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【目的】选取MAP2K和GSK3的抑制剂PD0325901、CHIR99021(简称2i)对牛体细胞核移植(SCNT)胚胎进行处理,研究这2种小分子物质对胚胎发育及其多能性基因(OCT4、SOX2、KLF4、DPPA3、CDX2、GATA4、NANOG)表达的影响。【方法】以牛皮肤成纤维细胞为供体,牛MⅡ期卵母细胞为受体,构建牛SCNT胚胎,采用添加2i(PD0325901 0.4μmol/L,CHIR99021 3μmol/L)的胚胎培养液体外培养SCNT胚胎72h,以mSOF+DMSO培养液处理的SCNT胚胎及体外受精(IVF)胚胎为对照,统计核移植胚胎体外发育率,并对胚胎多能性相关基因的表达进行实时定量PCR检测。【结果】与对照相比,2i处理能使SCNT胚胎囊胚率和囊胚细胞总数显著增加,凋亡细胞率显著下降,多能性相关基因NANOG和SOX2表达量上调,而细胞分化相关基因GATA4的表达量下调,其他基因表达量变化不显著,从而使SCNT胚胎的发育状态更接近于IVF胚胎。【结论】2i共处理72h可优化SCNT胚胎发育状态。 相似文献
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为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含细胞松弛素B(Cytocha-lasin-B,CB)浓度分别为5、7.5、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;去核时操作液中细胞松弛素B浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。 相似文献
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为进一步研究牛卵巢的发育规律,明确卵巢长、宽、高与卵巢重量的相关性,建立卵巢性状间最优回归方程,对389头处于发情后期中国荷斯坦奶牛的卵巢进行描述统计,并进行了相关性与回归性分析,建立了卵巢重量与卵巢长、宽、高的最优回归方程。结果显示,卵巢长、宽和高与卵巢重量呈显著相关,其中卵巢高与卵巢重量相关性最强(r=0.480)。通径分析结果显示,卵巢长、宽、高主要通过直接作用影响卵巢重量,其中卵巢高对卵巢重量的直接作用最强(P=0.422)。以卵巢重量为因变量,卵巢长、宽、高为自变量建立的最优回归方程为y=0.192x1+0.291x2+0.321x3-11.335(R2=0.715,P<0.01)。 相似文献
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体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。 相似文献
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本试验旨在研究饲粮中全棉籽比例对育肥荷斯坦公牛瘤胃发酵与微生物区系、甲烷排放及肝脏碳代谢相关基因表达的影响。选取44头体重相近、健康的育肥荷斯坦公牛,随机分为4组,每组11头,各组平均体重差异不显著(P>0.05)。Ⅰ(对照)、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组公牛分别饲喂含有0、5%、10%和15%全棉籽的饲粮。各组饲粮能量和粗蛋白质水平基本相同。试验期为90d。结果表明:1)在瘤胃发酵参数中,与Ⅰ组相比,Ⅳ组的氨态氮、微生物蛋白浓度以及乙酸和丙酸比例分别提高了31.34%、40.00%、2.26%和15.20%(P<0.05),丁酸比例降低了4.46%(P<0.05),乙酸/丙酸和pH无显著变化(P>0.05)。2)从瘤胃细菌属水平的相对丰度分析,Ⅳ组中普雷沃氏菌属-1、密螺旋体属-2的相对丰度极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01);Ⅳ组的琥珀酸弧菌科UCG-002的相对丰度显著高于Ⅰ组(P<0.05);理研菌科RC9肠道群、普雷沃氏菌科UCG003、瘤胃杆菌属、疣微菌科NK4A214群、纤维杆菌属、未识别的叶绿体和拟杆菌属的相对丰度各组间的差异均不显著(P>0.05)。3)从瘤胃产甲烷古菌属水平的相对丰度分析,Ⅳ组甲烷短杆菌属、甲烷丝状菌属的相对丰度均为4组中最低,并显著低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅲ组Absconditabacteria_unidentified_SR1的相对丰度最高,显著高于Ⅰ组(P<0.05);甲烷球形菌属、甲烷微球菌属、甲烷螺菌属的相对丰度各组间均未表现出显著差异(P>0.05)。4)饲粮中添加不同比例的全棉籽均降低了育肥荷斯坦公牛的甲烷排放量,其中Ⅳ组的甲烷排放量比Ⅰ组降低了22.68%(P<0.05)。5)相关分析发现,育肥荷斯坦公牛的平均日增重与甲烷排放量呈显著负相关(P<0.05),甲烷短杆菌、甲烷丝状菌和琥珀酸弧菌科菌群的相对丰度与甲烷排放量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01)。6)饲粮中添加15%的全棉籽后,育肥荷斯坦公牛肝脏中甲基丙二酸单酰辅酶A变位酶(MUT)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)的mRNA表达量均呈上调趋势,其中MUT的mRNA表达量极显著高于Ⅰ组(P<0.01),PEPCK的mRNA表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05)。综上所述,在本试验条件下,饲粮中添加15%的全棉籽可有效调控荷斯坦公牛瘤胃发酵及微生物区系,显著降低甲烷排放量以及上调肝脏中碳代谢相关基因的表达。 相似文献
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应用猪Ea花环抑制试验测定山羊和牛EPF活性 总被引:3,自引:0,他引:3
应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验,建立了山羊和牛EPF测定的方法,并用该法检测了山羊和牛妊娠早期血清中EPF的活性.试验结果表明,猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于二者EPF活性的测定;妊娠早期(1~21 d)山羊血清中存在EPF活性,其RIT值平均为16.9±1.8,第1天和第8天出现活性峰值(RIT值分别为18.8±1.1,21.2±1.8),其余时期EPF活性相对稳定,呈现一定的规律性变化;奶牛在妊娠第15天可检测到高活性的EPF(10.86±l.07),与空怀奶牛(4.07±0.89)相比,差异极显著(P<0.01). 相似文献