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奶牛妊娠的早期诊断至关重要,妊娠相关糖蛋白6(PAG6)是母体胎盘组织分泌至外周循环中的特异蛋白质,因此,本研究致力于制备牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条。制备牛妊娠相关糖蛋白6多克隆抗体,将其稀释后加样至NC膜上,通过固定和封闭制备出一种可检测boPAG6的快速检测试纸条,在试纸条上加入待检血清进行孵育后洗涤,再加入二抗孵育后洗涤,最后加入显色液显色后进行快速检测。标准化快速检测试纸条是将抗体用PBS稀释成10μg/mL点样至NC膜上,在37℃温箱中固定抗体30 min,经5%的脱脂奶粉封闭后制成。待检血清滴加至试纸条后,在37℃温箱中孵育1 h后,进行洗涤和二抗孵育,最后在DAB显色试剂盒作用下显色3 min即可判定。临床检测的初步应用表明,在未孕与怀孕奶牛的混合血清中仍然可以判定是否怀孕,快速检测试纸条特异性强;血清在稀释3200倍的最低检测限时,快速检测试纸条的敏感性良好;而且该结果与ELISA的符合率在80%之上。试验重复性良好,并能在4℃和-20℃条件下保存2周。建立了一种奶牛早期妊娠诊断的快速检测试纸条并应用于初步的妊娠诊断。 相似文献
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绵羊子宫内膜上皮细胞的纯化培养与鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
为了探索一种分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞的简便高效方法,本试验采用先组织块培养后消化纯化和直接消化后过筛纯化两种方法对绵羊子宫内膜上皮细胞进行培养、纯化,最后用免疫荧光方法对上述方法得到的细胞进行角蛋白检测从而鉴定上皮细胞纯度。结果表明先组织块培养后消化纯化法可以得到纯度95%,且形态均一、活性良好的绵羊子宫内膜上皮细胞;先消化后过筛纯化法得到的子宫内膜上皮细胞形态良好但是纯度仅为70%,与前一方法相比有待提高。因此,先组织块培养后消化纯化法是获得绵羊子宫内膜上皮细胞的一种简单易行且高效的方法,该方法得到的细胞可以在体外传至3-4代。 相似文献
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钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。 相似文献
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随着中国国民经济的迅速发展,军、警犬得到广泛应用的同时,肉用犬的饲养已经形成规模,宠物犬进入百姓家庭,犬的数量日益增加。为适应国内军、警、生物医学用犬的特点和宠物犬品质提高的需要,人们已经采用犬的人工授精技术提高种公犬的利用率,使优良公犬能充分发挥高产的遗传性。如今养犬业发达的国家,在犬的繁殖生产中大部分采用冷冻精液技术对犬进行人工授精,这种技术的关键在于精液的稀释处理。为提高犬冷冻精液的质量,人们向稀释液中添加各种物质以保护精液。本实验在稀释液中添加谷胱甘肽(GSH),利用其作为过氧化-还原酶系统的作用物,能及时保护精子免遭氧化及过氧化反应终结产物的伤害,使精子脂膜结构保持稳定,提高精液质量。实验将冷冻稀释液与犬精液按1︰1稀释,平均分成6组,依次向每组添加1、5、10、15、20mmol/L不同浓度的谷胱甘肽,设最后1组为对照组。冷冻后,从每次试验的各浓度组随机抽取3支细管进行解冻,镜检精子活力,记录数据。再经姬姆萨染色法染色,观察顶体完整率和畸形率。试验结束后,采用方差分析法对数据进行分析。实验结果表明:添加5mmol/L谷胱甘肽的冷冻精液解冻后,精子活力、顶体完整率均优于对照组,畸形率低于对照组,5mmol/L为最优添加浓度。 相似文献
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利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。 相似文献
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【目的】探明单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸组织内5α-还原酶1型(5α-reductase 1, 5α-red1)、5α-还原酶2型(5α-reductase 2, 5α-red2)与雄激素受体(Androgen receptor, AR)的表达模式。【方法】应用HE染色观察阴囊睾丸和腹腔睾丸的组织形态变化,利用免疫组织化学技术分析5α-red1、5α-red2和AR在阴囊睾丸和腹腔睾丸中的表达定位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定双氢睾酮(Dihydrotestosterone, DHT)浓度在单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸中的水平变化。同时,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析5α-red1、5α-red2和AR的转录和翻译水平。【结果】结果显示腹腔睾丸组织中胶原纤维增多,曲精小管内精原细胞和成熟精子消失,同时5α-red1、5α-red2和AR在腹腔睾丸和阴囊睾丸中的间质细胞、支持细胞中均有表达。腹腔睾丸中DHT水平显著降低,5α-red1、5α-red2及AR转录水平和翻译水平在阴囊睾丸中的表达均显著高于腹腔睾丸。【结论】单侧... 相似文献
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通过对绵羊腔前卵泡培养方法的研究,能够探索出适宜绵羊腔前卵泡生长发育的培养条件,以及为进一步揭示绵羊卵泡生长发育的规律奠定一些基础。试验一通过使用微滴法和琼脂培养基法培养腔前卵泡,观察其对绵羊腔前卵泡生长的影响;试验二通过绵羊腔前卵泡单独培养与群体培养,探讨不同培养密度对绵羊腔前卵泡生长的影响。试验结果显示,使用微滴法与琼脂培养基法培养的绵羊腔前卵泡,在培养3天时,卵泡直径增加值和存活率差异均不显著(P0.05);但培养6天时,琼脂培养基法培养的腔前卵泡的直径增加值和存活率均极显著高于微滴法培养的腔前卵泡(P0.01);在使用琼脂培养基培养的条件下,对绵羊腔前卵泡进行单独培养和群体培养,在培养的6天时间内二者卵泡直径增加值和存活率差异均不显著(P0.05)。试验结果表明,琼脂培养基法是较为适宜的绵羊腔前卵泡体外培养方法;培养密度对绵羊腔前卵泡体外培养并无显著影响。 相似文献
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绵羊(Ovis arise)卵母细胞经丁内酯-Ⅰ(BL-Ⅰ)抑制培养,然后转入成熟培养液培养不同时间,进行体外受精并观察胚胎发育情况.结果表明,解除8 h抑制再培养8 h组处于MⅡ期卵母细胞率6.38%,显著低于其它组(P<0.01).继续培养16和20 h的卵母细胞成熟率与对照组(常规培养24 h)差异不显著,培养24 h组卵母细胞成熟率(70.83%)稍高于对照组(66.18%),但差异不显著(P>0.05).培养16和20 h组囊胚率分别为2.99%和13.64%与对照组24.39%差异显著(P<0.05),培养24 h组的囊胚率20.33%与对照组差异不显著(P>0.05).表明BL-Ⅰ对绵羊卵母细胞的体外成熟有明显抑制作用,但其抑制作用是可逆的,而经BL-Ⅰ处理后未能提高绵羊卵母细胞体外受精和胚胎的整体发育能力. 相似文献
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旨在利用高通量测序技术对松辽黑猪和长白猪背最长肌组织样本进行mRNA测序和差异分析,筛选影响猪肌肉生长、肉质和脂肪沉积的关键基因,从而为猪肉品质研究提供新的参考信息。采集6头松辽黑猪和6头长白猪的背最长肌组织样本,提取其RNA,采用Illumina HiSeq 2500高通量测序技术对mRNA进行测序,并对获得的reads进行比对、注释和差异表达分析,用NOISeq筛选出差异表达基因并进行相关生物学功能富集分析。结果表明,从2个猪种间共筛选出了664个差异表达基因,其中,364个基因在松辽黑猪中高表达,300个基因在长白猪中高表达。通过对差异表达基因进行生物学功能分析,筛选出LPIN1、FADS1、FADS2、PLIN2、PPARGC1A、PRKAG2和ACSL1等基因参与脂类代谢和肌肉发育相关的调控,相关通路为脂肪酸代谢、PPAR信号通路、AMPK信号通路、胰岛素信号通路和脂肪细胞因子信号通路等。 相似文献