茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化   总被引：1，自引：1，他引：0  

骆洋  王弘雪  王云生  卢忠尉  刘亚军  单育  陈啸天  叶辉  高丽萍  夏涛 《茶叶科学》2011,31(4):326-332

茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白。HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性。  相似文献   

茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析     

姚胜波  王文钊  李明卓  许玉娇  王云生  刘亚军  高丽萍  夏涛 《茶叶科学》2015,35(1):35-44

肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列,其中开放阅读框长1β518βbp,编码505个氨基酸,推测蛋白分子量为58.15βkD,理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1β840βbp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外,还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体pYES-DEST52上,并在酿酒酵母WAT11中进行真核表达。利用LC-MS方法检测酶反应产物,结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。  相似文献   

玉米催芽播种的初步研究     

王云生 《东北农业大学学报》1962,(3)

前言黑龙江省作物生育期较短,玉米收获时,果穗含水量较大,尤其是栽培的晚熟品种,常不及充分干燥,严寒即降临,保管不当常使种用玉米发芽力大为降低。生产上常被迫利用发芽率低的玉米种子播种,结果,浪费了大量种子,又常造成缺苗,使玉米生产受到一定影响。如何利用发芽率低的种用玉米,是黑龙江省部分地区目前玉米生产中值得  相似文献   

玉米轮回选择测交株表型值与配合力及遗传力的关系     

张永林  王云生 《东北农学院学报》1992,23(1):1-5

  相似文献   

茶树幼苗发育过程中儿茶素合成与积累变化的研究   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

单育  李伟伟  王云生  刘亚军  王弘雪  王晓帆  卢忠尉  田艳维  高丽萍  夏涛 《安徽农业大学学报》2011,38(4):600-605

以茶树幼苗为材料,以HPLC、qRT-PCR为分析手段,分析了茶树幼苗发育过程中根茎叶的儿茶素含量变化及相关合成基因的表达差异。结果显示,在发育过程中,不同器官中儿茶素总量呈现不同的变化规律,在幼苗发育25 d、45 d、75 d和90 d时,茶树叶片的儿茶素含量(干重)呈下降趋势,分别为79.99、57.69、49.29和33.26 mg.g-1;茎中(干重)的为14.40、11.89、8.54和9.29 mg.g-1;根中的含量(干重)很低,分别为1.03、0.60、0.82和1.62 mg.g-1;在发育25 d的茶树幼苗茎叶中6种儿茶素单体均可以检测到;根中缺乏酯型儿茶素,但在发育10 d的根中却可以检测到。在茶树幼苗不同器官中,酚类物质合成相关基因表达有较大的差异性。  相似文献   

茶树愈伤诱导及不同儿茶素含量细胞系筛选     

刘亚军  王正荣  王婕  杨冬青  郭丽丽  孙美莲  王云生  高丽萍  夏涛 《安徽农业大学学报》2014,41(4):564

茶树组织培养是开展茶树次生代谢及调控研究重要的研究平台。在建立茶树愈伤组织培养体系的基础上,开展了茶树含不同儿茶素含量的细胞系筛选方法的研究。结果表明,在H、S和B 3种诱导培养基中,只有B培养基适合于诱导生长迅速、组织疏松、质地均一且具有一定儿茶素合成能力的愈伤组织。从外植体方面考虑,种子诱导出的愈伤组织具有较强的植株再生能力;幼茎和叶片诱导出的愈伤组织,其生长速度快、组织疏松,但再生能力弱。在此基础上,采用目视法和二分法,结合HPLC分析,对B培养基诱导的细胞系“yunjing63Y”进行了筛选,得到含不同儿茶素含量的细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”。分析结果显示,细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”的儿茶素组分与鲜叶相似,且二者儿茶素含量（干重）差异较大,前者为7.77 mg·g^-1,后者为0.13 mg·g^-1。  相似文献