60和80 μmol/L葛根素进行成脂诱导分化,用油红O染色法和甘油三酯酶法检测脂肪细胞分化过程中脂滴聚集情况和甘油三酯含量以考察脂质沉积和分化效果,并确定葛根素的最佳添加浓度;用实时荧光定量PCR检测对照组(0 μmol/L)和最佳葛根素浓度添加组成脂标志基因细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)及成脂分化基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、应激蛋白(TRIB)和叉头框蛋白O1 (FOXO1)的mRNA的表达水平,用Western blotting检测PPARγ和C/EBPα的蛋白表达水平。结果表明,与对照组相比,20、40和60 μmol/L葛根素均显著增加脂滴和甘油三酯含量(P<0.05),且40 μmol/L葛根素效果最佳;实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著上调成脂标志基因PPARγ、C/EBPα及成脂分化基因ACC、FABP4、FOXO1和TRIB的表达(P<0.05);Western blotting结果显示,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著增加PPARγ蛋白表达(P<0.05)。综上所述,40 μmol/L葛根素能够促进松辽黑猪前体脂肪细胞的成脂分化和脂质沉积。 相似文献