高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染MARC-145细胞的差异蛋白     

周伦江  王隆柏  方勤美  吴学敏  车勇良  陈如敬  魏宏  庄向生 《中国农业科学》2012,45(4):786-793

【目的】研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染MARC-145细胞生长相关蛋白表达量的变化,明确差异蛋白的功能信息,为深入研究PRRSV病毒复制和致病机理奠定基础。【方法】采用差异蛋白质组学和Western blotting技术,通过建立双向凝胶电泳,对高致病性PRRSV感染MARC-145细胞后表达量差异蛋白质进行了胶内酶解、质谱分析鉴定及数据库检索,明确差异蛋白质的相关信息。【结果】得到7个表达稳定、重复性好的蛋白点,其中有5个蛋白点找到匹配蛋白,分别为热休克蛋白70、硫氧还蛋白、S100钙结合蛋白A6、3-磷酸甘油脱氢酶和内参肌动蛋白,其余2个蛋白点为未知蛋白。在MARC-145细胞感染PRRSV后,热休克蛋白70和S100钙结合蛋白A6表现为下调,而硫氧还蛋白、3-磷酸甘油脱氢酶和内参肌动蛋白表现为上调。功能预测分析发现,5个蛋白与MARC-145细胞抗应激、抗氧化、生长、凋亡和信号转导等作用息息相关。【结论】高致病性PRRSV感染MARC-145细胞后,能诱导细胞部分功能蛋白表达量的增加或减少。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法建立及初步应用研究   总被引：3，自引：2，他引：1  

吴学敏陈如敬  王隆柏车勇良刘玉涛  庄向生严山 周伦江 《中国农学通报》2012,28(26):59-62

为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680 bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明：该方法具有较好的特异性和敏感性,并能检测到PEDV的RNA浓度下限为100 pg/μL。从福建省的3个地区共采集58份哺乳仔猪腹泻样品,并应用此方法进行检测,其阳性检出率为87.9%。  相似文献   

应用PCR技术检测伪狂犬病病毒   总被引：4，自引：0，他引：4  

车勇良  俞伏松  胡奇林  程晓霞  王隆柏  魏宏  庄向生  陈少莺 《动物医学进展》2005,26(11):81-83

根据伪狂犬病病毒(PRV)的gE基因序列,设计并合成了一对引物,以闽A株DNA为模板,建立了检测PRV的PCR方法。该方法能从猪细小病毒闽A株和FB株中扩增出一条长度为1 808 bp的片段,对Bartha株、gE-株检测为阴性;而以猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和正常细胞的核酸为模板的均为阴性;敏感性试验表明,该体系可检测到10pg的猪细小病毒基因组DNA。表明该方法适用于检测猪伪狂犬病病毒野毒株或非gE基因缺失弱毒株。  相似文献   

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的克隆与表达     

车勇良  庄向生  陈少莺  魏宏  王隆柏  周伦江 《中国农学通报》2008,24(11):15-18

猪圆环病毒II型(PCV2)是引起断奶后仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原。本研究用PCR方法扩增PCV2截短的ORF2基因并亚克隆至表达载体pGEX-6P-1,构建的重组表达质粒命名为pGEX-ORF2,将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3),在37℃经IPTG诱导4小时。PCV2的cap蛋白以包涵体形式得到有效表达。经SDS-PAGE及Western blot分析表明表达的重组蛋白分子量约为46KD,重组蛋白具有良好的免疫学活性。  相似文献   

科技人员服务企业行动有关激励保障政策的探讨   总被引：1，自引：1，他引：0  

庄向生 《台湾农业探索》2011,(4):38-40

科技人员服务企业行动是科技人员积极响应党中央号召,是为了帮助企业技术研发和解决企业实际遇到的经营管理问题,加快科技成果转化,改善企业技术创新,构建科企合作的有效模式和长效机制。该文阐述了建立农业科技人员服务企业行动激励保障政策的目的与意义、农业科技人员服务企业行动的激励原则;探讨了农业科技人员以3种不同形式服务企业行动的激励保障措施。  相似文献   

福建省部分地区规模化猪场伪狂犬病感染情况调查   总被引：5，自引：0，他引：5  

陈如敬  王隆柏  魏宏  车勇良  庄向生  周伦江 《养猪》2010,(1):38-40

为掌握现有防疫体系下福建省部分地区规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染情况,采用HerdChek PRV gE—ELISA检测试剂盒对2009年10月送检的8个市40个规模化猪场1214份血清样品进行伪狂犬病野毒抗体检测。结果显示,伪狂犬病野毒抗体阳性猪场有25个,占检测猪场总数的62．5％;各猪场血清样品中伪狂犬病野毒抗体平均阳性率为23．56％;不同地区规模化猪场母猪群的伪狂犬病野毒抗体平均阳性率为22．46％,其中阳性率最高为55．83％;不同胎次母猪群的伪狂犬病野毒抗体阳性率差异不显著。本次调查结果表明,福建省不同地区规模化猪场均存在不同程度的伪狂犬病野毒感染,其中以莆田和南平地区较为严重。  相似文献   

A型流感病毒NS1蛋白的结构与功能   总被引：2，自引：1，他引：1  

魏宏  林锋强  庄向生  张步伍 《动物医学进展》2005,26(9):31-33

A型流感病毒片段8编码的NS1蛋白是病毒复制和传播的重要调节蛋白。它含有3个功能区,即RNA结合区,eIF4GI结合区和效应区。NS1蛋白在A型流感病毒感染细胞中高水平表达,它的主要功能是抑制NF-κB(nuclear factor-κB)活化和IFN(inter-feron)-α/β介导的抗病毒作用,抑制Jun N末端激酶(jun N-terminal kinase,JNK)和AP-1(activating posttranslation)转录因子活化;下调病毒感染细胞凋亡;促进病毒基因表达,抑制宿主mRNA加工和转运。NS1蛋白的深入研究,为今后预防和治疗A型流感病毒寻找突破口。  相似文献   

副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立     

车勇良  陈如敬  江斌  王隆柏  魏宏  吴学敏  庄向生  周伦江 《福建农林大学学报(自然科学版)》2015,44(3)

采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.  相似文献   

猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体的制备及应用     

车勇良  周伦江  王隆柏  魏宏  陈少莺  陈如敬  庄向生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,(3):12-16,22

【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-60和10-48,对其生物学特性进行鉴定,并将其作为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。【结果】8-60和10-48的染色体数平均为98～105对,间接ELISA检测其细胞培养上清液效价分别为1∶16和1∶32,小鼠腹水效价分别为1∶3×212和1∶3×213,抗体的免疫球蛋白亚型均为IgM。间接免疫荧光结果显示,8-60和10-48能与PCV2发生反应;利用这种特性,建立了能诊断PCV2病原的间接免疫荧光诊断方法,实际应用结果表明,其诊断结果与PCR方法诊断结果基本一致,阳性和阴性的符合率分别为93.75%和100%。【结论】以制备的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒FJ07A株的分离及其结构蛋白基因的序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

王隆柏  庄向生  魏宏  车勇良  陈如敬  吴学敏  周伦江 《福建农业学报》2010,25(6)

从福建某猪场发生疑似"高热病"死亡的小猪病料中分离到1株病毒,该病毒在Marc-145细胞上增殖致细胞病变。对分离病毒的TCID50、动物回归试验、RT-PCR鉴定及对病毒株的结构蛋白基因进行了测定与分析。结果表明:分离毒株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(命名为PRRSV-FJ07A),TCID50为10-6.5.mL-1,对35日仔猪具有致病性,结构蛋白基因与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为89.2%～95.8%,氨基酸同源性为88.1%～96.2%;与国内PRRSV-HUN4株的核苷酸同源性为90.1%～99.7%,氨基酸同源性为88.3%～100.0%;与欧洲代表株LV的核苷酸同源性为63.7%～70.0%,氨基酸同源性为59.6%～78.9%。PRRSV-FJ07A序列已登陆Genbank,登录号为GI:283100314。  相似文献