鲇POMC cDNA的克隆与表达分析     

丁炜东  曹哲明  曹丽萍 《中国水产科学》2011,18(5):1000-1010

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出鲇(Parasilurus asotus)垂体阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因全长cDNA序列,共1 099 bp,包括129 bp 5′非翻译区、648 bp阅读框以及322 bp 3′非翻译区,阅读框共编码215个氨基酸,POMC前体蛋白的结构主要由信号肽(Met1-Ala28)、N端多肽(Gln29-Asp102)、促肾上腺皮质激素(ACTH,Ser 105-Met144)、α-黑色素细胞刺激激素(α-MSH,Ser105-Val 117)、促肾上腺皮质激素样中叶肽(CLIP,Arg123-Met144)、γ-促脂解激素(γ-LPH,Glu145-Ser158)、β-黑色素细胞刺激激素(β-MSH,Asp161-Ser177)和β-内啡肽(β-EP,Tyr178-Leu215)构成。分子量计算值为24.66 kD,理论等电点为7.25。同源性分析表明鲇与斑点叉尾的相似性高达88%,其构成多肽中α-MSH、β-MSH、β-EP、CLIP保守性逐渐降低,而γ-MSH、连接肽(JP)、γ-LPH是变异比较大的区域...  相似文献   

半微量全血培养法制备罗非鱼染色体标本的条件探索     

曹丽萍  丁炜东 《上海海洋大学学报》2005,14(4):457-459

鱼类染色体的制作方法最常用的是PHA体内培养肾细胞制片法,对野外没有良好设备的情况,此法尤为适用,但这种方法要求剖杀鱼,不利于鱼种的保存,尤其是对稀有鱼类和种鱼不太合适。因此建立一种一般实验室能够开展的方便稳定的染色体制片方法势在必行。大量研究证实采用鱼类外周血淋巴细胞培养制备染色体的方法能有效地解决这些问题 。本研究以罗非鱼为材料,对鱼类外周血淋巴细胞培养条件进行了探索,初步建立了能够制备优质染色体制片的方法,为进一步研究染色体的结构、基因定位、荧光原位杂交等奠定了基础。  相似文献   

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素及相关肽基因的克隆与表达     

丁炜东  曹丽萍  李建林  吴婷婷 《大连水产学院学报》2006,21(3):207-211

采用RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约386 bp的目的序列GnRH/GAP,先将其克隆到T载体上,通过酶切鉴定、序列测定分析,确认序列的正确性后,将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH/GAP,再转化到大肠杆菌TB1中,经IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的相对分子量约56 000的融合蛋白。  相似文献   

不同林龄橡胶林土壤细菌群落组成及多样性研究     

孙树晴  丁炜  孙瑞  张希财  兰国玉  陈伟  杨川  吴志祥 《中国农学通报》2022,38(9):93-100

为了了解不同林龄橡胶树土壤细菌群落的组成及多样性,以5点取样法采集土壤样品,用高通量测序测得3种龄林土壤细菌群落组成、多样性及季节变化数据。酸杆菌门、绿弯菌门、放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门呈显著性差异,硝化螺旋菌门呈极显著性差异。酸杆菌纲、放线菌纲、γ-变形菌纲、鞘脂杆菌纲呈显著性差异,纤线杆菌纲、OPB35_soil_group、芽孢杆菌纲呈极显著性差异。norank_c__Acidobacteria、变异性杆菌属、Candidatus_koribacter、norank_o__JG30-KF-AS9呈显著性差异,norank_c__OPB35_soil_group、醋酸杆菌杆菌属呈极显著性差异。3种林龄土壤细菌群落Simpson指数、Sobs指数、Ace指数和Shannon指数无显著性差异。季节对微生物群落解释度为24.60%。变形菌和酸杆菌是最丰富的细菌群,多样性指数无显著性差异,季节是影响群落结构及多样性的重要因素。  相似文献   

不同光照周期下黄鳝不同组织DNA甲基化的MSAP分析     

魏国华  曹哲明  丁炜东  邴旭文 《华中农业大学学报》2015,34(6):101-107

为研究光照周期对黄鳝不同组织的基因组DNA甲基化的影响,设置3个不同的光照时间(8、10和12h)处理,对黄鳝心、肝、脾、肾、肠、肌肉和脑等组织基因组DNA甲基化用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术进行分析。结果显示,不同组织基因组DNA对光照时间有不同的反应。其中,肌肉基因组DNA甲基化对光照周期的变化较为敏感,不同光照周期下肌肉基因组DNA总甲基化差异显著,光照周期为12h半甲基化和其他处理相比差异也很显著;肾脏和脑的基因组DNA甲基化对光照周期变化最不敏感,各处理组之间全甲基化、半甲基化和总甲基化差异都不显著;肝脏、肠、脾和心脏表现比较复杂,其中肝脏不同处理下基因组DNA半甲基化和总甲基化差异都不显著,光照周期为8h时,全甲基化差异显著;肠不同处理下基因组DNA全甲基化、半甲基化差异不显著,在光照周期为10h的处理组的总甲基化和其他处理组差异显著;脾脏在光照周期为10h和8h时全甲基化和总甲基化各处理组差异显著,在光照周期为12h时半甲基化和其他处理组差异显著;心脏在光照周期为10h时半甲基化和其他处理组差异显著。  相似文献   

春季中果型西瓜品种筛选试验初报     

相玉苗  芦金生  高会芳  夏冉  丁炜 《农业科技通讯》2013,(9)

为丰富北京市西瓜品种多样性,引进新品种沙蜜佳1号、天骄2号、华欣1号、日本SL-BFK与本地品种京欣2号进行比较,在生长重要时期测定西瓜主蔓长、叶片数、最大叶面积、茎粗,收获后进行品质和产量的测定,结果得出:沙蜜佳1号中果型西瓜品种综合品质表现突出,有皮薄,皮硬度较大耐裂性好,纤维少,口感优等特点,中心及边部可溶性固形物较高分别为11.9％和7.6％,亩产量为4 204.69 kg/亩,有很好的推广价值.  相似文献   

黄鳝Dmrt3基因在性腺中的甲基化差异   总被引：1，自引：0，他引：1  

宋颖  邴旭文  曹哲明  丁炜东 《中国农学通报》2014,30(35):126-131

DNA甲基化修饰是真核生物最常见的表观遗传现象之一,是一种可逆的过程,能够直接影响到基因的活性。黄鳝具有性逆转的特点,对于黄鳝的性别控制相关基因我们选择了Dmrt3基因,该基因已经证明在鱼类雌雄性腺中存在表达差异。黄鳝的Dmrt3基因编码的mRNA全长为1413bp,编码470个氨基酸。我们通过比较Dmrt3基因在雌雄性腺中甲基化状态就可以简单了解这些基因的开关状况。用甲基化敏感的限制性内切酶Hpa II酶切黄鳝的雌雄性腺,根据已知的mRNA序列设计相关引物扩增酶切产物,与未酶切的对照组进行比较,分析差异条带并验证结果,发现Dmrt3-FR2扩增序列中,精巢是去甲基化的,而卵巢是甲基化状态。所以此位点很可能与性别调控相关。本实验为黄鳝性别调控的相关研究提供一种分子学角度的方法。  相似文献   

黄鳝粘液雌雄差异的cDNA-SRAP分析     

胡彬  曹哲明  丁炜东  邴旭文 《华中农业大学学报》2017,36(3):74-78

采用cDNA-SRAP技术对黄鳝雌雄粘液进行基因差异表达分析,筛选黄鳝体表粘液中与性别相关的分子标记。从64对引物组合中筛选出12对引物组合,共获得123个稳定清晰的扩增位点,并筛选出4条雌雄有差异的条带。这4条特异性条带经过回收、克隆、测序后,将测序结果进行Blast分析,结果发现在GenBank中只有片段1与白鳍豚硫酸盐/硫代硫酸盐CYSA样进口ATP结合盒蛋白有较高的同源性。根据片段1的序列设计1对引物进行半定量RT-PCR反应,结果发现,片段1在雌雄黄鳝体表粘液均可获得扩增条带,但其在雄性粘液中的表达量显著高于雌性。这可能是由于雌雄黄鳝粘液中所存在的表皮细胞和粘液腺细胞有差异所致。  相似文献   

检测新城疫病毒中和抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法的初步建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

丁炜东  曹丽萍  张体银  刘秀梵  张如宽  吴艳涛 《中国兽医杂志》2005,41(3):13-16

鸡新城疫(ND)是由鸡新城疫病毒引起的急性传染病，是对养禽业危害最大的禽病之一。融合蛋白(F)是NDV的主要保护性抗原，对新城疫的免疫保护起着重要的作用。基因工程苗是防治ND的一种新型疫苗，本室在前期研究中，以282E4株鸡痘病毒为载体表达了NDV F40E8株的F基因，在SPF鸡上显示了较好的保护效力，但F蛋白激发机体产生的中和抗体用常规的HI试验无法测出抗体效价。  相似文献   

奥利亚罗非鱼SOX9基因cDNA全长的克隆及分析     

曹丽萍  俞菊华  殷国俊  李建林  丁炜东 《上海海洋大学学报》2008,(1):6-11

SOX9基因是重要的转录调控因子,与性别分化形成密切相关.以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)为研究材料,使用RT-PCR和RACE法分离和克隆了奥利亚罗非鱼卵巢中SOX9基因cDNA的全长序列.序列全长1 582 bp,其中5'端非翻译区长71 bp,3'端非翻译区长75 bp,开放性阅读框长1 437 bp,编码478个氨基酸.其中第98位开始共81个氨基酸为HMG保守盒.将奥利亚罗非鱼SOX9基因与虹鳟等八种动物的氨基酸序列相比较发现,它们同源性达75%左右,表明SOX9基因在进化中较保守.  相似文献