产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究     

颜卫  焦新安  潘志明  耿士忠  黄金林 《江苏农业科学》2012,40(1):46-48

建立产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法,对单核细胞李斯特菌的PFGE技术进行优化,以期获得条带亮度和清晰度都理想的脉冲图谱以及包含较多信息的分析结果;13株单核细胞李斯特菌经PFGE分析获得菌株的遗传进化树和相似性距阵.本研究建立的PFGE分型方法,为单核细胞李斯特菌的溯源追踪提供了很好的技术平台,对于其他革兰氏阳性菌PFGE分型方法的探索也具有重要的参考价值.  相似文献   

抗猪肺炎支原体特异性P36蛋白单克隆抗体的制备与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡茂志  焦新安  潘志明  邵国青  刘秀梵 《中国兽医学报》2006,26(6):619-621

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀。可溶性表达产物亲和层析纯化后用于单抗筛选;同时,用GST-P36包涵体抗原腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只)。利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了1株能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株5A7-2。生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1∶2.5×106;免疫球蛋白亚类为IgG2a。免疫印迹结果显示,腹水单抗能与GST-P36融合蛋白反应而不与谷胱苷肽转移酶(GST)反应,并且在猪肺炎支原体(Mycop lasma hyopneumoniae,Mhp)蛋白36000位置也有明显的条带,说明5A7-2所分泌的是针对MhpP36蛋白的单抗。P36蛋白是Mhp种特异性蛋白,其单克隆抗体的制备,为Mhp种特异性检测方法的建立奠定了基础。  相似文献   

酶标单抗阻断ELISA检测鸡白痢和鸡伤寒抗体   总被引：3，自引：0，他引：3  

徐耀辉  焦新安  胡青海  潘志明  黄金林  曾显营 《中国兽医学报》2006,26(2):140-143

以辣根过氧化物酶标记的沙门氏菌O9单抗3-47-0与包被的鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体阻断EL ISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌感染。该方法基于待检血清样品抑制酶标单抗与脂多糖的结合,以检测鸡白痢和鸡伤寒特异性抗体。对72份已知鸡白痢阳性血清(抑制率为(98.5±4.0)%)、54份已知鸡白痢阴性血清(抑制率为(15.3±8.0)%)、42份SPF鸡血清(抑制率为(0.8±7.2)%)检测的结果表明,该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中,从第2周开始,该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体,比全血玻板凝集试验(PAT)早1周时间。对344份种鸡血清的检测结果表明,单抗阻断EL ISA比PAT特异性好、敏感性高。另外,该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌有共同抗原的沙门氏菌感染产生的抗体。  相似文献   

减毒鸡沙门氏菌疫苗株97A安全性评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘海侠  王宝安  潘志明  黄金林  焦新安 《中国兽医杂志》2007,43(11):72-73

鸡白痢（pullorum disease）和禽伤寒（typhus avium）是分别由鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌感染引起鸡的一种败血性疾病，我国对其控制主要采用检疫淘汰的方法，并使用抗生素预防和治疗。但就目前现状而言，采取淘汰清除措施来消灭沙门氏菌，条件还不成熟，加之抗生素治疗也存在诸多弊端，因此，有必要探寻新的防制途径。  相似文献   

口服重组沙门菌诱导的免疫应答动态分析     

张辉  焦新安  潘志明  胡茂志  唐丽华 《中国预防兽医学报》2007,29(5):372-375,393

以融合表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)和OVA、LCMV NP CD8~ T细胞表位的重组减毒沙门菌SL7207(ptG2F)为免疫原,经口服途径接种BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,分别于第2次、第3次、第4次、第5次免疫后,以ELISPOT法分别测定免疫小鼠派伊尔氏结细胞中特异性针对OVA和LCMV NP CD8~ T细胞表位的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用ELISA分别检测血清、肠黏膜中的GFP特异性抗体,分析了口服重组减毒沙门菌诱导的特异性免疫应答动态规律。实验表明SL7207(ptG2F)口服免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了LCMV NP CD8~ T细胞表位(H-2~d)特异的细胞免疫应答。在第2次免疫后,即可检测到特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞;在第3次免疫后,IFN-γ分泌细胞数量明显高于IL-4分泌细胞数。然而,在第4、5次免疫后,IFN-γ分泌细胞数和IL-4分泌细胞数相当,未见明显变化。试验中未能检测到针对OVA CD8~ T细胞表位(H-2~b)的细胞免疫应答。运用ELISA方法检测到SL7207(ptG2F)、SL7207(ptGFP)免疫组GFP特异性IgG和IgA抗体,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。结果表明重组减毒沙门菌口服免疫可以有效运送外源抗原至宿主免疫系统,并诱导产生特异性细胞免疫应答和黏膜免疫应答。  相似文献   

中国部分地方品种鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆与序列分析     

胡青海  焦新安  潘志明  黄金林  殷月兰 《畜牧兽医学报》2006,37(3):216-221

用Trizol分别提取4～6周龄白莱航鸡、狼山鸡、大骨鸡、北京油鸡、仙居鸡、茶花鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺细胞的总RNA，再用Oligo-dT纤维索富集mRNA后，用RT-PCR分别扩增出鸡CD4和cD8α基因cDNA。将PCR产物克隆进T载体后测序。序列分析显示不同品种鸡的CD4 cDNA序列完全一致；中国地方品种鸡与国外品种的白莱航鸡、RPL7系鸡在CD8α胞外区有6～13个氨基酸的差异，仙居鸡与其他5个中国地方品种鸡在CD8α胞外区有4～5个氨基酸的差异，狼山鸡、北京油鸡和隐性白羽鸡CD8α cDNA的核苷酸序列及推导的氨基酸序列完全一致。这些结果表明，中国地方品种鸡CD4基因序列高度保守；中国地方品种鸡与国外品种鸡的CD8α cDNA序列之间具有遗传多态性，而中国地方品种鸡之间CDSα cDNA序列遗传多态性低，为进一步研究CD4分子和CD8α链的结构和功能提供了条件。  相似文献   

种子种苗在发展现代农业中的地位与作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴其褒 《种子世界》2009,(11):12-13

发展现代农业是当前新农村建设的首要任务,十七届三中全会提出了高产、优质、生态、高效、安全的现代农业总目标。现代农业是科技发达的农业,发展现代农业要靠多种因素推动,种子种苗是发展高效生态农业的源头,是发展现代农业的载体,在现代农业中起着基础性和先导性作用,发展现代农业离不开现代种子产业。  相似文献   

杂草稻生物学特性、危害与防治方法   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨巍  吴其褒  陈惠哲  朱德峰 《中国稻米》2008,14(3):50-53

杂草稻作为一种特殊的稻田杂草,给水稻生产造成较大危害,它的控制已成为农业领域关注的热点。本文概述了杂革稻的形态、开花、落粒和种子休眠和出苗等生物学特性,从而了解杂草稻的危害原因,对栽培稻产量和米质影响,及潜在基因漂移的风险。并探讨了从栽培、化学、遗传和预防等措施综合控制杂草稻发生的方法。  相似文献   

基因型和环境对小麦品种淀粉性状及面条品质的影响^①   总被引：14，自引：0，他引：14  

基因型和环境是影响小麦品种品质的重要因素^［～］  对蛋白质数量和质量淀粉特性和面条等最终产品品质均有不同程度的影响^［～  ］。然而  关于基因型和环境对中国小麦品种淀粉性状和面条品质的影响国内外报道甚少。本研究选用适于我国华北和黄淮麦区种植的个冬小麦品种  在北京山东山西三省 《中国农业大学学报》2000,5(1):63-68

研究了15个冬小麦品种的11个面粉、淀粉和面条品质性状在5个生态试验点的表现。结果表明①基因型方差在所有性状上达到极显著,环境方差在8个性状上达到显著或极显著,基因型×环境互作方差在7个性状上达到显著或极显著。基因型变异在多数品质性状上大于环境变异,环境变异对一些重要品质性状的作用较大。基因型变异在所有性状上大于基因型×环境互作变异。②多数性状的稳定性因品种而异,一些重要品质性状具有较好的稳定性。本研究为小麦品质育种的淀粉性状和面条品质选择提供了有关基因型和环境作用的数据。  相似文献   

减毒沙门菌运送的H9N2亚型禽流感病毒DNA疫苗的研制及其免疫试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘丽平  焦新安  张小荣  潘志明 《动物医学进展》2007,28(9):1-6

根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA.将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达.进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207和X4550,得到两种运送DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA).以5×109 cfu/只的剂量两次口服接种1日龄的商品代伊莎褐蛋鸡,免疫鸡既能检测到HA特异性的血清抗体应答,又能检测到黏膜免疫应答,采用A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株经滴鼻和口服同时攻毒免疫鸡后,这两种疫苗抑制免疫鸡排毒的效果与灭活疫苗有显著差异.  相似文献