猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点片段的真核表达     

吕宁  彭树英  张涌 《中国动物检疫》2007,24(4):26-28

为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,在倒置荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光分布于阳性细胞,并且RT-PCR检测结果显示,RT-PCR扩增产物与目的基因片段大小相符,证明其确实源于重组质粒转录后的mRNA。  相似文献   

人端粒酶基因(hTERT)对牛耳成纤维细胞凋亡的影响     

隋丽娜  彭新荣  王亚刚  张涌 《黑龙江畜牧兽医》2007,(10):17-19

为了提高体细胞核移植的效率,试验探讨了转染外源性hTERT基因对核移植供体细胞———牛耳成纤维细胞的影响。试验应用脂质体介导hTERT基因转染,用相差显微镜观察转染前后的细胞状态,用RT-PCR、W estern blot法检测hTERT基因是否整合并表达,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化和凋亡的情况,并进行核型分析。结果表明:转染48 h后能看到明显的荧光,经600μg/mLG418筛选后,获得阳性克隆,转染后的细胞形态上基本无变化,hTERT基因整合并表达;经流式细胞仪检测,转染前后生长周期无明显变化,凋亡率极显著降低(P<0.01),核型正常;转染hTERT基因后的牛耳成纤维细胞的凋亡率显著低于未转染的细胞,并且形态正常,表明转染hTERT后,使体外培养的牛耳成纤维细胞生命力得到延长,为核移植提供了数量更多的高质量的核供体细胞。  相似文献   

山羊乳腺上皮细胞的分离、培养与超微结构观察   总被引：16，自引：2，他引：16  

李向臣  任芳丽  张涌 《畜牧兽医学报》2005,36(2):121-126

从山羊乳腺取部分组织进行细胞培养，并通过控时消化分离纯化山羊乳腺上皮细胞，建立了山羊乳腺上皮细胞系。结果表明：用含150U／mL Ⅰ型胶原酶和100U／mL透明质酸酶的混合液，37℃消化组织块4h，可得到大量的分散单细胞用于原代培养，该法是获得山羊乳腺组织单细胞的适宜方法；以含10％胎牛血清和双抗的RP-M11640或DEME／F12培养液为基础液，在培养液中添加氢化考的松、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、表皮生长因子(EGF)及胰岛素一转铁蛋白一硒钠(ITS)对山羊乳腺上皮细胞的生长具有较明显的促进作用。上皮细胞显微和超微结构显示：山羊乳腺上皮细胞在体外培养过程中可形成岛屿状单层聚集和类似圆顶状的结构；传代培养到第7代的细胞仍增殖旺盛，细胞内有丰富的脂滴和高尔基小泡，细胞分泌活动旺盛。  相似文献   

绵山羊CIDR放置时间对超排效果的影响     

张立  栗军  黄春华  韩锦龙  冯彦军  孟和  张涌 《中国草食动物》2006,(Z1):178-180

研究主要针对CIDR放置时间长短对绵山羊超排效果的影响进行研究,以期为羊胚胎工程技术产业化提供坚实的基础.研究结果表明绵羊第10天起针的供体,平均回收数8.94枚±3.78枚,平均可用胚7.67枚±3.76枚,胚胎可用率90.34%.第13天起针超排的供体绵羊,平均回收8.38枚±3.79枚,平均可用胚6.37枚±3.03枚,胚胎可用率为76.03 %;第10天起针平均可用胚高于第13天起针的超排效果,两者差异显著(P＜0.05),两者之间平均回收胚基本一样,无显著差异(P＞0.05),但第10天起针的胚胎利用率高于第13天起针的胚胎可用率,差异极显著(P＜0.01).CIDR放置9天起针的供体山羊,平均可用胚为17.59枚±3.22枚,胚胎可用率87.40 %;CIDR放置15天起针的供体,平均可用胚数为12.73枚±4.01枚,胚胎可用率为67.95 %.CIDR放置9天起针平均可用胚高于CIDR放置15天起针的超排效果,差异极显著(P＜0.01),CIDR放置9天起针的胚胎可用率高于放置15天的胚胎可用率,差异极显著(P＜0.01).波尔山羊在11月、12月这种结果更明显;4月份虽然9天比15天高,但平均可用胚数和胚胎可用率之间没有差异(P＞0.05),而3月份平均可用胚差异显著(P＜0.05),胚胎可用率差异显著(P＜0.05).  相似文献   

山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及向神经细胞诱导分化的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

华松  武浩  赵慧英  安志兴  郑月茂  张涌 《安徽农业大学学报》2004,31(3):273-277

采用体外细胞培养技术将山羊胎儿骨髓中的干细胞从骨髓血中分离并培养扩增;分别用含β-巯基乙醇或当归的培养液诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,免疫组织化学鉴定神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达.结果表明,通过贴壁培养法,可使低丰度的山羊骨髓间充质干细胞在体外实现分离扩增;诱导后的细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶.还建立了一种简单易行的体外分离与培养山羊骨髓间充质干细胞的方法,同时表明山羊骨髓间充质干细胞同样具有分化为神经细胞的潜能,为今后对某些疾病的治疗提供了理想的动物模型.  相似文献   

激活方法和共培养系统对牛核移植胚胎体外发育的影响     

丁向彬  王轶敏  胡广卫  王勇胜  张涌 《黑龙江畜牧兽医》2010,(7)

  相似文献   

西藏农作物种质资源更新与数据库建设项目成果概述     

禹代林  边巴  卓嘎  李新年  张涌  次卓嘎  陈洪伟  张竞 《现代农业科技》2010,(17):85-86,90

阐述了西藏农作物种质资源更新与数据库建设项目的技术成果及项目创新与突破,分析了其经济效益,并与国内同类技术进行了比较,提出了该项目的推广前景与措施。  相似文献   

脱羰秋水仙碱诱导牛卵母细胞显核     

万敏  马夜肥  王勇胜  彭新容  张东  杨鹭  张涌 《农业生物技术学报》2008,16(4)

用脱羰秋水仙碱(deme colcme,Deme)诱导牛卵母细胞显核.比较不同显核时间、Deme浓度以及极体形成等因素对牛卵母细胞显核的影响.结果显示:①0.5μg/mL Deme处理卵母细胞,诱导1 h时获得最高显核率(76.00%),高于0.5 h(61.18%)、1.5 h(64.10%)和2 h(63.46%)组;②不同浓度Deme处理成熟卵母细胞1 h,0.4和0.5μg/mL Deme组显核率较高,分别为75.24%和77.31%,显著高于0.3 μg/mL组(46.54%)与0.6 μg/mL(60.66%)组;③0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1 h,有极体组显核率(83.24%)与无极体组(77.54%)无显著性差异.研究表明,0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1 h能更好地诱导牛卵母细胞显核.  相似文献   

山羊转人乳铁蛋白基因成纤维细胞和乳腺上皮细胞单克隆的制备及扩大培养     

张玉玲  刘凤军  张涌 《安徽农业科学》2009,37(31)

[目的]为探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系。[方法]对转染人乳铁蛋白(Human lactoferrin,hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(Fetal Fibroblasts,FF)和乳腺上皮细胞(Mammary Gland Epithelial,MGE)细胞进行克隆。在96孔板中,首先用3种浓度(V/V:0、50%和100%)的适应性条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备,进而把转染细胞单克隆与非转染细胞共培养进行扩大培养,neo基因被用于筛选基因,以PCR方法鉴定转染细胞基因组DNA。并对单克隆细胞进行染色体核型分析。[结果]与非适应性条件培养基相比,100%适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率;与对照相比,转染细胞单克隆与非转染细胞共培养,显著提高了转染细胞单克隆扩大培养后的比率(FF:53.33%vs.10.00%;MGE:33.33%vs.6.670%),且明显缩短了扩大培养汇合时间(20～30 d);PCR鉴定结果表明,上述方法获得的克隆细胞整合有hLF目的基因;核型分析表明,大部分细胞克隆染色体正常。[结论]该研究可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断提供一种可靠的方法,并能节省转基因动物生产的及费用时间。  相似文献   

人溶菌酶基因真核表达载体构建及其在牛乳腺上皮细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

张勃伟  权富生  赛务加浦  孙达权  马会明  张涌 《西北农业学报》2008,17(1):11-14,19

构建真核表达载体pEGFP-C1-hLYZ,并从基因水平研究人溶菌酶基因在体外培养的牛乳腺上皮细胞中的表达,为核移植提供转基因供体细胞.采用PCR的方法从人溶菌酶质粒中扩增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的编码框446 bp).并克隆到pMD18-T载体上,用限制性内切酶Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切.将人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定向克隆到pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组表达质粒pEGFP-hLYZ,并进行Hind Ⅲ和Bam HI双酶切鉴定.转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,48 h后观察其表达情况.PCR检测溶菌酶基因的表达.成功构建了人溶菌酶真核表达载体,观察到表达绿色荧光蛋白的牛乳腺上皮细胞,并检测到溶菌酶基因.  相似文献