干扰素调节因子3基因敲除对伪狂犬病病毒增殖的影响     

张爽  樊爽爽  常雯茹  丁光绪  郭瑞珍  段利芳  杜永坤  褚贝贝  杨国宇  王江 《中国畜牧兽医》2019,(5)

试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7酶切鉴定后通过有限稀释法获得PK15-IRF3~(-/-)单克隆稳定细胞系。为验证敲除IRF3基因稳定细胞系是否构建成功,采用实时荧光定量PCR、Western blotting方法检测PRV相关基因及蛋白的表达,应用荧光显微镜和流式细胞术观察病毒复制情况并进行病毒滴度检测。结果显示,PK15-IRF3~(-/-)细胞系感染PRV-GFP后PK15-IRF3~(-/-)细胞荧光强度明显强于PK15细胞。感染PRV野毒(PRV-QXX)后PK15-IRF3~(-/-)病毒滴度明显强于PK15细胞,PRV的gE蛋白水平明显高于PK15细胞。在mRNA水平检测两种细胞中PRV TK基因的变化也得到相同的结果。进一步研究表明,在感染PRV-QXX后,PK15细胞中IFN-βmRNA会随着时间增加显著增高(P0.05),但PK15-IRF3~(-/-)细胞中IFN-βmRNA则无明显变化。上述结果表明,敲除IRF3基因后显著促进PRV的增殖,IRF3在病毒的复制中发挥着重要作用,为伪狂犬病的防控提供了新的方法和策略。  相似文献   

猪GRIFIN基因克隆与组织分布   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙娅莉  李宏基  韩立强  王伟杰  常磊  郭豫杰  杨国宇 《江西农业学报》2010,22(4):15-17

从仔猪的眼球中克隆GRIFIN基因,研究GRIFIN在仔猪不同组织中的分布情况。结果成功克隆出猪GRIFIN基因,全长466 bp,包含一个完整的开放阅读框架432 bp,编码144个氨基酸。组织分布结果显示GRIFIN在断乳仔猪多种组织均有分布。  相似文献   

抗菌肽的作用特点及应用前景   总被引：9，自引：1，他引：8  

布冠好  李宏基  杨国宇  汪国和 《动物医学进展》2005,26(3):26-28

抗菌肽是生物体抵御外源性病原微生物的入侵而产生的一类小分子多肽,与传统的抗生素相比具有分子量小、抗菌谱广、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。利用抗菌肽替代传统抗生素,对提高畜产品品质,推动绿色畜牧业的发展有着非常重要的意义。文章对抗菌肽的分类与特性、结构与活性、作用机理等方面进行了系统的分析,并阐述了目前在抗菌肽研究和应用领域中存在的问题及应用前景,以期为抗菌肽的更深层次的研究提供参考。  相似文献   

化学发光法检测苯甲酸钠对DNA损伤的保护作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄进  杨国宇  李宏基  熊程辉 《动物医学进展》2005,26(3):75-77

应用化学发光法检测了在菲咯啉- 铜 -维生素 C- 双氧水 DNA ( Phen- Cu2 VitC- H2O2- DNA)体系中苯甲酸钠对 DNA 损伤的保护作用。结果表明,苯甲酸钠对 DNA损伤有很好的保护作用,能明显抑制和延迟 DNA的化学发光,且其作用随着苯甲酸钠浓度的增大而加强。  相似文献   

仔猪腹泻的病因与综合防治     

张代  杨国宇  彭如伟  郇树权 《猪业科学》2004,21(11):43-45

在集约化、规模化的养猪生产中,仔猪腹泻十分普遍,常常导致饲料报酬率低,生长发育缓慢,甚至死亡,给养猪业带来很大的损失。为了有效控制疾病,尽量减少养猪生产中的损失,本文对仔猪腹泻进行了系统的病因分析并提出了综合防治的方法。  相似文献   

猪Mighty基因的克隆与组织表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张志强  李宏基  王伟杰  韩立强  王静  武宇晓  臧猛  台玉磊  杨国宇 《江西农业学报》2009,21(2)

Mighty基因是在骨骼肌中发现的一个新颖的肌形成前期因子。基于电子延伸序列,本试验成功克隆出了Mighty基因,其全长874 bp,开放阅读框为579 bp,编码有193个氨基酸,提交GenBank(EU559709)。同时,试验采取半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究了Mighty基因在仔猪18个组织中的分布和mRNA的表达水平。  相似文献   

兔CCL28基因的克隆与序列分析     

贾海丽  王艳玲  韩立强  王月影  朱河水  李平  刘涛  杨国宇 《江西农业学报》2009,21(4)

克隆并分析兔CCL28基因。基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,兔盲肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。克隆的兔CCL28基因片段长为133 bp,编码由44个氨基酸残基组成的CCL28前体蛋白,克隆的兔CCL28基因与绵羊、野猪的同源性分别为76.7%、77.4%,推导的氨基酸序列与绵羊、野猪的同源性分别为56.8%、56.8%,结构特征与绵羊、野猪的相一致。并注册GenBank(Accession.EU727201)。  相似文献   

ghrelin对生殖系统的调节作用   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨国宇  王艳玲 《动物医学进展》2005,26(9):37-39

ghrelin是新近发现的一个含有28个氨基酸残基的多肽,是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的天然配体,除具有调节GH分泌和能量平衡的功能之外,尚有其他许多功能。近年来体外或体内试验研究表明,ghrelin对生殖激素如LH、PRL具有一定的调节作用;另外,ghrelin及其受体系统广泛存在于生殖系统中。提示这一新发现的激素可能对生殖系统具有重要的调节作用。文章就ghrelin对生殖系统调节作用的研究进展加以综述。  相似文献   

国标法对乳碱性磷酸酶的检测及其在巴氏消毒上的研究     

惠永华  杨国宇  韩立强  王伟杰  苗培  林茂旺 《中国畜牧兽医》2007,34(9):68-70

采用国标法对乳中碱性磷酸酶（ALP）检测，结果显示：全乳和脱脂乳的酶活力分别为403.345、148.8147 μg/ml，变异系数分别为1.30%、2.99%。与国标法的不同之处：乳样最佳稀释比为1∶25，苯酚的最佳浓度为50 μg/ml；然后对其模拟巴氏消毒得出：63℃ 30 min基本使ALP灭活。  相似文献   

纳米铝胶佐剂增强猪细小病毒灭活疫苗猪体免疫的效果   总被引：1，自引：0，他引：1  

寇亚楠  刘石  王瑞宁  耿静微  徐卫松  陈红英  崔保安  杨国宇  魏战勇 《中国兽医学报》2015,(1):25-30

将20头35日龄断奶仔猪随机分为4组,将制备的纳米铝胶佐剂猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)灭活疫苗肌肉注射免疫接种,并以常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗组、市售PPV油乳剂灭活疫苗组为疫苗对照,生理盐水组做阴性对照,应用HI和ELISA检测接种猪的体液免疫水平,流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。体液免疫检测结果显示,PPV纳米铝胶佐剂疫苗组能显著提高机体产生抗体的速度,在首免后第2周产生有效保护抗体水平显著高于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗组(P0.05),在第3周其抗体水平达到峰值;细胞免疫检测结果显示,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,以纳米铝胶为佐剂制备的猪细小病毒灭活疫苗,能显著提高机体的免疫水平,并较早刺激机体产生抗体,具有较好的免疫保护效果。  相似文献