IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性     

孙敏  郝飞  张纹纹  李文良  杨蕾蕾  毛立  程子龙  刘茂军 《畜牧兽医学报》2023,54(2):736-743

旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta (DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell, MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes, ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID₅₀及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^-1,Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基...  相似文献   

猪肺炎支原体的分离方法   总被引：2，自引：0，他引：2  

韦艳娜  白昀  孔猛  冯志新  刘茂军  熊祺琰  白方方  吴叙苏  邵国青 《江苏农业学报》2012,(1):104-107

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示,经PCR鉴定,剪碎法分离到1株猪肺炎支原体,分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体,分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体,分离率为2%。以上结果表明,研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响,但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此,研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。  相似文献   

猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重PCR检测方法的建立与应用     

刘茂军  邵国青 《中国兽药杂志》2012,46(9):7-10

根据猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的16S rRNA基因设计3条引物, 建立Mhp和Mhr的双重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性和敏感性试验,并使用建立的方法检测了临床样品和疫苗样品。结果显示该方法具有良好的特异性,最低可检测到0.66ng 的Mhp基因组DNA和0.58 ng Mhr基因组DNA,临床样品和疫苗样品检测结果与普通PCR检测结果一致。该双重PCR方法,可用于Mhp与Mhr的鉴别、诊断以及疫苗纯粹性检查,快速而准确。  相似文献   

猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究     

刘茂军  杜海霞  杜改梅  车巧林  张悦  熊祺琰  白方方  王海燕  冯志新  邵国青 《中国预防兽医学报》2012,(12):959-962

为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3’端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46 ku;western blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的免疫反应原性;表达的截短蛋白与Mhp的黏附试验结果表明,该重组蛋白可以粘附于猪肺上皮细胞(SJPL)表面,并部分抑制Mhp对SJPL的粘附作用。本研究结果为Mhp致病机制的进一步研究奠定了基础。  相似文献   

猪支原体肺炎活疫苗(168株)临床试验   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘茂军  苗连叶  赵永前  苏国东  周勇岐  王继春  孙佩元  邵国青 《畜牧与兽医》2009,41(8)

本试验用中间试制生产的猪支原体肺炎活疫苗(168株),在河南3个猪场进行了临床试验,先后免疫猪7000多头,观察发病率和生产指标。屠宰场跟踪随机抽样,观察屠宰后肺部病变,结果表明:猪支原体肺炎发病率减少,肺部病变减轻,而生产指标有明显提高,饲料报酬率提高。这表明猪支原体活疫苗对猪安全有效,能有效预防猪喘气病。  相似文献   

江苏省部分地区动物弓形虫病血清学调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

孔猛  白昀  丁志勇  刘茂军  冯志新  熊祺琰  白方方  车巧林  王海燕  王占伟  韦艳娜  邵国青 《江苏农业科学》2012,(2):171-173

以间接血凝(IHA)试验方法对江苏省部分地区(徐州、连云港、盐城、宿迁、南通、泰州、扬州、南京、常州、宜兴、昆山)动物弓形虫病进行血清学调查。试验血清样品稀释度在1∶64时,致敏血球达到50%以上凝集的血清样品判为阳性。结果在所调查的1 100份血清样品(猪、牛、羊、猫、狗等动物)中弓形虫抗体呈阳性者为145份,占总调查血清数的13.2%,其中939份猪血清样品中阳性样品数120份,占总调查猪血清样品的12.8%,总体反映出江苏省内动物弓形虫病感染的概况。  相似文献   

猪肺炎支原体168株特异性单抗的制备及鉴定     

王海燕  缪芬芳  冯志新  刘茂军  邵国青 《江西农业学报》2012,(11):125-128

将猪肺炎支原体168株全菌蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,3次亚克隆后,获得了4株针对168株全菌蛋白的单抗,分别将其命名为2F5、2G7、4F5、5E9。Western-blot检测结果表明,2G7、4F5与猪肺炎支原体具有特异性反应条带,不与猪鼻支原体、大肠杆菌反应。亚型鉴定结果表明,两株特异性单抗(2G7、4F5)的亚型属IgG1,轻链为κ型,2F5、5E9亚型属IgG2a,轻链为κ型。间接免疫荧光结果表明,4株单抗均与猪肺炎支原体168株有特异性荧光反应,特异性单抗的获得为猪肺炎支原体的检测及机理研究奠定基础。  相似文献   

抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立     

逯晓敏  冯志新  刘茂军  吴叙苏  甘源  张映  邵国青 《畜牧兽医学报》2009,40(10)

为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测,作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法.在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后,选择后者作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化.最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接ELISA检测方法.批间与批内试验结果证明该方法具有很好的稳定性.初步应用表明,该方法可用于猪肺炎支原体感染或免疫状态的临床监测.  相似文献   

林下间作菊花的效益分析     

王清斌  胡国朋  王占伟 《河北林业科技》2007,(2):17-17

<正>近年来,林业的生态效益、社会效益被越来越多人认可,林业事业得到了各级领导的重视和支持,林业发展正面临新一轮的好机遇,但在平原发展林业,尤其是在以农业为主的平原地区发展林业,林、农争地的矛盾仍然比较突出。如何在发展林业取得生态效益的同时,又使群众的收入得到增加,一直是摆在务林人面前的一个课题。为此,肥乡在这方面进行了初步的探索。  相似文献   

猪喘气病的诊断     

刘茂军  邵国青 《兽医导刊》2009,(12):18-20

猪喘气病又名猪地方流行性肺炎或者猪支原体肺炎,是由猪肺炎支原体引起的一种接触性慢性呼吸道传染病.本病广泛存在于世界各地,发病率一般在50%～80%.患猪生长率下降,饲料利用率降低.其主要症状是咳嗽和气喘,病变特征是肺的尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈"肉样"或"虾肉"样实变.本病死亡率不高,但其易诱发有其他病原混合感染,饲养管理不善以及环境差等因素也会造成严重的死亡,造成养猪业巨大的经济损失.因此,该病在猪病中占有重要地位.本病的早期诊断较为困难,因其临床症状随管理和环境改变等应激而不一致,且常常是亚临床的,没有明显症状.因此,科学诊断猪喘气病具有十分重要的意义.  相似文献