PCR及核酸探针检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

杜沂平  邹玲  刘文华  任慧英 《中国农学通报》2008,24(10):43-46

为了解耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽间的存在情况,本试验建立针对mecA基因的PCR方法及地高辛标记核酸探针技术,分别用两种方法对75株葡萄球菌分离株进行检测。结果,经PCR方法检出42株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的56.0%;经核酸探针方法检出47株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的62.7%,两种方法的总符合率为93.3%。通过本研究证实,在畜禽的体表及体内能够分离到耐甲氧西林葡萄球菌,且有较高的分离率,应该引起兽医工作者的足够重视。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒cDNA探针的制备及初步应用     

任慧英  李文立  杨汉春 《中国兽医学报》2000,20(5):438-440

以猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS)病毒 ATCC VR-2 332株基因组为模板 ,通过 RT-PCR扩增出 586bp的 ORF6片段的 c DNA。将该片段克隆进 p GEM-T easy载体 ,转化大肠杆菌 JM1 0 9,成功获得重组质粒转化菌。将重组质粒经 Eco R 及 Sma 双酶切 ,回收到 1个 4 63bp的 c DNA片段 ,并制备出地高辛标记的c DNA探针。特异性检测表明 ,该探针对 PRRS病毒的 PCR产物呈现特异性 ,而对照的 HCV、PPV、PRV的核酸均呈阴性 ;敏感性检测表明 ,该探针对同源 DNA的检出限量为 4 pg。应用该探针对 6株 PRRS病毒北京分离毒及 ATCC VR-2 332株感染细胞进行原位杂交检测 ,结果均呈阳性。以上结果表明 ,该探针可成功用于组织原位杂交检测  相似文献   

PRRSV SD-1株ORF7基因的克隆、测序及原核表达载体的构建     

李俊  王金宝  任慧英  朱新产  袁小远  周顺  张祯涛 《动物医学进展》2006,27(4):64-68

参照PRRSV ATCC VR2332株基因序列设计1对引物P1、P2,经RT-PCR扩增出PRRSV SD-1株ORF7基因,经与PMD18-T Vector连接后筛选出阳性克隆株测序。把PRRSV SD-1株ORF7 cDNA亚克隆到PQE上构建PQE-N原核重组表达载体。结果表明,PRRSV SD-1株ORF7核甘酸序列与PRRSV ATCC VR2332株ORF7核甘酸序列完全一致,与欧洲株LV符合率为58%。成功构建原核表达载体PQE-N,为N蛋白的研究和制备诊断性抗原奠定了基础。  相似文献   

驴源马疱疹病毒8型的分离鉴定与生物信息学分析     

王彤彤  刘梦媛  张敬文  郗灿坤  贾淑楠  于跃  刘文强  任慧英  王长法  李亮亮 《中国畜牧兽医》2021,48(8):3030-3037

本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型（Equine herpesvirus type 8，EHV-8）毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织，经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况；对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨，经反复冻融后接种于兔肾细胞（RK-13）细胞中，盲传3代，待出现细胞病变（CPE）时收集细胞，并通过PCR、间接免疫荧光试验、透射电镜等技术对EHV-8进行鉴定。利用PCR扩增获得分离株的ORF70全基因组序列，并进行生物信息学分析。研究结果显示，经PCR鉴定获得EHV-8感染阳性的肺脏组织，病料接种易感细胞RK-13后出现典型CPE，分别收集前3代的细胞培养物，经PCR扩增，均获得与预期大小一致的ORF70基因片段，将分离获得的EHV-8毒株命名为SDLC66，序列上传GenBank，获得登录号：MW816102。经测序和序列比对发现，SDLC66毒株与AHV-3毒株（GenBank登录号：U24184.1）ORF70基因的相似性为99%，与国内的EHV-8 wh毒株（GenBank登录号：JQ343919.1）、国外EHV-8/IR/2015/40（GenBank登录号：MF431614.1）、EHV-8/IR/2003/19（GenBank登录号：MF431611.1）参考毒株的相似性最高，均为99.8%。经遗传进化树分析发现，SDLC66与EHV-8（EHV-8 wh、EHV-8/IR/2015/40和EHV-8/IR/2003/19株）在一个小分支上，亲缘关系最近；与EHV-1型参考毒株（Hong Kong/57/1984、United Kingdom/32/1982、Oxfordshire/206/2013株）序列来源于同一大分支，亲缘关系较近，与EHV-4毒株（91c1和TH20p株）亲缘关系较远。间接免疫荧光试验可见与病毒蛋白特异结合的红色荧光信号；透射电镜观察可见直径约110 nm的圆形病毒粒子，并且核衣壳外有一层亮晕，亮晕外有一层囊膜。说明本试验成功分离得到1株驴源EHV-8毒株，为进一步研究其致病性和致病机制奠定基础。  相似文献   

噬菌体发酵工艺的影响因素     

庄盈婷  孙虎芝  潘强  王佳存  刘爽  刘广芹  刘慧  任慧英 《动物医学进展》2018,(10)

噬菌体的发酵工艺主要涉及前期菌种的筛选、宿主菌的选择、发酵的接种量、发酵培养基及后期各种发酵参数的控制。其中选择发酵性能优良的菌种和宿主菌是噬菌体发酵的基础,筛选适宜的发酵培养基是影响噬菌体发酵的主要因素,噬菌体发酵过程中各项参数的控制是噬菌体发酵的重要影响因素。随着噬菌体治疗被人们广泛地认同,噬菌体产品也在食品和药品行业发挥越来越重要的作用,针对噬菌体发酵工艺的研究也就成为噬菌体产业发展的前提。  相似文献   

水貂源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验     

史晓洁  于晓妍  邹玲  刘文华  张灿  任慧英 《经济动物学报》2018,(3)

为了对山东省水貂出血性肺炎病例进行微生物学诊断,采用细菌分离、PCR扩增、基因序列比对等方法对分离菌进行鉴定,并对分离率最高的铜绿假单胞菌进行药敏试验。共分离出65株菌,其中铜绿假单胞菌17株。药敏试验结果表明:铜绿假单胞菌对哌拉西林、环丙沙星、替卡西林、头孢吡肟和氨曲南的耐药性达到80%以上;对阿米卡星、亚胺培南和美罗培南的敏感性很高。  相似文献   

噬菌体Bp7耐受株K12-R生物学特性分析     

陈培培  齐心  王薇  任慧英  刘文华  张灿 《畜牧兽医学报》2018,(2)

宿主菌E.coli K12的突变株K12-R不能被噬菌体Bp7裂解,为了明确其产生耐受的原因以及突变对其生物学性能的影响,对K12-R进行全基因组测序,分析其产生耐受的原因,浊度测定K12-R的生长曲线和自凝能力,革兰染色检测K12-R生物膜的形成能力,比较K12-R和E.coli K12之间生物学性能的变化。结果表明,突变株K12-R脂多糖合成相关基因hldE发生了突变,突变株K12-R细胞膜通透性增加,生长繁殖能力降低,自凝能力增强,生物膜形成能力增强。E.coli K12的脂多糖合成基因hldE突变能够改变K12-R脂多糖的结构,从而抑制噬菌体Bp7的吸附。这为明确K12-R突变株对噬菌体Bp7的耐受机制研究提供了理论依据。  相似文献   

谷氨酰胺对热应激肉鸡盲肠微生物区系的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

康磊  李文立  姜建阳  李方正  任慧英 《中国兽医学报》2013,33(1):80-84

选用1日龄科宝-500肉鸡240只,随机分为6个处理组,每处理组4个重复,每个重复10只.Ⅰ组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别在基础日粮中添加0.4％、0.8％、1.2％、1.6％和2.0％谷氨酰胺,试验时间15～42日龄,共28 d.试验期间从每天早上9:00到下午17:00温度维持在(35±1)℃,下午17:00至次日上午9:00温度维持在(30±1)℃,鸡舍相对湿度控制在70％～80％.试验测定了热应激条件下28、35、42日龄肉鸡盲肠内乳酸杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭茵、大肠杆菌的数量.结果显示,日粮中添加谷氨酰胺显著提高了28、35、42日龄热应激肉鸡盲肠内乳酸杆菌、双歧杆菌的数量(P＜0.05),显著降低产气荚膜梭菌、大肠杆菌的数量(P＜0.05).结果表明,在基础日粮中添加一定水平的谷氨酰胺可维持热应激肉鸡的肠道微生物区系的稳定.  相似文献   

种鸡饲养环境和死胚中沙门菌的分离及其对药物和噬菌体的敏感性测定     

王欣为  汤朝晖  赵永达  任慧英  张灿  邹玲  刘宗柱  刘文华 《中国家禽》2022,(1):108-112

为了解某肉种鸡场沙门菌感染来源、类型及其对药物和噬菌体的敏感性,研究对种鸡场内外养殖环境和孵化场死胚进行了沙门菌采样检测.样品通过亚硒酸盐胱氨酸增菌液增菌培养后接种显色培养基进行沙门菌分离,并通过生化试验、PCR和血清型进一步鉴定;通过MIC测定了解沙门菌分离株对10种抗菌药物的药敏性;通过双层平板法检测了一株沙门菌噬...  相似文献   

大肠杆菌噬菌体抗性菌株与其敏感菌株的比较研究     

崔嘉琪  孙蓉蓉  张灿  刘文华  邹玲  任慧英 《中国预防兽医学报》2022,(2):134-139

噬菌体抗性菌株的产生是噬菌体治疗领域普遍关注的问题,为研究噬菌体的抗性菌株与其敏感菌株之间的的差别,本研究将大肠杆菌短尾噬菌体Bp4与宿主大肠杆菌共培养,经双层平板法筛选,结果显示获得了对噬菌体具有抗性的大肠杆菌,且该抗性菌株不能被Bp4裂解.将该抗性菌株与其敏感菌株进行了形态及培养特性的比较,发现二者基本一致;基因组...  相似文献