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菊花B病毒(CVB)是乙型线状病毒科(Betaflexiviridae)麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)成员,在浙江杭白菊基地普遍存在。为了能够特异、快速、简便检测CVB,利用SWISS-MODEL分析CVB外壳蛋白(CP)的三维结构,选择暴露在CVB CP三维空间结构外部的片段,片段之间使用连接肽串联以提高柔性,重复4个片段,根据大肠杆菌密码子的偏爱性将其相应的DNA序列进行优化,将合成的特异DNA序列连接表达载体pET-28a(+),转化至Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了纯化后大小约为14 kDa的融合蛋白;将其作为抗原免疫家兔制备抗血清,纯化获得相应抗体;对获得的抗血清和抗体进行酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白免疫印迹(WB)检测。间接ELISA检测结果表明,512 000倍稀释的抗血清可检测到1 μg抗原。纯化后最终得到浓度为15 mg·mL-1 的抗体,WB检测结果,1∶1 000稀释后的抗体可检测500 pg抗原,且能够特异性结合CVB CP蛋白。本研究制备的多克隆抗体为检测CVB提供了便利,也为后续CVB检测试纸条的开发提供了技术支撑。 相似文献
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甘蓝型油菜小孢子再生植株染色体倍数检测研究 总被引:18,自引:0,他引:18
采用流式细胞光度法 (FCM )对甘蓝型冬油菜 4个F1代杂种的小孢子再生植株 ,在幼苗期 (取再生株新长出的叶片嫩组织 )进行了染色体倍数检测。其矩形图上清晰地检测出单倍体、二倍体、三倍体和四倍体以及单倍体加二倍体二倍体加四倍体和三倍体加六倍体等嵌合体。小孢子再生植株中 ,单倍体和自发二倍体比率分别为 5 0 %~85 % (平均为 6 0 % )和 2 0 %~ 5 0 % (平均为 35 % )。FCM倍数检测结果与在油菜花蕾期进行的花器形态鉴别相一致。本文还讨论了采用FCM倍数检测的优势及其检测进展。 相似文献
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将油菜素内酯(brassinosteroids,BR)超敏感受体激酶基因Sud1与水稻抗病受体激酶基因Xa21经体外点突变后构建了带SUD1 LRR-JM结构域与XA21激酶域 (kinase)的合成受体(chimera)基因SNRG1, 同时构建了SUD1 LRR突变体对照受体基因SNRGmL和XA21 kinase突变体对照受体基因SNRGmK.应用基因枪(particle bombardment)转化技术成功将SNRG1, SNRGmL和SNRGmK导入粳稻模式品种台北309的胚性愈伤组织中,并由此获得了再生植株和细胞株.经PCR、Northern blot 分子检测和表型观察证实外源基因已经转入并整合到水稻基因组.防卫基因表达的结果表明SNRG1可能已在体内微量的BR作用下,激发了水稻的防卫反应.该结果为进一步研究XA21激酶的抗性激发奠定了基础. 相似文献
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采集元胡种植前后水稻冬闲田的土壤样品,采用平板法分离土壤中微生物,rDNA序列分析微生物种类,同时测定土壤中氮、磷、钾、微生物碳氮等含量。结果显示,与水稻收获后翻耕田块相比,种植元胡田块细菌数量显著降低(降低76.9%),放线菌数量显著提高(提高812.2%);种植元胡田块全氮、全磷、全钾、碱解氮和速效钾等含量无显著变化,但显著提升了土壤速效磷、土壤微生物碳氮和土壤微生物熵;冬闲田和种植元胡田块差异不显著。元胡667 m2产量为118 kg,市场价格43元·kg-1,667 m2效益5 074元。研究表明,水稻+元胡种植模式可作为浙江地区水稻冬闲田的一种新型的栽培模式。 相似文献
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为明确健康脱毒种苗及栽培方式对杭白菊产量和品质的影响,以2020年早小洋菊二代脱毒苗和早小洋菊常规苗为试验材料,考察脱毒种苗和栽培方式对杭白菊农艺性状、产量和品质的影响。结果表明,健康脱毒种苗较常规苗,其多项农艺性状的指标均有提高,增产效果显著,每公顷增产1.55 kg,增幅达27.26%。在栽培方式中,发现直立型栽培的农艺性状和产量品质均优于常规压条种植,其中以双条双株栽培方式最佳,其株高、茎粗等农艺性状得到提升,产量增幅明显,每公顷增产3.67 kg,增幅达50.6%,且绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、总黄酮含量相比于《药典》标准分别提高了170%、275%、28.6%和108%。在不同时期的激素处理中,发现在花蕾膨大中期喷施0.06 mol/L GA3,可显著提高杭白菊的品质。本研究结果表明,采用健康脱毒种苗及配套的优化栽培能有效提高杭白菊的农艺性状和品质,“良种+良法”模式为杭白菊产业的提质增效提供了理论基础和技术支撑。 相似文献
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将抗虫PI基因构建到pIG121Hm质粒的T-DNA上,利用农杆菌LBA4404介导转化烟草,获再生植株.经GUS检测和Dotblot分析,证实外源基因已插入植物细胞基因组中,再生植株的转化率为64.3%. 相似文献
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以大白菜成青2号为材料,从萌发5天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加8.2%葡萄糖,0.4mg/L2,4-D,0.4mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的改良KM8p液体培养基进行浅层培养.培养13天后,用含5.2%葡萄糖的KM8p培养基以1∶1进行稀释.4~6周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约0.4~0.5mm的愈伤组织经MS培养基(附加2%蔗糖,0.8%的琼脂,1.5mg/L6-BA,0.5mg/LNAA和0.2mg/L2,4-D)诱导植株分化.59%的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株.0.8mg/LIBA和400mg/L的羧苄青霉素对分化再生有促进作用. 相似文献
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根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草 总被引:5,自引:0,他引:5
将抗虫PI基因构建到pIG121Hm质粒的T-DNA上,利用农杆菌LBA4404介导转化烟草,获再生植株。经GUS检测和Dot blot分析,证实外源基因已插入植物细胞基因组中,再生植株的转化率为64.3%。 相似文献