PRRSVGP5蛋白原核表达载体的构建与鉴定     

田野  张维军  田志军  吴东来  张守发 《畜牧兽医科技信息》2009,(4)

通过RT-PCR获得猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）CH-1a株GP5蛋白基因,克隆至pMDl8一T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至原核表达质粒pGEX-6p—1,构建原核重组质粒（pGEx—GPS）,转化至E．coli B1221感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白以包涵体形式得到了表达,Westernblot与间接ELISA试验分析表明,该蛋白与PRRSV阳性血清具有良好的免疫反应性。  相似文献   

乌鸡肌胃糜烂病例报告     

张守发  黄在植  鲁承  何希君 《吉林畜牧兽医》1996,(5)

1995年6月吉林省延边某养殖场饲养的2000多只育成乌鸡群中,有的鸡出现精神沉郁、食欲减退、消瘦、下痢、慢性死亡等现象。经诊断为肌胃糜烂。禽类的肌胃糜烂常发生于肉用鸡和蛋鸡,乌鸡的肌胃糜烂实为少见,现将有关情况报告如下。 1.临床症状:病鸡食欲减退,精神不振,羽毛蓬乱,鸡冠、肉髯苍白,皱缩。嗉囊膨大,腹泻,拉棕色稀便或软便,严重者拉黑褐色稀便。后躯羽毛被粪便污染。少数病鸡步态不稳,喜蹲伏,闭目缩颈,最后消瘦衰竭死亡。个别死鸡倒提双脚时,从口中流出黑褐色或淡绿色液体。病程约7～30天。 2.剖检变化:血液稀薄,呈淡红色,肌肉苍白,干燥,无光泽。少数死鸡嗉囊扩张,内充满黑褐色或淡绿色液  相似文献   

猪附红细胞体病的病理学观察   总被引：5，自引：0，他引：5  

董梅  张守发  崔成都 《延边大学农学学报》2003,25(1):44-46

用常规病理学方法，对5头患有附红细胞体病的仔猪进行病理解剖学和病理组织学观察，病理解剖学主要变化是血液稀薄，凝固不良，全身皮肤及粘膜，脂肪和脏器黄染，肝，脾肿大，病理组织学主要变化是肝，脾，肾等器官有含铁血黄素沉积和广泛的器官损害。  相似文献   

虫克星对黑熊消化道寄生虫的驱虫试验     

许应天  张守发  李松雄  金永松 《延边大学农学学报》1994,(4)

１９９４年１月份和６月份，对延边两家养熊场３８只熊进行消化道寄生虫区系普查，并在此基础上用虫克星和盐酸左咪唑进行了对比驱虫试验。结果，两种药物使犬蛔虫、犬钩虫和类圆线虫的虫卵减少率、转阴率均达到１００％，但虫克星组的排虫时间显著长于盐酸左旋咪唑组。  相似文献   

动物传染病学"三段式"实践教学体系的构建   总被引：3，自引：0，他引：3  

金鑫  鲁承  张守发  李太元  许应天  宋建臣 《中国家禽》2009,31(14)

动物传染病学是动物医学专业必修的主干专业课程,传统的实验课教学,主要是验证课堂教学的基本理论和掌握一些基本的实验方法,是一种辅助性教学手段[1,2].  相似文献   

弓形虫重组GRA3抗原单克隆抗体的制备与鉴定     

王妍  张守发  金春梅  薛书江 《安徽农业科学》2012,(12):7201+7302

为了鉴定弓形虫特异性重组GRA3蛋白的抗原表位,以原核表达并纯化的融合蛋白GRA3免疫BALB/c小鼠,利用快速免疫法进行免疫,通过ELISA进行筛选,获得8株能够稳定分泌抗GRA3蛋白特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。这8株McAbs亚类鉴定均为IgG型,特异性强,ELISA检测结果均为阳性,抗体效价均大于1∶200 000。该结果为进一步探索GRA3蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。所生产的McAb可用于免疫组化和疫苗的制备,并可大大提高诊断的特异性。  相似文献   

表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

贾立军  于龙政  张守发 《畜牧兽医学报》2012,43(3):446-452

为构建牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-AdNcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2,PCR检测重组腺病毒NcSRS2基因,IFAT和Western blotting检测NcSRS2基因在QBI-HEK293细胞中的表达,测定病毒滴度后,收集病毒液免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平.结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫NcSRS2基因大小为1 227 bp,与GenBank中发表的NcSRS2( AF061249)核苷酸序列相似性为99％;重组腺病毒Ad5-NcSRS2在293细胞中包装成功,表达蛋白的相对分子质量为43 ku,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2滴度为109TCID50·mL-1,间接ELISA检测二免后3周BALB/c小鼠血清中IgG抗体效价达1 ∶ 2 048.本研究成功构建了具有良好免疫原性的重组腺病毒Ad5-NcSRS2,为牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础.  相似文献   

新孢子虫致密颗粒蛋白截短型NcGRA7t的体外表达及免疫活性检测     

金春梅  于龙政  张守发 《畜牧与兽医》2012,44(12):57-59

为构建新孢子虫致密颗粒截短型NcGRA7t基因的原核表达质粒,研究其在体外细胞中的表达情况和免疫活性,运用PCR方法和基因克隆技术,构建了pGEX-4T3-NcGRA7t重组质粒,并在大肠杆菌中进行诱导蛋白表达,用SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白在体外的表达情况和免疫活性。结果显示:以新孢子虫的cDNA为模板,从新孢子虫Nc-1株扩增出了NcGRA7t基因,并克隆到了表达载体上。本试验成功构建了重组表达质粒pGEX-4T3-NcGRA7t,表达出的NcGRA7t重组蛋白具有免疫活性,为新孢子虫病的流行病学调查和亚单位疫苗的研究奠定了基础。  相似文献   

犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价     

焦石  贾立军  张立霞  钱年超  刘明明  黄国明  张守发 《中国预防兽医学报》2012,34(8):662-666

为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。  相似文献   

贝尼尔缓释剂的研制及其对牛瑟氏泰勒虫病的防治效果   总被引：3，自引：0，他引：3  

张守发  许应天  金永春  金在云  鞠玉琳  鲁承 《中国兽医学报》1998,(4)

选用β－环糊精制备了贝尼尔缓释剂。该制剂为细颗粒状悬浮液，颗粒大小为０．２～０．４μｍ，分布均匀，粘度小，流动性好，稳定性较好，便于肌肉注射。通过兔、牛体内的免疫学测定，证明该缓释剂的药物释放时间比对照水剂延长０．８～１倍。贝尼尔缓释剂对瑟氏泰勒虫感染的预防试验结果表明，按每公斤体重５ｍｇ的剂量一次肌注，无论对本地牛还是外地引进牛，在２个月的保护率均达１００％，染虫率仅为０．１％～１％，呈现一定水平的带虫现象，而对照贝尼尔水剂组的保护期仅为２０ｄ。在牛瑟氏泰勒虫病的早期（１０ｄ以内）使用该缓释剂进行治疗，治愈率可达１００％，区域试验结果也证明了这一点，但剂量要适当加大，按每公斤体重用药７～１０ｍｇ。  相似文献