杏叶片与果实总RNA提取方法研究   总被引：6，自引：2，他引：4  

李晓颖  曹雪  房经贵  章镇 《中国农学通报》2010,26(2):152-156

以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改进CTAB法、SDS法、改进SDS-酚法和RNA提取试剂盒Trizol等5种不同的RNA提取方法。结果表明：5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28SrRNA和18SrRNA两条主带清晰,A260/A280大于1.8。在叶片RNA提取过程中,改良的CTAB法及Trizol法能获得高质量的RNA,产量也分别达到395.21和839.25μg/g。其中改良SDS以及改良CTAB能更有效减少果实RNA的提取中酚类物质和多糖等杂质的影响,获得质量高的总RNA。每种方法提取的叶片和果实的RNA经反转录后形成cDNA,并进行RT-PCR扩增,成功扩出看家基因泛素蛋白UBQ片段,说明了RNA能够很好地应用于文库构建、基因克隆等研究。  相似文献   

葡萄品种资源裂果性状调查与分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

王旭旭  樊秀彩  李傲  张超博  房经贵  刘崇怀  上官凌飞 《园艺学报》2016,43(11):2099-2108

选取252 个鲜食葡萄品种（111 个欧美杂种,141 个欧亚种）,分别在转色期、成熟期、过熟期采集果实,通过清水浸泡试验,了解比较其裂果情况。结果表明,葡萄裂果症状有环裂、纵裂、纵环裂和龟裂等,龟裂只在欧亚种葡萄出现;欧亚种葡萄比欧美杂种葡萄裂果严重;成熟期裂果最严重;欧美杂种小果粒葡萄品种更容易裂果;果皮厚、果肉质地软的葡萄不易裂果。不同葡萄品种的裂果倾向性存在较大差异,通过研究清水浸泡后葡萄发生裂果的情况,对葡萄裂果有了初步认识,为葡萄品种选择及葡萄育种亲本选择提供一定理论支撑。  相似文献   

‘藤稔’葡萄冬季休眠后期花芽发育相关基因表达的分析     

慕茜  刘更森  孙欣  李玉  陶然  王晨  房经贵 《园艺学报》2013,40(5):828

 以6 年生‘藤稔’葡萄（Vitis vinifera L.‘Fujiminori’）为试材,在枝条不同节位进行短截 处理,对9 个花发育相关基因的时空表达进行研究。结果表明,在冬季休眠后期虽然VvAP1、VvAP2、VvAP3、 VvAG、VvFUL、VvSOC1、VvLFY 和VvFLC 基因的相对表达水平较低,但冬芽仍可进行花芽分化;短截 处理可以促进花发育,增加各节位芽中基因的相对表达量;同一枝蔓上的中部芽比上部芽和下部芽发育 好,基因相对表达量高,花芽生长发育时间长。  相似文献   

拉枝处理对‘夏黑’葡萄冬芽成花过程中花发育相关基因表达的影响     

李玉  张成  吴伟民  王剑  房经贵 《南京农业大学学报》2015,(2):212-218

[目的]探究不同拉枝处理对葡萄冬芽成花过程中花发育相关基因表达的影响。[方法]试验以‘夏黑’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Summer Black’)为试材,利用半定量RT-PCR技术研究不同拉枝处理对‘夏黑’葡萄长、中、短枝上的冬芽成花过程中Vitis vinifera FLOWERING LOCUS T(VvFT)、Vitis vinifera SUPPRESSOR OF OVER EXPRESSION OF CO 1(VvSOC1)、Vitis vinifera LEAFY(VvLFY)、Vitis vinifera APETALA2(Vv AP2)和Vitis vinifera FLOWERING LOCUS C(VvFLC)5个重要花发育相关基因表达的影响进行了分析。[结果]不同拉枝处理间花发育相关基因的表达量存在差异,其中经平拉处理的基因表达量最高;同一拉枝处理中,长、中、短枝间基因的表达量也存在差异,且中、短枝上的表达量明显高于长枝。[结论]拉枝处理对促进‘夏黑’葡萄成花是有一定的影响的。  相似文献   

AFLP标记在两个芒果品种间杂交F_1代的多态性及分离方式   总被引：3，自引：0，他引：3  

房经贵  章镇  马正强  刘大钧  王三红  LaviU 《中国农业科学》2000,33(3)

 本文利用 1 4对引物组合对 AFLP标记在两芒果品种间 ( Keitt× Tommy)杂交 F1代的多态性及分离方式进行的研究结果表明 ,AFLP标记在该 F1代群体中的多态性较高 ,分离位点出现的平均频率是 37.1 6%。分离方式有孟德尔分离、偏孟德尔分离及异常分离 3种方式。 3种分离位点出现的平均频率与数量分别为 2 1 .1 3%、1 49,1 5.74%、1 1 1 ,2 .2 7%、1 6,其中孟德尔分离位点占分离位点总数的 53.99%。该研究结果可为进一步利用该群体构建芒果 AFLP遗传图谱打下良好的工作基础并提供一定的理论依据。  相似文献   

vvi-miR160s介导VvARF18应答赤霉素调控葡萄种子的发育   总被引：1，自引：0，他引：1  

白云赫  王文然  董天宇  管乐  宿子文  贾海锋  房经贵  王晨 《中国农业科学》2020,53(9):1890-1903

【目的】研究vvi-miR160家族（vvi-miR160s）及其靶基因在‘魏可’葡萄种子发育过程中的作用,探究其应答赤霉素（GA）调控葡萄果实无核的潜在机理。【方法】采用miR-RACE、生物信息学分析、RT-qPCR、RLM-RACE等方法,鉴定vvi-miR160家族成员及其靶基因,分析vvi-miR160s及其靶基因应答GA的时空表达模式及其潜在功能。【结果】花前GA处理强烈抑制‘魏可’葡萄胚珠及种子发育,高效诱导其无核,且无核率达99.8%。克隆鉴定了VvMIR160s前体基因序列（501 bp）及成熟体序列,且它们在不同物种间具有较高的保守性;基于vvi-miR160s序列,预测到靶基因VvARF18,利用RLM-RACE技术检测到vvi-miR160s对VvARF18的裂解位点在第10和第11位之间,裂解频度9/17,证明VvARF18是vvi-miR160s的真实靶基因。该靶基因编码683个氨基酸,在398—411位存在核定位信号,且该蛋白亚细胞定位于细胞核上。VvARF18与其他物种间序列的同源保守性较高,基因结构相似,其中VvARF18蛋白与茶、烟草、梅花等物种亲缘关系较近。VvARF18启动子中包含4种作用元件,且含有较多激素相关元件。RT-qPCR结果显示,随着葡萄果实的发育,vvi-miR160c/d/e呈现‘V’形表达趋势,在硬核种子发育期表达较低,而VvARF18表现出与前者相反的表达趋势,在硬核种子发育期呈现高表达,表明vvi-miR160c/d/e对VvARF18负调控,但vvi-miR160a/b与VvARF18表达水平却不存在明显负相关。GA处理极显著地上调了vvi-miR160a/b在葡萄硬核种子发育期的表达,同时也显著抑制了VvARF18在同时期的表达,且它们的表达水平呈负相关,表明GA处理促进了vvi-miR160a/b对VvARF18的负调控作用;相反,GA减弱了vvi-miR160c/d/e对VvARF18的负调控作用。【结论】在vvi-miR160家族中,vvi-miR160c/d/e可能介导VvARF18在葡萄种子发育的特定阶段调控种子的发育形成,而vvi-miR160a/b可能主要介导VvARF18参与调控GA诱导葡萄种子败育的过程。  相似文献   

植物谷胱甘肽应答非生物胁迫的分子机制   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩键  白云赫  朱旭东  郑婷  张克坤  王晨  房经贵 《分子植物育种》2020,(5):1672-1680

谷胱甘肽(GSH)是一种普遍存在于植物中的抗氧化剂,在维持组织抗氧化防御和调节氧化还原敏感信号转导中起着关键作用。深入研究GSH在非生物胁迫中的作用,对从分子水平揭示植物GSH积累的调控机制具有重要意义。本研究从植物GSH代谢途径及其相关酶、GSH在植物应激反应中的调节、GSH参与植物激素代谢等方面进行综述,并对谷胱甘肽在植物生长发育、与其它信号通路间交互作用的研究前景进行展望,以期为植物谷胱甘肽代谢以及其在非生物胁迫方面的研究提供一定的理论参考。  相似文献   

干旱胁迫下‘宁玉’草莓生长发育及相关基因表达特点   总被引：1，自引：0，他引：1  

张超博  李傲  崔梦杰  刘众杰  陈立德  贾海峰  房经贵 《园艺学报》2017,44(12):2351-2360

为分析基因诊断草莓在干旱逆境条件下生长状态的可行性,以‘宁玉’草莓为试材,调查了不同干旱胁迫条件下的生长特点以及与生长素合成、脱落酸合成、花果发育、色素合成相关的10个基因的表达情况。研究结果表明:在不同干旱条件下草莓均可完成从营养生长到生殖生长的生命周期,所选基因也都行使并完成了其调控功能。与对照植株相比,在轻度和中度干旱胁迫(50%~65%土壤持水量)条件下,草莓植株的物候期较对照(80%土壤持水量)提早,而在严重干旱胁迫(35%土壤含水量时)条件下延缓,随着干旱胁迫条件的加重,草莓植株、叶片、果实明显变小,果实着色加深。每个基因在不同干旱条件下表达水平的变化趋势基本一致,且都与相应的物候期以及生长发育时间长短的变化情况相一致,但所选基因在几种干旱条件下其表达开始的早晚、表达水平的高低以及表达相应程度持续时间的长短存在不同。在轻度和中度干旱条件下,这些基因的表达时间提早,但持续时间较短,表达水平高于对照;而在重度干旱条件下,这些基因的表达开始的时间较对照延缓,表达水平较低但持续时间拉长。上述研究结果表明,利用基因的表达信息可以提前推断草莓植株在不同干旱条件下的生长发育状态,了解干旱胁迫对草莓生长发育的影响以及为是否需要提早采取管理措施等提供重要依据。  相似文献   

葡萄伤流液中内生菌分离鉴定与抗病功能分析     

郑婷  张培安  张克坤  纠松涛  朱旭东  宋长年  贾海锋  房经贵 《园艺学报》2018,45(11):2106-2112

为探究葡萄树液中内生菌的种类,对‘白罗莎里奥’葡萄伤流液中的内生菌进行分离纯化,得到4株普遍存在的有益菌株,根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性对其进行鉴定,并针对葡萄灰霉病病原菌进行抑菌测试。结果表明,4种内生菌分别为粘红酵母菌、隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌;平板抑菌试验显示,隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌均对灰霉病菌有一定的拮抗作用。对葡萄果粒的病菌侵染试验表明,隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌均能使果粒失水速率降低、灰霉病病斑缩小,抗菌物质类黄酮、总酚以及SOD、CAT、POD、PPO活性升高,灰霉病抗病相关基因VvHSF和VvDR下调,VvPR17、VvDW、VvChi和VvWRKY上调,且上调程度与抗病能力呈正相关,进一步表明了隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌对灰霉病菌有一定的抑制作用,在葡萄灰霉病防治中具有良好的应用潜力。  相似文献   

葡萄miR159及其靶基因VvGAMYB在花发育过程中的作用分析     

王梦琦  解振强  孙欣  李晓鹏  朱旭东  王晨  房经贵 《园艺学报》2017,44(6):1061-1072

以‘魏可’葡萄(Vitis vinifera L.‘Wink’)为试材,克隆得到一个葡萄赤霉素信号途径中的MYB转录因子基因Vv GAMYB。该基因开放阅读框(ORF)长1 680 bp,编码559个氨基酸,该蛋白序列含有GAMYB基因家族保守的R2R3 DNA结合域以及Box1、Box2、Box3保守域。洋葱表皮细胞的瞬时表达结果显示,VvGAMYB定位于细胞核中。VvGAMYB和其下游基因Vv LFY在葡萄花发育过程中的表达都呈现先上升后下降的趋势,而赤霉素处理促进了VvGAMYB和VvLFY的表达,从而使开花提前。VvGAMYB是miR159的靶基因,其作用受到miR159的调控。miR159和VvGAMYB的表达负相关,赤霉素处理下调miR159表达从而也降低了对VvGAMYB的裂解作用。由上述结果可以看出,VvGAMYB通过赤霉素开花途径参与葡萄的开花过程。在这一过程中,赤霉素抑制miR159裂解VvGAMYB的作用,从而上调VvLFY的基因表达,参与了调控葡萄开花过程。  相似文献