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为评估市售商品化猪乙型脑炎(JE)弱毒活疫苗的质量以及实验室条件下疫苗的保存稳定性,采用TCID50效价测定和RT-PCR检测病毒的保守基因(E基因和C/pr M基因)2种方法对2012年市场销售的主要国产疫苗产品进行了质量评估,同时将供试疫苗产品置-30℃保存3、6、9、12个月后分别取样测定乙脑病毒(JEV)TCID50效价。结果表明,市售的猪乙脑同类疫苗中不同品牌产品之间活病毒含量差异较大,最高可达104.33TCID50/头份,但部分产品含量极低,甚至难以检测到活病毒;E基因和C/pr M基因的RT-PCR扩增产物丰度的差异与TCID50测定结果基本一致。多数疫苗产品在有效期内病毒效价基本稳定,同一厂家生产的疫苗保存期越短,其中相对活病毒越多,效价越高。 相似文献
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血清1型马立克病病毒（MDV-1）感染引起的鸡马立克病（MD）一直以来被认为是研究病毒诱导肿瘤发生机制的理想模型。此前研究发现，MDV-1编码的miR-M4-5p是宿主癌基因miR-155的病毒同源物，从基因组中敲除miR-M4-5p可显著降低MDV-1的致病性和致瘤性，表明miR-M4-5p可能是MDV-1诱导肿瘤发生的重要调控因子。为进一步揭示miR-M4-5p的调控机制，以CEF细胞总RNA反转录产物cDNA为模板，利用hybrid-PCR技术构建了miR-M4-5p的候选靶基因文库。通过基因克隆、PCR鉴定及序列比对分析，获得128个候选基因序列，有73个基因的3'-UTR存在miR-M4-5p的潜在结合靶点，其中23个3'-UTR结合靶点与miR-M4-5p完全互补配对。通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR分析，对miR-M4-5p与3'-UTR的体内外相互作用以及候选靶基因的表达水平进行分析和验证，最终鉴定DPT、TMEM230和DCLK1为miR-M4-5p调控的宿主靶基因。本研究为后续进一步阐明miR-M4-5p在MD肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。 相似文献
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为了解目前市售商品化猪流行性乙型脑炎弱毒活疫苗的质量,利用TCID50效价测定和RT-PCR 2种方法对2009-2011年市场销售的主要国产疫苗产品进行了检测。结果发现,目前市售的疫苗产品中活病毒含量差异较大,虽然部分产品可达103.80 TCID50/头份,但有些产品含量极低。RT-PCR检测结果与TCID50效价测定的结果基本一致。这表明目前市售的乙脑疫苗质量良莠不齐,部分疫苗的抗原含量可能难以满足生产要求,这为规模化猪场乙脑防控的疫苗选择提供了重要参考依据。 相似文献
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2011-2012年,河南省大面积暴发商品蛋鸡群肿瘤病,临床剖检疑似马立克氏病(Marek’s disease,MD),为进一步确诊病因,根据马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)的meq、gB和pp38基因分别设计了3对特异性引物,利用PCR技术对送检的疑似病例鸡的肝脏和脾脏样品分别进行了检测和分析。结果显示,各地区随机抽取的5只病例鸡肝脏、脾脏样品中均扩增出3种不同大小的MDV特异性病毒基因PCR产物,这表明MDV在河南鸡群中广泛流行,并导致了商品蛋鸡群MD的暴发。研究结果填补了河南省MD流行病学空白,为今后MD的临床快速诊断及有效防控提供了重要参考依据。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病病毒在DT40细胞中的增殖规律 总被引：1，自引：0，他引：1
为了系统地研究IBDV弱毒在DT40细胞系中的增殖规律,作者探讨了IBDV弱毒株对DT40细胞的侵染性以及不同培养条件对IBDV在该细胞中增殖的影响.结果表明,在基础维持液培养条件下,IBDV TAD和HN32个弱毒株均不需要传代适应过程即町直接感染DT40细胞,并在其中增殖;而在细胞最佳生长液条件下,IBDV可伴随宿主细胞的快速分裂而增殖,并可在较长培养时间内进行连续、大量的病毒收获.本研究表明DT40细胞可以作为深入探讨IBDV分子致病机制的良好靶细胞模型,其同时也可能为生产IBDV商品化疫苗提供一种潜在便捷的工具细胞. 相似文献
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本研究利用RT-PCR技术,从鸡法氏囊淋巴瘤细胞系DT40中扩增sIgMλ轻链基因并在E.coli中进行了表达.序列分析结果表明,sIgMλ轻链基因全长852 nt,含有一个长度为657 nt的ORF及长度为195 nt的3'-UTR,该基因与鸡Igλ基因的序列同源性为95%,差异位点主要存在于λ轻链的可变区.氨基酸序列预测结果表明,DT40 sIgMλ蛋白与鸡lgλ蛋白的序列同源性为92.6%.构建的原核表达载体pET-λ在E.coli BL21(DE3)中成功的获得大量表达.本实验为进一步研究sIgM在IBDV感染法氏囊B淋巴细胞中的作用奠定了基础. 相似文献
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为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒（Japenese encephalitis virus,JEV）病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250～2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新生牛血清的DMEM后在37℃、5%CO2条件下可至少良好维持72～96 h。在此条件下并基于Reed-Muench法测定病毒效价的原理,本文建立了准确测定JEV TCID50的方法,利用该方法对JEV野毒分离株及商品疫苗进行测定,均获得稳定、准确的病毒效价。本实验为JEV的体外培养、病毒定量、疫苗评价等提供了一种准确、稳定、易判定的参考方法。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病病毒与DT40 sIgM λ轻链的相互作用分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为探讨sIgM λ轻链在IBDV感染法氏囊B淋巴靶细胞过程中的作用,对DT40细胞sIgM λ轻链与IBDV的相互作用进行了研究。利用蛋白表达、VOPBA试验、病毒结合与结合抑制试验检测了sIgM λ轻链及DT40细胞结合IBDV的能力。结果表明:sIgM λ轻链在体外能够特异性地结合多种不同毒株的IBDV,这种结合与病毒毒力无关;病毒结合与结合抑制试验结果表明,超过半数的DT40细胞可以结合IBDV,这种结合能够被sIgM λ轻链特异性单抗有效阻断。研究结果表明,sIgM λ轻链是DT40细胞膜表面上IBDV的重要结合位点之一,这为进一步利用DT40细胞研究IBDV感染B淋巴靶细胞的分子机制提供了重要线索。 相似文献