利用聚合酶链反应技术新发现的牛雄性特异性DNA片段     

东庸介  刘云海  朱化彬 《中国畜牧兽医》1992,(5)

我们依据牛Y染色体特异性DNA探针ES8的第1—20bp和541—560bp的碱基顺序,合成一对引物,用PCR方法扩增公牛和母牛染色体DNA,在扩增公牛DNA时发现四种前所未知的DNA片段,即使扩增的雄性DNA量为10~(-6)μg时,也可得到这些片段。用双脱氧末端终止法分析这些DNA片段的碱基顺序时,发现没有一个片段能与ES8完全配对,而只能与ES8部分配对。四个片段与ESg序列的一致率分别为:92bp片段(I0—1)为65％;142bp片段(I0—2)为51%;170bp片段(I0—3)为57％;224bp片段(I0—4)为84％。与公牛和母牛DNA杂交结果证明这些片段的雄性特异性,结果表明,本研究得到的这四种DNA片段可用作牛雄性特异性DNA片段。  相似文献   

胚胎性别鉴定实用配套技术的初步试验     

刘云海  朱化彬  罗应荣  孙淑芳  宫云浩  吴时友  杨化玉  迟吉义 《黑龙江动物繁殖》1995,(4)

胚胎性别鉴定PCR检测试剂盒和经切割取样性别鉴定后的胚胎冷冻保存,是达到胚胎性别鉴定实用化配套技术的主要关键技术。 本试验结果证明:1.在实验室将Y-DNA特异片段引物、dNTP和Tag酶等反应物,按比例配合成试剂盒后,进行冷冻保存的试剂盒,可取得与常规PCR检测操作技术方法的相同效果和准确率;2.采用快速冷冻的方法,冷冻保存切割取样性别鉴定后的胚胎,可取得57.1％(4/7)的移植成功率。  相似文献   

用奶孕酮试验改善奶牛繁殖力     

蔡正华  刘云海等 《河北畜牧兽医》2002,18(7):18-19

  相似文献   

奶牛和绵羊子宫内膜细胞体外培养方法的研究   总被引：4，自引：3，他引：1  

陈利平朴学娇  罗永倪和民  刘云海郭勇 《中国农学通报》2012,28(14):99-104

为了探讨适用于奶牛和绵羊子宫内膜细胞的培养方法,采用了组织培养法、常温消化法、先组培后消化法和先消化后组培法,并适时用倒置显微镜观察,探讨哪一种原代培养方法更适合获得奶牛和绵羊子宫内膜细胞。结果表明,组织培养的奶牛和绵羊子宫内膜细胞生长较快,细胞形态为梭形和铺路石样交织在一起;常温消化法没有成功获得奶牛子宫内膜细胞,但获得了绵羊子宫内膜细胞;而先组培后消化法获得了奶牛子宫内膜细胞,但无法传代、不能长久生长;而先消化后组培法获得的细胞与单一组培法获得的奶牛和绵羊子宫内膜细胞情况相似,细胞上出现很多组织残块,覆盖在细胞上面不利于细胞增殖。说明组织培养方法是简捷快速获得牛、绵羊子宫内膜细胞的方法,获得的子宫内膜细胞可以在体外至少传4代,这类细胞可以用于研究动物子宫内膜的功能和相关分子调控机制。  相似文献   

外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

杨菲 姚学军闫芃  梁琳郑雪莹  邢书涵刘云海郭勇  倪和民 《中国农学通报》2013,29(29):42-45

了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。  相似文献   

小鼠输卵管中标记滞留细胞的定位研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

乔静巧赵华山  倪和民刘云海 郭勇 《中国农学通报》2014,30(17):21-25

本研究旨在探讨小鼠输卵管中标记滞留细胞的存在与分布情况。C57乳鼠从出生后第3天开始,每隔1天分别在9:00和16:00皮下注射BrdU（5-溴-2-脱氧脲苷）,8周后对输卵管取材进行冰冻切片和免疫荧光染色,用以检测BrdU标记滞留细胞的定位情况。结果显示：经过长周期的定位示踪,输卵管中有标记滞留细胞的存在,这些细胞自输卵管远端（壶腹部方向）至近端（峡部方向）呈现明显的梯度分布,并且其主要位于上皮组织中。以上结果表明,成年小鼠的远端输卵管上皮中很可能存在相应的前体细胞或干细胞。  相似文献   

通过优化超排后合笼时间高效获取小鼠孵化囊胚     

翟椿东  顾美超  刘迪  王力红  齐晓龙  张嘉楠  刘云海  倪和民  郭勇 《中国畜牧兽医》2015,42(5):1253-1258

本试验旨在优化小鼠超排后的合笼时间,高效获取小鼠孵化囊胚。试验选用150只ICR系8周龄雌性小鼠,随机分为5组,同一时间超排处理后雌、雄按1:1于18:00、19:00、20:00、21:00合笼过夜,次日上午08:00查栓,发现阴道栓这为妊娠第1天(D1)。取妊娠第5天(D5)小鼠处死,剪取双侧子宫角,冲取胚胎。统计每组冲取胚胎的总数及孵化囊胚/未孵化囊胚的比值,作为胚胎获取效率的评价指标;统计内细胞团数/滋养外胚层细胞团数,作为评价胚胎质量的参考指标。结果发现,在数量上组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ囊胚数差异不显著(P>0.05),但有增高趋势,组Ⅳ囊胚数显著高于其他3组(P<0.05)。组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ内细胞团数/滋养外胚层细胞团数分别为23.18%、23.55%、21.72%和23.28%,各组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,组Ⅳ所对应的合笼时间获取小鼠孵化囊胚获取效率最高,胚胎囊胚质量无明显差异。  相似文献   

牛抑制素α亚基基因克隆及表达载体的构建     

吴迪  邢书涵  齐晓龙  刘云海  郭勇  倪和民 《中国农学通报》2015,31(35):8-12

为克隆牛抑制素α亚基基因,构建抑制素pET32a-成熟肽表达载体,从河北大厂县屠宰场采集卵巢,提取总RNA并反转录成cDNA,根据GenBank NM_174094.4 设计一对引物扩增出成熟肽cDNA,将所扩增基因插入到pET32a 表达载体BamHⅠ与HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒抑制素pET32a-成熟肽。结果成功构建出抑制素α亚基基因。笔者初步得到了抑制素重组质粒,为今后重组蛋白原核表达的研究奠定了基础。  相似文献   

PGE2可以恢复缺少内源性PGs的牛体外早期胚胎的正常发育     

秦国嵩  倪和民  刘云海  李贺娟  盛熙晖  齐晓龙  郭勇 《中国农学通报》2016,32(32):1-6

旨在研究外源添加PGE2(前列腺素E2)对缺少内源性前列腺素(PGs,Prostaglandins)的牛IVF早期胚胎外发育的影响。在牛IVF胚胎中抑制内源前列腺素合成再外源添加PGE2,以观察PGE2对牛IVF胚胎发育的作用以及起作用的胚胎阶段。并检测PGE2受体的mRNA水平。抑制胚胎内源性前列腺素合成限速酶COX-1和COX-2会使牛IVF胚胎卵裂率、8-16细胞率、囊胚率以及孵化率显著低于常规培养组;而外源添加PGE2能够补偿IVF胚胎因缺少内源性PGs导致的损伤,基本抵消COX-1和COX-2的特异性抑制剂对牛早期胚胎体外发育产生的不利影响;PGE2的添加浓度以1×10-8mol/L为宜,并且其补偿作用发生在8细胞阶段之前。利用半定量RT-PCR未能检测到以上6个阶段IVF胚胎上EP1、EP2、EP3和EP4四种受体的mRNA。PGE2可以恢复缺少内源性PG的牛体外IVF早期胚胎的正常发育。  相似文献   

家猫非繁殖季节诱导发情配种后排卵时间的确定     

鲍文玉  刘云海  郭勇  徐杨  邬静  倪和民 《中国畜牧兽医》2008,35(10):72-74

作者尝试在非繁殖季节应用外源促性腺激素对家猫进行人工诱导发情,并判断其较为准确的排卵时间。试验采用PMSG两次注射法对雌性家猫进行诱导发情,注射总剂量为150 IU,PMSG处理后的第6 d肌肉注射hCG（100 IU/只）并合笼配种。分别于合笼后的24、30、36 h手术法摘除家猫卵巢及输卵管部,观察记录卵巢排卵情况并对排卵侧的输卵管进行冲胚。试验结果显示,利用外源性促性腺激素可使家猫在非繁殖季节发情,且排卵时间范围为合笼配种后30 h左右。  相似文献