水稻VDAC3蛋白的可溶性外源表达及纯化     

刘洋  王春台  刘学群  程钢 《安徽农业科学》2014,(13):3815-3818

[目的]获得外源表达的可溶性水稻VDAC3蛋白.[方法]将osvdac3基因克隆到含有GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中,转化入BL21表达菌株,经IPTG诱导,并使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物,通过Glutathione Resin亲和层析系统纯化获得较纯的目的蛋白.[结果]试验成功构建了pGEX-4T-1-osvdac3原核表达载体并转化大肠杆菌.通过SDS-PAGE和Western Blot试验证实56 kD处的蛋白条带是具有可溶性表达的VDAC3蛋白.[结论]经Glutathione Resin亲和层析系统纯化得到可溶性带GST标签的VDAC3蛋白.该研究结果为水稻VDAC蛋白的功能研究进一步奠定了基础.  相似文献   

籼稻YTB成熟种子的预处理对愈伤组织诱导的影响     

周杰  王春台  徐鑫 《种子》2011,30(11)

通过对籼稻YTB成熟胚种子储存时间、预处理温度、消毒等预处理措施的系统试验,优化了愈伤组织诱导的种子预处理方法.精选当年产的新种子,于50℃去休眠48 h,只采用1.5％的次氯酸钠溶液消毒3次,每次15 min的消毒方法,即可达到提高愈伤组织诱导率的目的.简化后的消毒步骤,避免了酒精对种子内部结构的损伤,减少了氯化汞对环境的污染.  相似文献   

β—环糊精及其衍生物对小麦种子萌发和幼苗生长的影响     

王春台  刘学群 《华中农业大学学报》1998,17(4):321-323

β－环糊精（β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ,β－ＣＤ）是由７个葡萄糖以α－１,４－糖苷键连接而成的低聚糖类化合物,它对大麦等种子的萌发具有抑制作用,但能增加萌发过程中的干物质重量,最终增加作物的产量［１］。以β－ＣＤ为母体进行化学修饰,合成的β－ＣＤ衍...  相似文献   

水稻线粒体基因orf290功能的初步研究     

杨梦醒  姜慧  田泽  刘学群  谭艳平  王春台 《华中农业大学学报》2018,37(6):1-6

从红莲型不育系粤泰A(YTA)线粒体基因组中克隆并鉴定了一个6.7kb的CMS相关片段HLsp1,序列预测发现了2个orf,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。构建带有线粒体信号肽的超表达载体35S::Rf1b5'::orf290,通过农杆菌介导转化受体保持系粤泰B(YTB),以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为内参基因,以潮霉素抗性基因(hpt)作为目的检测基因,基于实时荧光定量PCR鉴定转基因T0代植株中外源基因的拷贝数,并对阳性植株进行花粉镜检和结实率统计。结果显示获得了2株单拷贝转35S::Rf1b5′::orf290植株,并且都有orf290的表达。单拷贝超表达orf290植株的平均花粉可育度30.8%,平均套袋结实率41.6%。这些结果初步证实,线粒体基因orf290可能与水稻细胞质雄性不育相关。  相似文献   

水稻OsVDAC5真核表达载体的构建及在酵母中的表达研究     

熊杰  程钢  刘学群  覃永华  王春台 《安徽农业科学》2012,40(28):13707-13708

[目的]构建水稻OsVDAC5的真核表达载体,对其进行真核表达研究。[方法]将Osvdac5基因与酵母表达载体pPIC3.5K连接,通过电转化的方法插入到毕氏酵母GS115中,筛选阳性重组菌株,通过0.5%的甲醇诱导使外源的水稻Osvdac5基因表达,并利用West-ern Blot鉴定表达蛋白的特异性。[结果]成功构建了Osvdac5::pPIC3.5K酵母表达载体,将其整合到酵母GS115基因组后,对其进行诱导表达,产物经Western Blot检测,证实了表达蛋白为OsVDAC5。[结论]该研究结果为进一步研究OsVDAC5蛋白的功能奠定了基础。  相似文献   

水稻线粒体基因atp6超表达载体的构建及遗传转化     

熊磊  谭艳平  王春台  刘学群 《安徽农业科学》2012,40(25):12376-12378

[目的]克隆水稻线粒体基因atp6,构建转基因表达载体,获得35S∷Rf1b5'∷atp6转基因水稻植株。[方法]设计目的基因的特异引物,采用TRIzol法提取水稻叶片总RNA,借助Toyobo反转录试剂盒反转录为cDNA,通过PCR扩增得到atp6全序列;将atp6连接到含线粒体信号肽(Rf1b5')的pCAMBIA1302双元表达载体上,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻的遗传转化。[结果]利用目的基因atp6成功构建了35S∷Rf1b5'∷atp6植物表达载体,并获得了转atp6基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中超表达atp6对水稻生长的影响奠定基础。  相似文献   

武陵山区稻瘟病菌生理小种分子鉴定体系的建立     

刘松青  郑洁  王春台  徐鑫 《安徽农业科学》2019,47(9)

[目的]建立武陵山区稻瘟病菌生理小种分子鉴定体系。[方法]选用RAPD、REMAP、Rep-PCR 3种分子标记和无毒基因检测,对武陵山区稻瘟病菌生理小种文库中2013—2015年分离的220个菌株进行指纹图谱的构建和聚类分析。[结果]共统计26对引物扩增得到的3年样本中稳定出现的97条具有多态性的条带。聚类分析结果显示,在0.75的相似性水平上可将220个菌株分为12个遗传谱系,谱系10为优势谱系,不同年份的稻瘟病菌群体遗传结构存在一定差异,但并未发生明显演化。[结论]建立了新的武陵山区稻瘟病菌生理小种分子鉴定体系,为该地区抗稻瘟病菌品种的选育和布局提供参考。  相似文献   

鄂西南地区稻瘟病菌最适生长培养基筛选     

郑洁  安乐  邓森文  黎艳艳  王春台  徐鑫 《安徽农业科学》2019,47(1):127-129

[目的]筛选鄂西南地区稻瘟病菌的最适生长培养基。[方法]从鄂西南地区稻瘟病菌生理小种文库中选择优势菌株,在米糠培养基、燕麦培养基、马铃薯培养基,以及以上3种材料按比例混配的4种组合培养基上进行培养,观察其生长状态。[结果]同种菌株在不同培养基上生长速率不同,不同菌株在同一种培养基上生长速率不同,在含有米糠、燕麦、马铃薯3种成分的M7培养基上稻瘟菌生长量最大。[结论]M7培养基为鄂西南地区稻瘟菌的最适生长培养基。  相似文献   

糖基转移酶基因sm-Ngt1对水稻株高的影响     

王巍葳  谭艳平  王春台  刘学群 《安徽农业科学》2011,39(29):17785-17787

[目的]研究烟草中受甲基茉莉酸和水杨酸双重诱导的糖基转移酶基因sm-Ngt1过表达对水稻生长的影响。[方法]构建sm-Ngt1的植物表达载体,采用农杆菌浸染法转化籼稻粤泰B,对获得的阳性转基因植株进行高度检测。[结果]共获得117株阳性转sm-Ngt1植株。在成功转入sm-Ngt1基因后,水稻植株出现了不同程度的矮化,其中37%的转基因植株高度为（71.4±9.8）cm,27%的转基因植株高度为（65.1±4.6）cm,而未转基因的对照YTB平均高度为（130.0±4.3）cm。[结论]该研究为研究sm-Ngt1的功能奠定了基础。  相似文献   

稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建     

张骥诚  张向明  王春台  刘学群  徐鑫  刘新琼 《湖北农业科学》2011,50(10):2133-2135

为了验证稻瘟病新抗性基因Pita2的功能,利用长片段PCR技术从基因的供体品种PiNo.4中扩增了2个候选基因Pita2-1,Pita2-2,长度分别为6.1 kb和16.5 kb,电泳回收目的片段,然后利用双酶切分别克隆到植物表达载体pCAMBIA1300。对阳性克隆通过菌落PCR、酶切鉴定和测序分析,已成功地获得了2个候选基因的重组阳性克隆,为进一步研究Pita2基因的功能奠定了基础。  相似文献