小麦黄花叶病毒P2蛋白原核表达、抗血清制备及其在感病小麦细胞中的定位     

杨狄  周燕茹  谢礼  孙丽英  陈剑平 《浙江农业学报》2014,26(3):0

通过RT PCR获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus, WYMV)扬州分离物P2基因,并进行序列分析。P2基因编码区含有2 635个核苷酸,编码一个由875个氨基酸组成的分子量72 kDa 的蛋白。在原核表达体系中,该基因的全长表达较困难,因此将P2基因的5′端和3′端各设计大约1 kb亚克隆到原核表达载体pMAL C2X中构建重组表达载体MBP P2N,MBP P2C,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达MBP P2N和MBP P2C融合蛋白。MBP P2C融合蛋白经大量诱导、纯化、制备相应抗血清。用制备的抗血清可以有效检测WYMV病叶中的P2蛋白。免疫胶体金标记实验表明在感病WYMV的小麦叶片细胞膜状内含体结构中发现有大量胶体金颗粒特异性分布,表明P2蛋白可能与膜状内含体结构有关。  相似文献   

新型抗菌蛋白内溶素在大肠杆菌中的融合表达与纯化     

李佳  刘伟  王华  严成其  王欣  陈剑平 《浙江农业学报》2014,26(2):0

抗菌蛋白E17G是一种通过基因改造获得的高效杀菌蛋白。为高效表达抗菌蛋白E17G并减少E17G的抗菌活性对大肠杆菌宿主菌的致死作用,将E17G基因克隆到原核表达载体pGEX 6P 1中,构建的重组原核表达载体pGEX 6P 1 E17G在低温下经IPTG诱导,E17G蛋白在大肠杆菌BL21中以GST E17G融合蛋白的形式表达,采用GST亲和层析纯化和收集GST E17G融合蛋白。SDS PAGE和Western blotting检测结果显示,GST E17G能在大肠杆菌中正确表达,为进一步研究E17G抗菌蛋白的生物学活性奠定了基础。  相似文献   

水稻与病原物互作蛋白质组学研究进展     

余初浪  杨勇  王栩鸣  严成其  陈剑平 《中国水稻科学》2010,24(6):647-651

植物与病原物互作的分子机制一直是植物病理学研究的热点。近年来,功能基因组学研究策略,包括蛋白质组学和转录组学,已广泛应用于基因、蛋白的功能鉴定和表达谱研究。蛋白质组学作为转录组学研究的一个互补内容,已成为系统研究植物应答病原物侵染的蛋白质表达谱和翻译后修饰的有力工具。水稻作为已完成基因组测序的单子叶植物,是研究植物与病原物互作分子机理的理想模型。因此,着重介绍了蛋白质组学的研究技术,水稻响应细菌、真菌及病毒等病原物侵染的蛋白质组学研究进展和水稻与病原物互作磷酸化蛋白质组学的概况。  相似文献   

黄瓜绿斑驳花叶病毒基因组全序列分析及病害的田间调查     

肖彩利  郑红英  吴晓花  李国景  燕飞  陈剑平 《植物保护学报》2016,43(4):529-536

为明确近年来在浙江省葫芦科作物上发生的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)基因组特征及其发生分布情况,从浙江省及上海地区的甜瓜、西瓜和瓠瓜上采集疑似样品进行RT-PCR鉴定,通过分段扩增测序的方法拼接获得基因组全序列并进行系统进化分析,利用特异性引物扩增获得CGMMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列,制备CGMMV CP抗血清进行Western-blot和Dot-ELISA检测。结果显示,来自甜瓜、西瓜和瓠瓜的3个CGMMV分离物基因组全序列均具有烟草花叶病毒属典型基因组结构特征,全部由6 423 nt构成;3个全序列间的核苷酸同源性高达99.11%~99.67%,编码的CP氨基酸同源性为100%。系统进化分析发现,CGMMV不同分离物形成2个进化相关群体,3个浙江的CGMMV分离物均位于第I组内,与已报道的中国CGMMV分离物和韩国CGMMV分离物亲缘性较高。Western-blot检测表明CGMMV CP抗血清可以与感病植株中的病毒发生特异性反应,可用于CGMMV鉴定;Dot-ELISA检测发现CGMMV在浙江省和上海市的葫芦科作物上普遍存在。  相似文献   

我国粮食作物病毒病发生与防控现状     

燕飞  孙丽英  尚佑芬  陈剑平 《植物保护》2013,39(5):33-37

近年来,我国水稻、小麦、玉米病毒病发生严重,造成重大经济损失。本文就近年来水稻、小麦和玉米等主要粮食作物上水稻条纹叶枯病、水稻黑条矮缩病、南方水稻黑条矮缩病、小麦黄花叶病以及玉米粗缩病的发生现状、防控情况,以及防控过程中存在的问题作简要概述,并展望下一阶段防控任务。  相似文献   

水稻瘤矮病毒P12蛋白抗血清制备及其应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

孟媛  辛星  羊健  张恒木  王建明  陈剑平 《植物保护学报》2013,40(5):413-417

为了进一步研究水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)P12的功能,将RGDV-GX P12编码区亚克隆至原核表达载体,并导入大肠杆菌诱导表达;重组的P12融合蛋白经Ni-NTA His·Bind Resins纯化后用于免疫小鼠制备抗血清,并进行Western blotting分析。结果显示,约41 kD大小的RGDV P12融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达;利用该重组蛋白所制备的抗血清可特异地与融合表达和非融合的P12蛋白发生强烈的免疫学反应。利用该特异性抗血清在病毒粒子样品中检测不到P12蛋白,而在病株总蛋白样品中可检测到1条与预期大小一致的明显条带,表明RGDV P12是一种非结构蛋白。  相似文献   

基因芯片技术在水稻研究中应用进展     

张津津  严成其  金志华  陈剑平 《浙江农业学报》2008,20(4):0

随着"后基因组时代"的到来,基因芯片技术成为研究功能基因组学最重要的手段之一.文章简述了 .基因芯片技术的基本原理及其在生命科学领域的应用,并主要从基因表达水平检测与基因功能鉴别,新一代分子标记一单核甘酸多态性(SNPs),miRNA表达调控三个方面,阐述其在水稻研究中的应用进展.  相似文献   

国内外植物组培技术的差距   总被引：2，自引：0，他引：2  

徐刚  陈剑平  汪一婷  吕永平  牟豪杰 《中国花卉园艺》2008,(3):20-22

植物组培苗的商业化应用始于20世纪70年代美国兰花工业,以后欧美和日本等发达国家也纷纷建立起植物组培公司。据欧洲及地中海植物保护组织（EPPO）1991年公报,西欧国家共有248个植物组培微繁公司,重点是繁殖那些经济价值较高的观赏植物,如洋兰、康乃馨、丝石竹、非洲菊、月季、杜鹃、百合、红掌、剑兰、玉簪、蕨类、大花萱草、六出花等共30余种植物。  相似文献   

土传小麦花叶病毒基因组结构和RNA2自发缺失的研究     

陈剑平 《浙江农业学报》2000,12(5):241-250

描述了土传小麦花叶病毒（ｓｏｉｌ－ｂｏｒｎｅ ｗｈｅａｔ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ,ＳＢＷＭＶ）的基因组结构,并将之与一些植物病毒作比较。发现重复摩擦接种或在高温下（２５￣３０℃）培养引起的ＳＢＷＭＶ部分ＲＮＡ２序列迅速缺失。在最初几次重复摩擦接种后,小麦病株存在野生型ＳＢＷＭＶ ＲＮＡ２和几个不同大小的外壳蛋白通读（ＣＰ－ＲＴ）基因的缺失突变体。在以后的几次重复摩擦接种后,一个缺失突变体成为占优  相似文献   

基于水文水动力模型的浦阳江流域洪水情景模拟     

王旭滢  阮跟军  马婷  陈剑平  孙晓峰  钟华 《中国农村水利水电》2021,(2):113-118

浦阳江流域地形复杂,包括山丘、盆地和平原.中游诸暨盆地是人口主要聚集地,受上游山区洪水和下游钱塘江潮位顶托影响,洪涝灾害形势严峻.为解决上述问题,本文对流域上游山区采用新安江水文模型模拟降雨径流过程,对下游盆地区采用IFMS一、二维水动力模型模拟水流运动,并以水文模型的计算结果作为水动力模型的边界条件进行水文水动力模型...  相似文献