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为明确CYP74A2基因在白粉菌诱导月季产生对甜菜夜蛾的抗性过程中的功能，并对CYP74A2作生物信息学分析，利用转录组测序获得的差异表达基因进行功能富集分析。结果表明，α-亚麻酸代谢产生的茉莉酸是白粉菌诱导月季产生对甜菜夜蛾抗性的主要挥发性成分之一，发现该通路中共有5个CYP74A2差异表达基因，分别是LOC112173678、LOC112172343、LOC112172188、LOC112173396和LOC112169957。采用qRT-PCR验证CYP74A2基因的功能，利用NCBI、KEGG等数据库找到CYP74A2同源蛋白并结合ExPASy-ProtParam、TMHMM、SignalP 6.1、MEME、SOPMA、SWISS-MODEL、MEGA 11等在线工具或软件对CYP74A2进行生物信息学分析。通过ExPASy-Protparam分析发现，CYP74A2蛋白分子量都在54.3 ku左右，是一种稳定的亲水性蛋白。该类蛋白无跨膜结构和信号肽，亚细胞定位于细胞质和叶绿体中，少量分布于质膜和细胞核内。SOPMA预测结果表明该类蛋白以α-螺旋为主，SWISS-MODEL对... 相似文献
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为获得Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)融合蛋白(fusion protein, F蛋白)和O18型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜基因A(outer-membrane proteases, OmpA)嵌合蛋白和双特异性抗体，试验首先采用基因合成技术获得Ⅶ型NDV F基因和O18型APEC的OmpA基因片段，使用同源重组技术将F基因插入到OmpA基因中，再将重组基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建嵌合表达质粒，对重组质粒中的插入基因序列进行测序鉴定；将序列正确的嵌合表达质粒转入大肠杆菌BL21(Rosetta)感受态细胞中，利用IPTG诱导嵌合蛋白表达，使用SDS-PAGE和Western-blot检验嵌合蛋白的表达情况；纯化嵌合蛋白后免疫兔获得抗血清，抗血清再经抗原亲和纯化层析柱纯化获得多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定抗体效价。结果表明：成功合成了Fo和OmpA1、OmpA... 相似文献
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