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993.
微量Bradford法测定提纯禽结核菌素蛋白含量 总被引:4,自引:0,他引:4
研究用96孔微量板Bradford法测定提纯禽结核菌素蛋白含量。通过不同浓度的待测禽结核菌素与考马斯亮蓝G-250溶液混合后,在595nm光波下测定各孔样品的OD值。微量Bradford法检测禽结核菌素的线性范围是50—1000μg/mL,相关系数为0.999,最低定量限为50μg/mL。试验用3支禽结核菌素国际参照品,分别配制成125、250、500μg/mL三种不同浓度,每支每种浓度测定4次,计算实际测得的蛋白质浓度。结果显示,批内相对标准偏差为1.6%~4.4%;批间相对标准偏差0.7%-2.2%。研究结果表明微量Bradford法可作为测定禽结核菌素蛋白含量的一种方法。 相似文献
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伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的家畜及野生动物发病的急性传染病。猪伪狂犬病患病猪年龄不同,其临床症状也有差异,哺乳仔猪出现发热、神经症状、消化道症状,死亡率极高;成年猪呈隐性感染;怀孕母猪发生流产、死产及延迟分娩。猪瘟则是猪场免疫失败的常发病。滦南县一种猪场发生伪狂犬与猪瘟混合感染的病例,现将相关情况报告如下。 相似文献
996.
山羊RORα基因的克隆、表达载体构建及功能分析 总被引:1,自引:1,他引:0
旨在克隆山羊维甲酸相关孤儿受体α(RORα)基因并构建其真核表达载体,然后利用生物信息学工具系统分析RORα的生物学特性,最后对其在山羊生物钟系统中的作用机制进行初步探究。本研究以1只健康的12月龄雄性西农萨能奶山羊为试验动物,提取其肝组织总RNA,经逆转录PCR反转录为cDNA后,利用常规PCR扩增山羊RORα基因的编码区(coding sequence,CDS)片段,使用同源重组法将其与pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体相连接; 重组载体经PCR、酶切和测序鉴定后,将阳性质粒命名为pcDNA3.1-3HA-gRORα; 将pcDNA3.1-Puro-N-3HA和pcDNA3.1-3HA-gRORα质粒分别转染至HEK293T细胞后,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blotting,WB)技术检测山羊RORα的表达; 同时利用ExPASy、ProtScale等软件对山羊RORα基因进行系统的生物信息学分析。另外,使用同源重组法分别构建含有山羊生物钟基因BMAL1和NR1D1启动子片段的pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc及pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc的荧光素酶报告质粒,并通过双荧光素酶报告试验探究山羊RORα蛋白调控BMAL1和NR1D1基因启动子转录活性的作用机制。PCR、酶切和测序鉴定结果表明,pcDNA3.1-3HA-gRORα重组质粒构建成功; qPCR和WB结果显示,pcDNA3.1-3HA-gRORα转染组RORα基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平均显著高于pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组(P < 0.01)。生物信息学分析结果显示,山羊RORα基因CDS区序列与绵羊、牛和猪的相似性较高,分别为97.5%、97.1%和95.2%。山羊的RORα蛋白是一种亲水性蛋白。二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,有信号肽的概率较小,无跨膜区; 三级结构与小鼠和人的RORα蛋白差异性极小,三者具有高度相似性。此外,PCR、酶切和测序结果表明,pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc和pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc重组质粒构建成功。双荧光素酶报告试验结果表明,山羊RORα蛋白可以显著上调山羊BMAL1和NR1D1基因启动子的转录活性。本研究成功构建了山羊RORα基因的真核表达载体,并证明了RORα蛋白可以正向调控山羊BMAL1和NR1D1基因的启动子活性,这为进一步探究山羊核受体RORα的功能及山羊生物钟的转录调控机制提供了前期基础。 相似文献
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In order to study 5 cultivation models such as arbor-shrub, arbor-shrub-herb and their disposition for vegetation recovery, 10 arbor species, 7 shrub species and 5 herb species suitalde for locat sites were choiced at waste heap platform of Fushun Coal Mine. The experiment adopted the randomized block design, three replicates, with 0.067hm^2 at each thinned plot. The experiment results of 2-year vegetation recovery showed that the survival rate of woody plants was significantly different among species and there existed significant differences in ground diameter and height increments. The results of the initial stage of the experiment showed that the disposition of A and C were the optimal cultivation models, and Robinia pesudoacacia, Hippophae rhamnoides, Amorpha fruticosa, Caragana chamlagu,Ulmus pumila were the best tree species for arbor-shrub-herb disposition. 相似文献
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