AAV-SaCas9敲除MSTN基因病毒的构建及鉴定     

汪新建  樊爽爽  翁少亭  杨国宇  褚贝贝  王江 《河南农业科学》2018,(1)

为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAVSaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV-293细胞3 d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度。结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×10~(12)vg/mL。  相似文献   

Galectin-2基因在断乳仔猪胃肠道组织的表达研究     

孙娅莉  韩立强  常磊  谢家喜  王月影  李宏基  杨国宇 《江西农业大学学报》2010,32(2)

从仔猪的十二指肠组织中克隆Galectin-2基因,研究Galectin-2在仔猪不同组织中的分布情况,并采用荧光定量PCR检测仔猪断奶前后其在胃肠道组织的表达差异情况;结果表明:克隆的猪Galectin-2基因序列被GenBank收录(收录号:FJ424704),其主要在胃肠道组织中表达,与断乳前相比,在断乳后Galectin-2的mR-NA表达在胃、回肠、结肠组织显著上调(P<0.05),而在十二指肠,空肠和盲肠中的表达与对照组相比差异不显著。  相似文献   

脂多糖对奶山羊肝脏代谢组学的影响   总被引：2，自引：1，他引：1  

王林枫  贾少丹  杨改青  朱河水  柳如意  严平  李明  杨国宇 《中国农业科学》2015,48(18):3701-3710

【目的】探寻脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）影响奶山羊肝脏营养代谢的特征代谢物（生物标记物）,阐明LPS引起肝脏代谢障碍的机制。【方法】选择12-18月龄,体重24-28 kg的关中奶山羊15只,平均分为3组（每组5只）,分别为对照组（CTL）、低剂量LPS处理组（LPS-L）和高剂量LPS处理组（LPS-H）。LPS-L和LPS-H分别腹腔注射20、40 μg?kg^-1 BW 的LPS溶液,CTL注射等容量生理盐水。24 h后, LPS-L和LPS-H追加LPS溶液。48 h后,静脉采血,分离血浆和血清,检测血液相关生化指标;然后活体采集肝脏组织,液氮保存。肝脏组织冻干后,用氢核磁共振（¹H-nuclear magnetic resonance,¹H-NMR）技术检测肝脏组织代谢物,运用数据库对检测到的代谢物变量进行化合物种类鉴别,再用模式识别方法中的偏最小判别二乘分析法(partia1 1east squares discriminant analysis,PLS-DA) 筛选生物标记物。【结果】血清生化指标表明,LPS-L和LPS-H处理的谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）水平较CTL显著升高(P<0.05);甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸（NEFA）、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白(LDL)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)的含量较CTL显著降低(P<0.05)。用¹H-NMR技术共检测到69种代谢物变量,包括氨基酸,醇类,糖类及其它代谢产物。PLS-DA分析发现,代谢物变量可将CTL、LPS-L与LPS-H组之间聚类区分,并找到9种组间差异显著的代谢物,这些代谢物主要与氨基酸、脂肪和碳水化合物等代谢途径相关,可作为肝脏在LPS诱导损伤状态下的标志物。【结论】LPS可显著影响奶山羊肝脏营养代谢,¹H-NMR代谢组学可以较为全面地检测到肝脏组织的代谢物,准确地筛选出差异代谢物,通过分析差异代谢物的代谢途径,阐明LPS引起肝脏代谢障碍的机理。  相似文献   

地塞米松对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈福伟  李文林  韩立强  王伟杰  李宏基  王月影  郭豫杰  鲁维飞  钟凯  林茂旺  杨国宇 《江西农业学报》2010,22(3):11-13

目的:探讨地塞米松对孤啡肽及其受体mRNA在小鼠附睾脂肪组织中表达的变化。方法:将12只雄性昆明小鼠,随机分为正常组和地塞米松组,分别采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化。结果:与正常组相比,地塞米松组孤啡肽及其受体的mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:地塞米松可能抑制孤啡肽及其受体基因的活性和合成,对孤啡肽及其受体基因的表达可能具有强烈的下调作用。  相似文献   

肌肽的抗氧化特性及其作用机理     

郭爽  杨国宇  韩立强 《猪业科学》2004,21(4):21-23

肌肽(β-丙氨酰-L-组氨酸)是存在于动物机体组织中的水溶性二肽,具有多功能的抗氧化性质。本文综述了肌肽的抗氧化特性及其作用机理。  相似文献   

仔猪水通道蛋白基因的克隆及断奶应激对其在胃肠道组织mRNA表达的影响     

韩立强  台玉磊  郭豫杰  鲁维飞  李宏基  查光明  李奎  杨国宇 《农业生物技术学报》2012,20(8):886-892

水通道蛋白(AQP)作为一种膜转运蛋白,对于调控肠道组织的水分子转运具有重要作用。本实验利用同源序列克隆法设计引物,从仔猪(Susscrofa)的消化道组织中克隆AQPs家族基因(AQP2~AQP11)(GenBank登录号分别为EU636238、EU161094、EU165525、EU192130、EU620575、EU024116、EU220426、EU220427、EU582021和EU220425),并对其进行生物信息学分析。采用荧光定量PCR研究断奶应激对于仔猪胃肠道组织中AQP1、AQP3、AQP8和AQP11的mRNA表达影响。生物信息学分析发现,猪AQPs家族基因含有高度保守的天冬酰氨-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构序列,基因表达分析发现,断奶组仔猪的AQP1基因在十二指肠、回肠和结肠组织的mRNA表达量与对照组相比显著上调(P<0.05);AQP3基因在胃和小肠组织的mRNA表达有显著上调(P<0.05);AQP8基因在胃和回肠组织中mRNA表达有显著上调(P<0.01),在其他组织中没有显著差异;AQP11基因在空肠组织的mRNA表达量显著上调了1.7倍(P<0.05)。这些研究结果表明,AQP基因可能在断奶应激引起的仔猪肠道腹泻中发挥重要作用。  相似文献   

荧光法快速检测乳品中碱性磷酸酶含量   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩立强  惠永华  朱河水  郭豫杰  杨国宇 《湖北农业科学》2008,47(4):471-472

以4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)为底物,通过荧光法检测乳制品中碱性磷酸酶的含量,并与国标法进行比较,发现荧光法批内变异系数为2.81%,批间变异系数为4.34%,精密度与国标法相似,最低检测限为0.003 U·mL-1,优于国标法;回收率100.17%,准确性较好,且操作步骤简便、快速.  相似文献   

一起禽病毒性关节炎的诊治     

王继雯  王卫东  李宏基  杨国宇 《中国畜牧兽医》2006,33(5):51-52

病毒性关节炎（VA）是鸡和火鸡常见的一种传染病,其特征为关节囊及腱鞘发生急性或慢性炎症.本病在多数情况下呈亚临床感染,死亡率低于5%.但因运动障碍、生长停滞、淘汰率高（有时废弃率高达25%～40%）、屠宰率下降、饲料转化率低及产蛋鸡减蛋等造成的经济损失非常严重,所以目前在养禽业发达的欧美国家被列为重要的家禽传染病之一.我国自20世纪80年代初发现该病以来,几乎所有养鸡地区都有过相关报道,有的地方阳性率甚至超过60%.但易被细菌性、营养性关节病所掩盖,所以至今仍未得到足够重视.  相似文献   

日粮中添加α-硫辛酸对肉鸡脂肪代谢的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨国宇  惠参军  崔平安  王月影  朱河水 《兽药与饲料添加剂》2003,8(3):1-2

选用200只AA肉鸡，分为4组，日粮中分别添加α-硫辛酸0，20，60，100mg·kg~(-1)，试验期49d。试验结果表明，日粮中添加适宜水平α-硫辛酸(60，100mg·kg~(-1))可降低血清胆固醇、甘油三酯浓度，而升高游离脂肪酸浓度，降低肝脂肪含量。  相似文献   

富乐旺对早期断奶仔猪生长性能和腹泻的影响     

高春生  霍军  范光丽  杨国宇  王艳玲 《家畜生态学报》2006,27(6):96-98

150头仔猪被随机分为5组，每组30头，进行饲养试验，探讨富乐旺对断奶仔猪生产性能和腹泻的影响。试验结果表明：与对照组相比，试验组平均日增重升高其中10mg／kg、15mg／kg和20mg／kg富乐旺添加组差异显著（P〈0．05）；平均日采食量升高；饲料系数和腹泻率、腹泻频率及死亡率降低。  相似文献