H₉亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建     

陈红英  黄青云  崔保安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(12):7-13

【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。  相似文献   

基于TaqMan探针的猪细小病毒实时荧光定量PCR方法的建立     

陈红英  李新生  崔保安  杨明凡  金钺  刘金朋 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2008,34(6)

根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK．15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒．转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线．在25此扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序．该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1．12TCID50／mL．  相似文献   

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用     

王学兵  魏战勇  崔保安  安芳芳  徐端红  杨明凡 《中国农学通报》2008,24(4):4-7

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。  相似文献   

仔猪感染粪肠球菌的病原鉴定及病原特性初报     

王亚宾  陈丽颖  张红英  金钺  钱伟锋  邵仁东  崔保安 《勤云标准版测试》2008,(5)

旨在对引起河南省三门峡某猪场肥育仔猪发病死亡的病原菌进行鉴定,并对其病原特性进行初步分析。用常规手段分离纯化可疑病原菌,观察其形态染色特性和培养特性,然后利用Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行生化特性鉴定,并进一步检测分离菌株的明胶酶和溶血素等毒力因子表型及其药物敏感性。结果表明：①经细菌分离纯化,得到2个呈链状排列的G＋球菌分离株,分别命名为HE1和HE2株。②经Vitek-32全自动细菌鉴定系统鉴定,2株分离菌均为粪肠球菌（E. faecalis）。③毒力因子表型试验表明,HE1和HE2均具有溶解明胶的能力,且能裂解兔红细胞,其中HE1呈现β型溶血,HE2呈现α型溶血。④动物试验表明,分离菌株对小鼠具有致死作用,其中HE1毒力更强。家兔对上述分离株具有一定耐受性,仅表现出临床症状但不死亡。⑤药敏结果显示分离菌对万古霉素、替考拉宁、利富平和氨苄西林敏感,对诺氟沙星、红霉素、卡那霉素和四环素耐药。粪肠球菌感染可以导致仔猪发病死亡,但不同的粪肠球菌分离株对动物的致死能力有差异。  相似文献   

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用     

王学兵  魏战勇  崔保安  安芳芳  徐端红  杨明凡 《勤云标准版测试》2008,(4)

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。  相似文献   

整合子与细菌多重耐药性   总被引：3，自引：1，他引：2  

陈红英  胡功政  李新生  崔保安 《动物医学进展》2006,27(4):29-32

细菌的多重耐药已成为临床治疗的难题,其耐药机制、耐药基因的传播与转移是近年来研究的热点。近来研究表明,细菌中存在一种能捕获和表达基因的遗传单位———整合子在细菌获得耐药机制中起了重要作用。整合子编码一个整合酶负责基因盒在重组位点attⅠ和attC上的插入及切除,同时整合子也提供一个启动子(Pant)负责基因盒耐药基因的表达。整合子携带着重组的基因盒插入到转座子或接合质粒中,在不同的细菌间运动而传播耐药性,同时一个整合子可以捕获多个基因盒,对细菌多重耐药的形成起重要作用。现就整合子的结构、类型、基因盒的种类与表达及其与细菌多重耐药性的有关研究进行综述。  相似文献   

转移因子与重组转移因子及其在疾病防治中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

王彦彬  崔保安  康相涛  夏平安  王亚斌  张红英 《动物医学进展》2006,27(10):15-19

转移因子是来自于免疫淋巴细胞的一类可透析小分子多肽,它能够将致敏淋巴细胞的免疫信息传递给未致敏的受体淋巴细胞。转移因子具有特异性和非特异性免疫活性,特异性转移因子具有转移特异性细胞免疫的能力,非特异性转移因子具有促进淋巴细胞活化增殖,增强其免疫活性,并可诱导靶细胞产生大量的细胞因子。重组转移因子是利用基因工程技术将编码具有免疫增强活性的转移因子基因,进行克隆和体外表达,表达产物经纯化制备而成,试验表明其具有增强细胞免疫活性的作用。转移因子和重组转移因子是一种具有免疫增强活性的新型高效安全的生物药品,在临床上用于疾病的防治,具有广阔的应用前景。  相似文献   

猪α干扰素原核表达载体的构建及表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘占通  崔保安  舒畅  金喜新  陈红英  杨明凡  魏战勇 《河南农业大学学报》2006,40(4):398-401

以重组克隆质粒pGEM-T-IFN-αZ为模板,PCR扩增杂种猪α干扰素,将其插入原核表达载体pET-43.1a-c( )中,构建了猪α干扰素原核表达载体pET-IFN-α,实现了猪α干扰素在大肠杆菌BL21中的表达.SDS-PAGE电泳、Western-blotting检测均出现了特异性的条带.SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白以可溶性形式存在.经薄层扫描分析,表达产物约占菌体总蛋白的29.8%.  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒蛋白特性的研究进展   总被引：6，自引：0，他引：6  

崔保安  朱沙  陈圣先 《中国畜牧兽医》2003,30(2):32-34

作者对牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)的生物学特性、基因组结构特征及编码蛋白的合成与功能的研究进展进行了综述。  相似文献   

直接荧光抗体技术检测鸡肾型传染性支气管炎病毒     

崔保安  陈红英 《中国畜禽传染病》1996,(6):6-8

以纯化的鸡传染怀支敢管炎病毒肾型Ｔ株，反复免疫；家兔收获高免备清、ＤＥＡＥ－纤维柱层析纯化后，用ＦＩＴＣ直接标启蒙为光抗体效价Ｆ／Ｐ克分子１．４１，标佳工作浓度为１：２５。经未标记抗体阻断试验，相关病毒交叉试验及已知鸡肾型Ｔ株病毒检测试验，证明荧光标记抗体用于病毒检测效果良好。经对健康鸡庆及传染性支 管炎病鸡组织触片直接荧光标记抗体检测病毒证明，，病气管炎病鸡组织触片直接荧光标记抗体检测病毒证明，  相似文献