新疆哈密瓜AT2基因的克隆及初步功能验证     

张生翾  李思怡  王旭辉  李冠 《分子植物育种》2018,(15)

本研究利用RT-PCR技术从抗霜霉病哈密瓜(Cucumis melo L.)品种MR-1中克隆到AT2基因,其整编码区为1 229 bp,编码401个氨基酸,同源比对结果为99%,将其编码的丝氨酸乙醛酸转氨酶蛋白序列与多种物种进行系统进化树分析,结果显示,甜瓜与黄瓜SGT蛋白同源性较高,遗传距离最近,推测在同属中该蛋白进化相对保守。在线分析表明SGT蛋白不含信号肽及跨膜区,即该蛋白为非跨膜蛋白。RT-PCR分析表明AT2基因随着植株生长时期不同表达量不同,开花期表达量最高,幼苗期至开花期表达量呈上升趋势;且不同组织中,叶片表达量显著高于茎、根。构建了p CAMBIA2300-AT2植物表达载体,运用农杆菌介导法转化烟草,抗性筛选获得7株阳性转基因烟草;经q RT-PCR检测,AT2基因在不同株系转基因烟草T0代中表达量均高于野生型。通过对转基因烟草进行抗病性鉴定,转基因烟草对靶斑病、赤星病的抗性高于野生型烟草。本研究表明,过表达AT2基因能够提高烟草对部分真菌性病害的抗性。  相似文献   

At2基因双T-DNA植物表达载体的构建     

王文玲  王贤磊  熊丽曼  高兴旺  李冠 《北方园艺》2012,(12):107-112

以甜瓜品种‘MR-1’为试材,采用PCR技术,扩增出了At2基因并在两端添加BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。结果表明:在NCBI上进行BLAST显示其氨基酸序列与GeneBank中已公布的At2基因的同源性为99%;经DNAMAN软件分析,核苷酸序列同源性为99.43%。将其连接在中间表达载体G-pPTN133上,得到替换了GUS基因的中间载体A-pPTN133。A-pPTN133再经ScaⅠ酶切后,插入到经ScaⅠ酶切的pPTN133~-中,构建成双T-DNA植物表达载体At2-pPTN133。经酶切和PCR鉴定证明了所构建载体的正确性。  相似文献   

应用SRAP标记鉴定甜瓜种子纯度   总被引：1，自引：0，他引：1  

熊丽曼  王贤磊  高兴旺  王文玲  李冠 《种子》2012,31(2):9-12

以甜瓜的3份代表性种质资源为供试亲本,制定2个杂交组合,用SRAP( sequence related amplified polymorphism)标记对2种甜瓜杂交种子纯度进行鉴定与分析,筛选出适合该杂交种纯度鉴定的多态性SRAP引物,从而为甜瓜的分子标记辅助育种研究奠定基础.结果显示:在42个引物组合对2个杂交品种的亲本筛选中,共有37对引物组合具有多态性,多态性引物组合达到88.1％.杂交组合皇后×安农(A)和杂交组合K-413×安农(B)的种子纯度分别为94.19％和94.05％.  相似文献   

草坪土壤的N2O产生途径及其对施氮肥的响应     

王东  李冠 《园艺学报》2016,43(10):1961-1970

 硝化作用、反硝化作用和硝化细菌反硝化作用是土壤中产生N₂O的主要途径。以常用的冷季型草坪草早熟禾为对象,采用气体抑制剂培养法研究了不同施氮量对草坪土壤N₂O排放及其产生途径的影响。结果表明,对照草坪土壤的N₂O日排放量为7.2 ~ 8.2 g · m^-2 · d^-1,年施氮量10 g · m^-2未改变草坪土壤N₂O排放强度,年施氮量25、35 g · m^-2处理则分别比对照增加1.52倍和1.88倍,但二者之间没有显著差异。对照草坪土壤N₂O产生途径主要以异养硝化作用为主,其贡献率达65.7%,反硝化作用贡献率为34%,自养硝化和硝化细菌反硝化过程几乎不发生。年施氮量25 g · m^-2时,N₂O排放以硝化细菌反硝化、异养硝化和反硝化途径为主,贡献率分别为35%、35%和29%。年施氮量35 g · m^-2时,N₂O排放来自于4个途径,其中反硝化途径占41%,自养硝化途径贡献率增加至20%。  相似文献   

枯草芽孢杆菌XK-1产芽孢条件的优化   总被引：5，自引：1，他引：4  

甄静王继雯  谢宝恩李冠杰 刘莹莹 《中国农学通报》2012,28(27):146-151

为在最大程度上提高有机磷降解菌-枯草芽孢杆菌XK-1的芽孢产量,对其产芽孢的条件进行系统研究。以菌体芽孢化的方式增强该菌适应性,采用单因素和正交试验的方法,考察不同的氮源、碳源、无机盐、pH、温度、培养时间、接种量对枯草芽孢杆菌形成芽孢的影响。结果表明：XK-1产芽孢的最佳培养基组成为：3%麸皮,3%大豆蛋白胨,0.1% CaCl2,0.05% NaCl,在此基础上的最佳培养条件为pH 7.5,温度为40℃,发酵时间为48 h,接种量为2%。经优化后,该菌株的产芽孢率达96%,为下一步该菌株在复合生物肥中的应用打下基础。  相似文献   

快速检测甜瓜西州蜜17号种子纯度的SSR标记   总被引：2，自引：1，他引：1  

姜陆  卢浩  王贤磊  宁雪飞  李冠 《新疆农业科学》2016,53(3):407

[目的]以甜瓜杂交品种西州蜜17号及其母本为材料,运用SSR分子标记技术对杂交种与母本之间的扩增谱带的多态性进行研究,筛选出一种能够快速检测杂种的SSR标记.[方法]在选取的18个SSR标记中,SSR标记CMBR068在母本中扩增出一条谱带,在杂种中扩增出两条大小差异较大的谱带,其中一条谱带的大小与母本扩增的谱带大小一致.[结果]利用2.5;琼脂糖凝胶电泳技术和CMBR068标记对100粒杂交种子的纯度进行检测,种子纯度的鉴定结果为98;.[结论]西州蜜17号甜瓜杂交种子的纯度,可利用SSR标记CMBR068,结合2.5;琼脂糖凝胶电泳技术进行快速检测.  相似文献   

甜瓜PI390452霜霉病抗性基因的QTL定位   总被引：2，自引：2，他引：0  

张学军  宁雪飞  杨永  李寐华  王贤磊  伊鸿平 《新疆农业科学》2016,53(12):2157

[目的]研究甜瓜抗霜霉病资源PI390452,分析PI390452抗性遗传规律,并对抗病基因进行QTL定位分析,为甜瓜抗霜霉病分子辅助育种奠定基础.[方法]用甜瓜霜霉病病原菌[Pseudoperonospora cubensis (Berk.etCurt.)Rostov.]对PI390452×卡拉克赛(高感霜霉病)杂交后代F2分离群体及F2∶3家系人工接种鉴定,以F2分离群体为研究对象,基于ICuGI已构建对应分子标记连锁图谱,应用BSA法和1 090对甜瓜SSR引物进行连锁遗传分析,采用QTL IciMapping软件定位霜霉病QTL位点.[结果]资源PI390452霜霉病抗性符合数量性状遗传的特点.共检测到3个霜霉病抗性基因的QTL位点qR1-1-1、qR1-3-1、qR2-2-1,分别位于chr-5、chr-10、chr-9上,qR2-2-1表型变异率最大为80.84;.[结论]位于chr-9上的qR2-2-1是控制甜瓜霜霉病主效QTL位点,为甜瓜抗霜霉病分子标记辅助育种、抗病基因精细定位、克隆提供了技术支持.  相似文献   

CMV新疆哈密瓜分离物的寄主反应及其cp序列分析     

王东  李冠 《园艺学报》2016,43(10):1961-1970

从新疆16个哈密瓜主栽区采集哈密瓜病毒病样品,利用RT-PCR检测黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）。通过蚕豆的单斑分离纯化,获得了新疆12个哈密瓜主栽区的17个CMV分离物。分析这些分离物的寄主反应和全长外壳蛋白基因序列。结果表明,新疆17个CMV分离物属于CMV的ⅠB亚组。总体来看,新疆CMV分离物的进化分簇没有表现出明显的地区适应性,遗传多样性较低。除曼陀罗外,寄主反应与分离物的地理来源没有明显的相关性。新疆CMV分离物的寄主反应与已报道的来自其他国家的CMV分离物有一定的差异。  相似文献   

甜瓜SRAP-PCR程序和反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈芸  王贤磊  夏雪琴  常菊芹  李冠 《新疆农业科学》2009,46(4):764-771

mmoL/L,primer 0.24 μmol/L,Taq polymerase 1.5 U.结果表明,该程序和体系能够较好的满足甜瓜基因组SRAP扩增的要求.  相似文献   

新疆甜瓜“皇后”再生体系的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

张铁刚  宁雪飞  王贤磊  李冠 《北方园艺》2012,(15):122-125

以厚皮甜瓜"皇后"为试材,研究了6-BA及其与NAA、GA3组合对植株离体再生的影响,以期建立以子叶为外植体的快速高效再生体系。结果表明:甜瓜子叶用MSB+1.0mg/L6-BA诱导分化培养基,不定芽诱导率可达86%以上;培养基中添加NAA不利于"皇后"子叶不定芽的产生;产生的不定芽丛或单芽转至MSB+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L GA3培养基,不定芽均可伸长,且生长状况良好;再生苗转至不添加任何激素的MS培养基生根,生根率达99%。  相似文献