表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选     

黄彩云  赵志荀  朱学亮  王战红  吴香草  吴国华  张志东  张强 《中国畜牧兽医》2019,46(7):2079-2087

为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白（GFP）的改良型痘苗病毒安卡拉（MVA）重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点（基因组中70303-70304 bp之间）,利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。  相似文献   

表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选     

黄彩云  赵志荀  朱学亮  王战红  吴香草  吴国华  张志东  张强 《中国畜牧兽医》2019,(7)

为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。  相似文献   

驴Zfx基因CDS序列克隆及序列分析     

张志东  夏欢  邹声雷  安洪勇  李超程  贾斌 《中国畜牧兽医》2019,(6)

本研究旨在克隆驴Zfx基因CDS序列,并对其进行生物信息学分析。根据GenBank中公布的牛Zfx基因mRNA序列(登录号:D84097.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术获取驴Zfx基因CDS序列,并对驴Zfx基因CDS区核苷酸序列和蛋白质结构进行生物信息学分析。结果表明,驴Zfx基因CDS区序列长度为2 403 bp,编码800个氨基酸;驴与马、牛、家犬、白犀牛、马鹿、猫、人、绵羊、黑猩猩的Zfx基因CDS区核苷酸序列同源性分别为99.6%、95.0%、95.3%、97.9%、93.5%、94.9%、95.0%、95.7%和94.9%。对驴及其他9种哺乳动物Zfx基因CDS区的核苷酸序列构建系统进化树,结果显示,驴与马亲缘关系很近,与白犀牛的亲缘关系次之;同时又与聚在一类的家犬、猫亲缘关系较近,而与绵羊、牛的亲缘关系稍远。Zfx蛋白理论等电点(pI)为5.19,不稳定系数为42.94,消光系数为35 810,属于不稳定的亲水性蛋白,含有60个磷酸化位点,无信号肽及跨膜结构,属于非分泌蛋白。Zfx蛋白α-螺旋、延伸链和无规则卷曲分别为23.12%、20.25%和56.63%,三级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲。本试验成功克隆获得驴Zfx基因CDS序列,为后期深入研究该基因及其编码蛋白的结构功能提供依据。  相似文献   

稻瘟病菌致病性变异研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

黄富  程开禄  罗庆明  刘兴义  涂建华  卿雨文  张志东 《西南农业学报》1999,12(4):69-73

１９９７年对四川省东南部稻瘟病菌２３０个有效单孢菌株测定结果表明,病菌生理小种由４群１７个小种组成,以２８群小种为优势种群,出现频率为７０．２％。不同生态区及不同水稻品种间病菌生理小种组成有明显差异。同一水稻品种叶瘟和穗强。同一水稻品种不同叶片、不同病穗乃至同一叶片不同病斑间都可测出不同生理小种。  相似文献   

光通量和温差对马铃薯试管苗生长的影响     

朴炫春  廉美兰  张志东  朱虎烈  张基德 《吉林农业大学学报》2004,26(6):620-623

试验研究了光通量和昼夜温差对自养培养马铃薯试管苗生长的影响。结果表明:光通量为 200μmol/(m2·s)时,自养培养苗的生长、幼苗的净光合速率显著优于光通量50,100μmol/(m2·s)处理,且总气 孔数和张开的气孔数量也最多,分别为318.0和277.7个。7℃的昼夜温差有利于自养培养马铃薯试管苗的光 合作用,从而促进幼苗生长,获得健壮的植株。  相似文献   

一株脂肪酶细菌的分离、鉴定研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张志东  茆军  孙建  唐琦勇 《新疆农业科学》2004,41(Z1):21-23

在新疆吐鲁番地区筛选到一株脂肪酶产生菌 ,其形态为杆状 ,好氧 ,白色菌落 ,通过生理生化、16SrDNA序列测定 ,与GENEBANK同源性比较 ,其同源性与芽孢杆菌属标准菌株达到 97% ,认定其为芽孢杆菌属菌 ,暂命名为芽孢杆菌L0 7。  相似文献   

辐射污染区微生物投加页岩油污水的活性污泥驯化及其群落组成分析     

张志东  张丽娟  王玮  朱静  谢玉清  顾美英  宋素琴  唐琦勇 《新疆农业科学》2015,52(1):115-122

[目的]快速驯化适于页岩油生产污水处理的活性污泥和验证辐射染污区微生物在有机废水处理中的应用性.[方法]通过向页岩油生产污水投加核辐射污染区微生物菌群,以强化和驯化处理污水微生物菌群,经过40d的驯化,获得活性较强的活性污泥.对其主要微生物群落进行筛选和特性分析,选取其中35株代表性细菌进行序列分析.[结果]菌株分布于细菌域的9个属:短波单胞杆菌属(Brevundimonas)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、节杆菌属(Arthrobacter)、八叠球菌(Sporosarcina)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)、芽胞杆菌属(Bacillus)、深海细菌(Exiguobacteriu)和鞘氨醇杆菌(Sphingobacteriu).其中,短波单胞杆菌属(Brevundimonas)和节杆菌属(Arthrobacter)属菌为主要菌群,约占所测菌株的50;.多数菌株具有脱氮或降解芳香族化合物、有机烃等功能.[结论]辐射污染区微生物资源在有机化合物污染处理中的重要作用.  相似文献   

气单胞菌低温淀粉酶基因的克隆及生物信息学分析     

楚敏  张志东  王玮  宋素琴  顾美英 《新疆农业科学》2014,51(11):2059

[目的]获得低温菌LA77的低温淀粉酶基因及其生物学信息.[方法]用16S rDNA序列分析对其进行了分子鉴定,并根据分类地位进行了特异引物设计和PCR扩增,通过生物学网站和软件对获得的基因及编码蛋白进行分析.[结果]低温菌LA77归属于气单胞菌属,PCR扩增获得一条编码703个氨基酸的完整开放阅读框的基因.通过生物信息学分析显示该蛋白质理论分子量约为77.9 kD,等电点为6.16,为亲水、且具有信号肽的跨膜蛋白.可能存在10个磷酸化位点,1个糖基化位点,二级结构主要由α螺旋和随机卷曲构成.基于氨基酸序列的结构域和系统进化树分析表明,该蛋白属于α-淀粉酶家族,极可能为低温淀粉酶.[结论]LA77低温淀粉酶基因的获得,将为低温淀粉酶基因的进一步改造、表达以及其酶低温催化机理的阐释奠定重要的基础.  相似文献   

低温生活污水生物处理研究     

顾美英  王艳萍  谢玉清  张志东  茆军  房世杰 《新疆农业科学》2011,48(5):948-953

[目的]针对当前寒冷地区生活污水处理现状,研究利用耐冷微生物进行低温生活污水的处理.[方法]从城市生活污水厂筛选出3株有较高COD降解效率的耐冷菌,组成复合菌群,用以处理低温生活污水.[结果]在低温条件下(10℃),三株耐冷菌有较高的COD去除功能,降解效率可达40;以上,且对温度变化的适应能力也较强.组合成的复合菌群,有助于提高生物处理的能力,其COD去除效率比单菌可提高10;～20;.[结论]耐冷微生物复合菌群在低温条件下有较好的COD处理能力,在低温生活污水生物处理方面具有较好的应用前景.  相似文献   

地面覆盖对越橘菌根侵染率及根系活力和过氧化物酶活性的影响   总被引：6，自引：2，他引：4  

于强波  李亚东  苏丹  吴林  刘海广  张志东 《东北农业大学学报》2009,40(2)

对越橘栽培土壤进行粉碎的玉米秸秆、粉碎的稻草秸、苔藓、锯末、草炭等5种不同有机物覆盖处理。结果表明,有机物覆盖处理可以提高越橘的根系活力和菌根侵染率,降低过氧化物酶活性,促进了越橘的生长。  相似文献