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为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMDI8-T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴... 相似文献
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通过测定五味子各种采光结构表面的光照强度和单位土地面积光利用率的日变化和月变化,以确定五味子生产的合理采光结构,提高产量。结果表明:不同采光结构平均光照强度顺序为:30°斜架(64.2 klx)45°斜架(53.8 klx)南北架(49.5 klx)东西架(38.8 klx),30°斜架的光照强度分别比南北架高29.7%,比东西架高65.5%;光利用率的顺序为:斜架(100%)南北架(39.3%)东西架(24.3%),斜架的光利用率分别是南北架的2.5倍,东西架的4.0倍。栽培五味子宜采用斜架。 相似文献
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116.
为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(rLEP-EGFP)。rLEP-EGFP的生物学特性和野生型LEP(wtLEP)在NA细胞和BHK-21细胞中的生长动力学及对小鼠的致病性没有显著差异。rLEP-EGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,各代次重组病毒均稳定表达EGFP。重组表达的EGFP可用于中和抗体检测,rLEP-EGFP免疫犬血清经间接免疫荧光(IFA)或荧光下直接观察检测RV中和抗体滴度,两种检测结果显示较好的相似性(p0.05)。本研究为研制以Flury-LEP株活载体多价疫苗奠定了基础,并为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法。 相似文献
117.
将原核表达重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后进行细胞融合,以昆虫细胞表达重组鸡γ-干扰素为检测抗原,筛选出阳性克隆株,经有限稀释,获得1株稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚型为IgG1型,轻链为Κ链,命名为G1株。Western blot检测显示,该单克隆抗体与原核表达和昆虫细胞表达的rChIFN-γ均具有良好的免疫反应原性。昆虫细胞表达rChIFN-γ经该G1单克隆抗体作用后,失去抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)复制的能力。利用纯化的单克隆抗体和昆虫细胞表达rChIFN-γ建立相对定量ELISA检测方法,取吸光度值(Y)对昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒活性单位对数(X)作回归曲线,回归方程为Y=0.1164~*X-0.1281,回归系数R=0.9539,具有艮好的线性关系。 相似文献
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重组杆状病毒表达裂谷热囊膜蛋白的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(RVFV)引起的烈性人兽共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为GN和GC,其中GN为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究构建了分别表达RVFV囊膜蛋白G(N+C)、GN及GC的重组杆状病毒rBac—GCN+C、rBac-GN及rBac-GC。SDS-PAGE、Western-Blot表明分子量分别为56Ku、58Ku左右的重组GN和GC在rBac—GCN+C、rBac-GN及rBac-GC感染sf9昆虫细胞中获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac—GN、rBac—GC和rBac—G(N+C)感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,检测灭活RVFV免疫小鼠血清特异囊膜蛋白GN、GC特异抗体,显示出高度敏感性和特异性。结果表明,杆状病毒表达rGN、rGC和rG(N+c)具有替代RVFV全病毒(尤其是rGN),作为非疫区安全、敏感和特异的诊断抗原的潜力,并为RvF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。 相似文献
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埃博拉病毒(EBOV)能够引起一种人畜共患急性出血性传染病,即埃博拉出血热.研制安全、有效的抗病毒疫苗具有重要意义.本研究利用水泡性口炎病毒(VSV)印第安纳株反向遗传操作系统,构建并拯救得到表达扎伊尔型埃博拉病毒(ZEBOV)囊膜糖蛋白GP的重组VSV (rVSV-ZEBOV-GP),通过westemblot和免疫荧光试验证明在重组病毒中ZEBOV GP蛋白获得正确表达;动物试验显示重组病毒对小鼠高度安全;中和试验结果表明重组病毒能诱导小鼠产生针对ZEBOV囊膜糖蛋白GP嵌合VSV假病毒粒的特异性中和抗体.本研究表明rVSV-ZEBOV-GP作为防控ZEBOV的储备性疫苗具有潜在的应用价值. 相似文献
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