鄂西地区稻瘟病菌生理小种文库的构建及初步鉴定     

龙子文  周杰  王春台  徐鑫 《安徽农业科学》2012,40(24):12065-12067

[目的]构建鄂西地区的稻瘟病菌文库,并对其进行初步的鉴定分析。[方法]从鄂西地区7个水稻主产区不同的水稻品种上收集稻瘟病感病稻秆,进行分离、纯化和菌落形态的初步鉴定分析,并利用RAPD和REMAP分子标记对该文库进行聚类分析。[结果]建立了含有52种菌株的稻瘟病菌生理小种文库;聚类分析结果表明,鄂西地区的稻瘟病菌群体结构呈现多样性和复杂性,遗传谱系与菌落形态之间并不存在简单的一一对应关系。[结论]该研究为预测鄂西地区病原菌群体的变化趋势以及水稻抗病品种的选育,奠定了基础。  相似文献   

紫外分光光度法测定过氧化氢酶的活性   总被引：14，自引：1，他引：14  

王春台  徐同  刘学群 《华中农业大学学报》1987,(1)

过氧化氢酶的活性常作为植物代谢强度及抗寒抗病能力强弱的一个生理指标,其测定方法常用碘量滴定法。该法重现性较差,误差大,延续时间长,尤其在大量样品的分析过程中工作量就更大。为了克服碘量法的不足,作者对经典碘量法进行了改进,即用紫外分光光度法代替硫酸钠滴定游离的碘。结果表明,新改进的方法测出的数据较稳定可靠。  相似文献   

水稻OsV3IP2和OsV3IP3原核表达与鉴定     

程英  胡颖  覃永华  程钢  王春台 《湖北农业科学》2017,56(17)

通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息学软件对蛋白质的二级结构进行预测,将OsV3IP2、OsV3IP3分别分为2个和4个部分。将其分别克隆到p ET32a后,采用0.2 mol/L IPTG在10、20、30℃诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,证明OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1表达的融合蛋白存在于上清液中,而OsV3IP 3-2、OsV3IP 3-3表达的融合蛋白存在于沉淀中,获得了OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1可溶性目的蛋白,为进一步体外验证OsVDAC3与OsV3IP2、OsV3IP3的互作奠定了基础。  相似文献   

水稻OsVDAC4诱饵蛋白载体的构建及鉴定     

白雪琪  谭艳平  覃永华  王亚楠  杨武  龚秋涵  刘学群  王春台 《安徽农业科学》2018,46(36)

  相似文献   

一个烟草糖基转移酶启动子在转基因烟草植株中的表达分析（摘要）   总被引：3，自引：0，他引：3  

王雪  谭艳平  周杰  王春台  刘学群 《农业科学与技术》2010,11(4):83-85,155

[目的]研究从烟草中克隆的1个受水杨酸和茉莉酸甲酯诱导表达的新的糖基转移酶基因（sm-Ngt）启动子部分缺失片段在烟草中的表达。[方法]以转sm-Ngt5个不同长度的5’端缺失的启动子与Gus基因融合植物表达载体的T1代转基因植株为材料,用茉莉酸甲酯（MeJA）和水杨酸（SA）处理16h后分别进行GUS组织化学染色和荧光定量法测定GUS酶活性,分析水杨酸和茉莉酸甲酯对sm-Ngt5个不同长度的5’端缺失的启动子表达的影响。[结果]在5个不同缺失片段启动子的转基因T1代生长30d的植株中,转-220～0bp片段的GUS染色最少,转-524～0bp及-468～0bp片段的染色最深。在没有MeJA和SA诱导处理时,-524～0bp和-468～0bp2个启动子片段启动的GUS活性最高,远高于-1150～0、-800～0、-220～0bp片段的活性,并且不是由于基因拷贝数而引起的（Southern杂交结果）;-800～0bp启动子片段启动的GUS活性受到MeJA和SA双重诱导,-1150～0bp启动子片段启动的GUS活性受到MeJA的诱导。[结论]在sm-Ngt启动子的-524～-220bp存在提高启动子活性调控元件,-1150～-524bp存在抑制启动子活性的序列,并且存在MeJA和SA双重诱导启动子活性调控元件。  相似文献   

籼稻成熟胚愈伤组织继代培养过程中内源多胺含量的测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡文  王维旭  周杰  王春台  刘学群  谭艳平 《湖北农业科学》2010,49(7)

采用高效液相色谱法对诱导产生的籼稻粤泰B(YTB)成熟胚愈伤组织继代培养过程中内源多胺组分和含量进行了测定。结果表明采用XDB-C18柱流动相梯度(从40%甲醇到80%甲醇)洗脱可以使Put、Spd和Spm3种多胺组分得到很好的分离。水稻粤泰B成熟胚愈伤组织继代培养5d后体内Put和Spd的含量明显增加,而Spm的含量基本不变。推测Put和Spd对水稻愈伤组织的生长发育可能有重要的作用,可为优化水稻愈伤组织培养基的组分提供参考。  相似文献   

一个烟草糖基转移酶启动子在转基因烟草植株中的表达分析     

王雪  谭艳平  周杰  王春台  刘学群 《安徽农业科学》2010,38(18):9426-9428

[目的]研究从烟草中克隆的1个受水杨酸和茉莉酸甲酯诱导表达的新糖基转移酶基因（sm-Ngt）启动子部分缺失片段在烟草中的表达。[方法]以转sm-Ngt5个不同长度的5’端缺失的启动子与Gus基因融合植物表达载体的T1代转基因植株为材料,用茉莉酸甲酯（MeJA）和水杨酸（SA）处理16 h后分别进行GUS组织化学染色和荧光定量法测定GUS酶活性,分析水杨酸和茉莉酸甲酯对sm-Ngt5个不同长度的5’端缺失的启动子表达的影响。[结果]在5个不同缺失片段启动子的转基因T1代生长30 d的植株中,转-220～0 bp片段的GUS染色最少,转-524～0 bp及-468～0 bp片段的染色最深。在没有MeJA和SA诱导处理时,-524～0 bp和-468～0 bp 2个启动子片段启动的GUS活性最高,远高于-1 150～0、-800～0、-220～0 bp片段的活性,并且不是由于基因拷贝数而引起的（South-ern杂交结果）;-800～0 bp启动子片段启动的GUS活性受到MeJA和SA双重诱导,-1 150～0 bp启动子片段启动的GUS活性受到MeJA的诱导。[结论]在sm-Ngt启动子的-524～-220 bp存在提高启动子活性调控元件,-1 150～-524 bp存在抑制启动子活性的序列,并且存在MeJA和SA双重诱导启动子活性调控元件。  相似文献   

水稻线粒体nad1基因超表达载体的构建和遗传转化(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

李炜  谭艳平  王春台  刘学群 《（《农业科学与技术》）编辑部》2011,(7)

[目的]克隆线粒体相关基因nad1,获得转nad1的转基因水稻植株。[方法]采用TRIzol法提取水稻幼苗总RNA,以反转录的cDNA为模板,扩增得到nad1;将nad1接到线粒体信号肽Rf1b的5 (Rf1b5 ),装载到pCAMBIA1305.1双元表达载体,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行遗传转化。[结果]克隆的目的基因nad1大小为978 bp,成功构建了携带线粒体信号肽的nad1植物表达载体,并获得了转nad1基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中过表达nad1对水稻生长的影响奠定了基础。  相似文献   

稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘早利  陈亚红  王春台  刘新琼 《中国农学通报》2016,32(6):91-95

Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体pENTR-sgRNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候选基因的第一个外显子区域找到了2个带有PAM序列的靶位点,将2个目的小片段依次克隆到pENTR-sgRNA载体上。通过菌落PCR检测及测序,结果表明目的小片段插入位置正确。将入门载体与表达载体进行重组反应后,阳性克隆经菌落PCR和质粒DNA酶切鉴定并测序,结果表明重组载体构建成功。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除载体操作简单,耗时短,为进一步开展Pi39候选基因的功能研究奠定了基础。  相似文献   

水稻广谱抗性负调控基因OsSSI2的克隆及原核表达     

陈亚红  刘早利  王春台  刘新琼 《广东农业科学》2016,43(4):33-37

水稻Os SSI2基因负调控水稻的抗病反应,为了研究该基因的抗性机理,构建p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞后利用IPTG诱导外源蛋白表达并优化表达条件,使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。结果表明:成功构建了p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体后进行原核表达,在IPTG浓度为0.3 mmol/L,温度为25℃,诱导表达7 h,通过SDS-PAGE和Western Blot检测发现Os SSI2蛋白的可溶性表达量最多,为进一步研究水稻Os SSI2蛋白的抗性机理奠定了基础。  相似文献