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101.
102.
杉木叶片原生质体分离及RNA提取体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】以杉木组培苗幼嫩叶片为材料,分析不同因素对杉木原生质体分离的影响,建立杉木叶片原生质体分离体系,以期为杉木基因功能验证提供有效的技术平台;比较不同RNA提取方法,筛选获得杉木原生质体总RNA提取的有效方法,为今后利用杉木原生质体开展分子生物学研究提供技术支持,也可为其他林木原生质体的总RNA提取研究提供参考。【方法】选取杉木组培苗最上端未分轮的幼嫩叶片为材料,通过分析5种不同酶组合、真空处理时间(0、5、10、15、20 min)、渗透压(0.3、0.4、0.5、0.6 mol·L-1甘露醇)、BSA浓度(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%)及酶解时间(1、2、3、4、5 h)5个条件,进行杉木叶片原生质体的分离。采用改良Trizol法、改良Trizol+10μg糖原法、CTAB-Li Cl法、CTAB-Li Cl+10μg糖原法、改良CTAB-异丙醇法、改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法、天根RNA提取试剂盒法共7种方法提取杉木原生质体RNA,通过杉木内参基因和2个特异基因进行RNA质量验证,比较不同方法的提取效果。【结果】在1.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10、0.2%果胶酶Y-23、0.5 mol·L-1甘露醇以及0.3%BSA的混合酶液中,真空处理10 min,酶解2 h,可分离出高活力的纯净杉木原生质体,其产量可达到7.27×106个·g-1,活力可达到94%。7种方法皆能提取出杉木叶片原生质体的总RNA,但不同方法间存在明显差异,其中改良Trizol法、改良Trizol+10μg糖原法、改良CTAB-Li Cl法、改良CTAB-Li Cl+10μg糖原法提取的RNA有不同程度的降解现象,其余方法所提取的RNA完整性较好,且OD260/280和OD260/230值均在1.8~2.0范围内;在RNA得率方面,改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法可高效提取杉木原生质体RNA,106个细胞RNA产量平均可达到6.89μg,分别是改良CTAB-异丙醇法和天根RNA提取试剂盒法的1.73倍和1.58倍;综合考虑,改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法提取杉木原生质体RNA的效果最好。【结论】以杉木组培苗幼嫩叶片为材料,分离条件为纤维素酶R-10浓度1.5%、离析酶R-10浓度1%、果胶酶Y-23浓度0.2%、甘露醇浓度0.5 mol·L-1、BSA浓度0.3%,真空处理10 min,酶解2 h,可大量获得高质量的杉木原生质体;利用改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法,可高效提取杉木原生质体RNA,106个细胞RNA产量平均可达到6.89μg。研究结果为杉木重要性状关键基因的功能研究及其在育种中的应用提供了重要基础。 相似文献
103.
104.
以乳白石蒜Lycoris albiflora 的鳞茎作为外植体, MS 为基本培养基, 比较9 种不同配方对乳白石蒜不定芽诱导和增殖的作用。结果表明:MS +1.0mgL-1BA +0.1mgL-1NAA 是最佳的不定芽诱导培养基, 最高诱导率达到100 %;通过切割诱导得到的小鳞茎, 在MS +5.0mgL-1BA +2.0 mgL-1NAA 培养基上得到了最好的增殖效果, 最高增殖倍数达到15 ;MS +1.0 mgL-1BA +2.0 mgL-1NAA 是较好的生根培养基。表5 参11 相似文献
105.
106.
为研究大叶楠木Phoebe zhennan f.elliptical和小叶楠木P.zhennan f.oblong两种叶型楠木P.zhennan幼树叶片表观特性和光合特性差异及其影响因子,本文以2年生两种叶型的楠木为研究对象,测定叶片形态指标和夏季光合特性参数,分析影响净光合速率的相关因子。结果表明:(1)两种叶型楠木的叶面积、叶片长、叶片宽和叶脉数存在显著差异(P0.05),不同冠层的叶片也存在显著差异;(2)大叶楠木的净光合速率显著高于小叶楠木,由多元逐步回归分析与通径分析显示,影响大叶楠木净光合速率的主要因子是气孔导度、胞间CO_2浓度、叶片水分亏压、叶温和蒸腾速率5个因子,其中气孔导度起决定作用。而影响小叶楠木净光合速率是叶片水分亏压、空气相对湿度、大气二氧化碳浓度、蒸腾速率和胞间CO_2浓度5个因子,且叶片水分亏压对净光合速率影响最大。两种叶型楠木幼树在夏季需要适当遮荫和充足的水分供应,以增加光合速率与有机物积累量。 相似文献
107.
为评价高山杜鹃品种的耐旱性及对干旱胁迫的生理响应,以乡土树种云锦杜鹃为参照,系统测定了莱姆、弗吉尼亚、惠特尼3个常绿高山杜鹃品种在持续干旱胁迫和复水条件下的光合参数、叶绿素荧光参数、渗透调节物质等生理生化指标.结果表明,随干旱胁迫加剧,4种高山杜鹃的光合参数、叶绿素荧光参数均呈下降趋势;4种高山杜鹃的叶片水势均呈下降趋势,云锦杜鹃叶片水势下降幅度最小;4种高山杜鹃的相对电导率、渗透调节物质含量及H2 O2含量均有所增加,在严重干旱时达到最大值.重度干旱下弗吉尼亚受到不可逆转的损伤,复水10 d后,除弗吉尼亚全部枯死无法恢复外,云锦杜鹃、莱姆和惠特尼的各项指标均恢复并接近对照水平.经主成分分析,将14个生理生化指标简化为累计贡献率为88.67%的2个综合指标,综合评价得到耐旱性排序为云锦杜鹃>莱姆>惠特尼>弗吉尼亚. 相似文献
108.
低氮胁迫对不同光皮桦基因型苗期生长及生理生化特征的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
为探讨低氮胁迫对不同基因型光皮桦(Betula luminifera)生长及生理生化响应特性,本研究采用裂区设计,以光皮桦G49-3、G50-1和优3组培苗为材料,通过水培培养研究其在正常供氮(CK,15 mmol·L-1 $NO_{3}^{-}$)和低氮胁迫(LN,0.03 mmol·L-1 $NO_{3}^{-}$)条件下的苗期生长及生理生化响应。结果表明,低氮胁迫处理21 d后,3个光皮桦基因型的叶绿素含量、株高、地上部干重、地上氮含量和氮积累量均显著降低,其中G49-3降幅最大,G50-1降幅最小;3个光皮桦基因型根冠比、根系总根长、总表面积和平均直径均增加;叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物岐化酶(SOD)和硝酸还原酶(NR)活性降低,G50-1降幅最低。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析表明,相较于CK,低氮胁迫处理下3个光皮桦基因型叶和根中NRT1.1和NRT1.2均下调表达,而NRT2.1在根中上调表达,说明根中NRT2.1在低氮胁迫下的硝酸盐转运过程中发挥主要作用。综合隶属函数分析显示,G50-1平均隶属函数值(0.73)高于优3(0.44)和G49-3(0.34),表明G50-1耐低氮能力最强,而G49-3对低氮胁迫最敏感。本研究结果揭示了光皮桦响应低氮环境的生理机制,同时表明运用常规遗传改良手段筛选和培育耐低氮、氮高效利用的光皮桦良种是可行的。 相似文献
109.
MADS-box家族基因广泛分布于植物中,在花发育过程中起着重要调控作用。采用同源克隆结合c DNA末端快速扩增技术(RACE)在光皮桦Betula luminifera中克隆到1个MADS-box基因,命名为Bl MADS1。该基因可能存在2个不同的转录本Bl MADS1S和Bl MADS1L:前者为1 150 bp,编码254个氨基酸,具有MADS-box基因的典型结构,与欧洲白桦Betula pendula的同源基因相似性最高(97%);后者长1 312 bp,但仅含有690 bp的开放阅读框(ORF),编码229个氨基酸,缺失MADS-box蛋白的C端。这种缺失可能由内含子可变剪切造成。同源比对和系统进化分析表明:Bl MADS1属于AP1/SQUA亚家族的AGL79这一分支。定量聚合酶链式反应(PCR)表达分析表明:Bl MADS1基因在根、茎、叶和花器官中均有表达,但Bl MADS1S和Bl MADS1L这2个转录本表达模式存在差异。雄花序发育过程中,Bl MADS1的2个转录本的表达峰值均在萌动雄花序时期;而在雌花序发育过程中,Bl MADS1L和Bl MADS1S表达水平的峰值分别出现在初生雌花芽和萌动雌花序。图6表1参27 相似文献
110.
杭州地区15种丰花月季品种综合评价 总被引:1,自引:0,他引:1
采用层次分析法从观赏性状、生态学适应性和抗性等方面对杭州地区引进的15种丰花月季品种进行综合评价。结果表明:花期、花量、开花能力为影响综合价值的主要因素;根据综合评价分值将15种丰花月季品种分为4级,Ⅰ级(综合评价分值4.00)4种,Ⅱ级(3.50~4.00)6种,Ⅲ级(3.00~3.50)3种,Ⅳ级(≤3.00)2种。推荐‘仙境’、‘神奇’、‘金玛莉’、‘柔情似水’、‘桔红潮’、‘霍尔恩’、‘欢笑’、‘粉红潮’、‘金盏花’、‘火王’等10个品种为杭州地区较适合栽培应用的丰花月季种类。 相似文献