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将pEGFP-C1质粒与脂质体混合后注入小鼠睾丸内,30d后观察睾丸形态和组织变化;检测精子和配种后仔鼠转基因阳性率,探讨小鼠睾丸网、曲精细管和睾丸间质3种注射方法对转基因小鼠生产效率的影响。结果显示:3种不同注射方法对小鼠睾丸造成损伤由大到小依次为睾丸网注射、曲精细管注射和睾丸间质注射。荧光检测小鼠精子,睾丸网和曲精细管注射法阳性率分别为(35.13±1.72)%和(15.13±1.45)%,睾丸间质注射法没有观察到阳性精子。PCR检测仔鼠,三者的转基因效率分别为33.3%、12.5%和0。 相似文献
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选取自剪切T2A和P2A肽,连接F1L和B2L基因,构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价,为羊口疮的疫苗研制提供依据。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞,包装出ORFV重组腺病毒。将重组腺病毒感染MDBK细胞,收集上清液免疫ICR小鼠,并进行间接ELISA、淋巴细胞增殖、ORFV攻毒试验等初步评价小鼠免疫效果。结果显示:成功获得pAV-CMV-F1L-T2A-B2L-P2A-EGFP重组腺病毒,其TCID_(50)为10~(-5.375)·mL~(-1),PCR和IFA检测证实目的基因在基因及蛋白水平上均有表达。ORFV重组腺病毒免疫小鼠后,其抗体水平迅速升高。ORFV重组腺病毒组对特异性抗原ORFV表现出明显的T淋巴细胞增殖能力,极显著高于PBS组(P0.01)。本文的研究结果表明:F1L和B2L基因重组腺病毒能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且未影响小鼠正常采食,保护效力较好。 相似文献
73.
以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%—15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。 相似文献
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为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景 相似文献