弹性蛋白酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达     

谷新晰  许文涛  黄昆仑  罗云波  林希谨  陈卓君  田洪涛 《农业生物技术学报》2009,17(6):1114-1118

本研究以一株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的弹性蛋白基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%。将弹性蛋白酶基因连入到表达载体pPIC3.5K中,经过酶切和测序鉴定证实弹性蛋白酶基因已插入到载体启动子下游,成功构建了质粒pPIC3.5K/PAE。将pPIC3.5K/PAE线性化,通过电转化将目的基因转入毕赤酵母KM71中,利用MD培养基筛选到近400个转化子,再经G418抗性的筛选,获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子并用PCR和弹性蛋白平板验证。经过甲醇诱导表达得到高表达的重组酵母菌株,酶活为1060U/mL是出发菌株的26倍。本研究成功克隆到铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,为实现活性弹性蛋白酶的高效表达奠定了基础。  相似文献   

弹性蛋白酶基因(PAE)的克隆及在毕赤酵母中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

谷新晰  许文涛  黄昆仑  罗云波  林希谨  陈卓君  田洪涛 《农业生物技术学报》2009,17(6)

以1株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的铜绿假单胞菌弹性蛋白酶(P.acruginosa elastase,PAE)基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%.成功地构建了重组表达载体pPIC3.5K/PAE,莺组质粒Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株KM71中,通过PCR和表型鉴定表明,PAE基因已经整合到毕赤酵母染色体上.经大量筛选获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子.在甲醇诱导下,经过毕赤酵母高密度发酵进行PAE的表达,经SDS-PAGE分析.结果表明,在培养基上清中含有一明显特异性蛋白条带,大小为34kD.活性检测结果,酶活为1 060 U/mL,是出发菌株的26倍.  相似文献   

壳聚糖涂膜藕带的护色工艺研究     

李珊  朱毅  傅达奇  朱本忠  左进华  罗云波 《北方园艺》2013,(5)

以藕带为试材,研究了维生素C、植酸、亚硫酸氢钠和亚硫酸钠4种护色剂对藕带的护色效果及藕带品质的影响;比较分析了烫漂灭酶、浸泡和真空渗透工艺对壳聚糖涂膜藕带的护色效果.结果表明:藕带的最佳护色工艺为真空渗透护色保鲜液,保鲜液的成分为:0.2％维生素C+0.6％植酸+0.2％柠檬酸+1％氯化钙,该工艺既能达到优良的护色效果,同时可以保持藕带的脆度和硬度;保鲜液处理后,涂膜2％壳聚糖溶液,保鲜膜包裹,利于藕带的持久护色.  相似文献   

不同气体组分中臭氧浓度衰减速率初探          下载免费PDF全文

王文生  罗云波  石志平 《保鲜与加工》2005,5(1):21-22

在(20±0.5)℃条件下,将设定的6种不同气体组分中通入一定量的臭氧,用磺-碘化钾吸收、硫代硫酸钠滴定法测定臭氧浓度的变化,并确定衰减速率.结果表明,在N2和4.4%CO2 95.6%N2中,臭氧浓度的衰减速率显著低于供试的其他4种气体组分(3.5%O2 99.5%N2:60%O2 94.0%N2;3.1%O2 4.4%CO2 92.5%N2;大气中的空气)中的衰减速率.  相似文献   

PG和LOX对采后番茄果实软化及细胞超微结构的影响   总被引：17，自引：2，他引：15  

生吉萍  罗云波  申琳 《园艺学报》2000,27(4):276-280

以番茄 (Lycopersiconesculentum)品种‘丽春’为试验材料研究了果实采后多聚半乳糖醛酸酶 (PG)和脂氧合酶 (LOX)的活性变化与果实硬度的关系 ,并观察了细胞超微结构的变化。结果表明 ,随着果实采后呼吸强度和乙烯释放量不断增加 ,PG和LOX活性迅速增加 ,而果实硬度逐渐下降。呼吸强度和LOX活性高峰出现在发白期 (BR) ,而乙烯释放量高峰延迟至转色期 (TU)。PG活性随着果实的成熟逐渐增加 ,而LOX活性在发白期之后保持较高水平。分别用外源LOX和LOX加底物处理番茄组织切片 ,发现组织细胞的衰老进程加速 ,进而导致细胞膜瓦解、胞壁纤维松弛以及细胞器空胞化。PG和LOX都与果实的后熟软化有关 ,LOX与衰老的启动有关  相似文献   

PG和LOX对采后番匣果实软化及细胞超微结构的影响   总被引：4，自引：1，他引：3  

生吉萍  罗云波 《园艺学报》2000,27(4):276-281

以番匣（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）品种‘丽春’为试验材料研究了果实采后多聚半乳糖醛酸酶（ＰＧ）和脂氧合酶（ＬＯＸ）的活性变化与果实硬度的关系,并观察了细胞超微结构的变化。结果表明,随着果实采后呼吸强度和乙烯释放量不断增加,ＰＧ和ＬＯＸ活性迅速增加,而果实硬度逐渐下降。呼吸强度和ＬＯＸ活性高峰出现在发白期（ＢＲ）,而乙烯释放量高峰延迟至转色期（ＴＵ）。ＰＧ活性随着果实的成熟逐渐增加,而ＬＯＸ活性在发白期之后保持较高水平。分别用外源ＬＯＸ和ＬＯＸ加底物处理番匣组织切片,发现组织细胞的衰老进程加速,进而导致细胞膜瓦解、胞壁纤维松弛以及细胞器空胞化。ＰＧ和ＬＯＸ都与果实的后熟软化有关,ＬＯＸ与衰老的启动有关。  相似文献   

果蔬成熟和衰老中的重要酶-脂氧合酶   总被引：2，自引：0，他引：2  

生吉萍  申琳  罗云波 《果树学报》1999,16(1):2

脂氧合酶是广泛存在于植物体中的一种酶,已有研究表明,它可能参与植物生长、发育、成熟、衰老和防御过程的调控。近年来,随着对果蔬采后生理研究的深入,越来越发现脂氧合酶与果蔬采后的变化有关,它调节某些物质的合成,参与乙烯的代谢途径,并与果蔬的抗性、风味、颜色、硬度等都有密切的关系。综述了脂氧合酶在采后的研究进展,提出了该酶可能是控制采后生理变化的关键酶,并提出寻找脂氧合酶特异性抑制剂,用反义基因技术控制该酶的生物合成,培育耐贮新品种的设想  相似文献   

脂氧合酶参与果蔬成熟衰老研究进展     

生吉萍  罗云波 《中国果菜》1999,(6):7-8

1．脂氧合酶的一般特性脂氧合酶（LOX）是一种非血红素铁蛋白,分子量为90－100KD。这种酶蛋白由多个多肽链组成,其金属辅基的活性态为氧化型三价铁离子（Fe（3 ））,非活性态为二价铁离子（Fe（2 ））。LOX在生物体内的主要作用是,专一催化含有顺,顺－1,4一戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应,生成具有共轭双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物。LOX在生物体内的主要底物是甘油脂类（如磷脂）释放的游离不饱和脂肪酸,其中动物体内的主要底物为花生四烯酸（Arachidonicacid20：4,ω6）,植物体内的主要底物是亚油酸（Lino…  相似文献   

玉米In5-2启动子功能区域在洋葱瞬时表达系统中的分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

马亮  梅晓宏  许文涛  罗云波  周忻  唐小革  黄昆仑 《农业生物技术学报》2010,18(6)

本研究旨在通过对根癌农杆菌侵染洋葱表皮细胞的条件进行优化,从而建立一种新的瞬时表达系统,并将其应用于玉米In5-2启动子的功能区域的分析中,明确In5-2启动子的乙酰苯胺类化合物诱导元件的具体位置.在本研究中采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)侵染洋葱(Allium cepa)表皮细胞,对转β-葡糖醛酸酶(GUS)基因的瞬时表达进行研究,并分析了侵染液中乙酰丁香酮(As)的浓度、侵染时间、菌液浓度、共培养时间对GUS基因的瞬间表达的影响.结果显示,在OD600值为0.8的农杆菌液中感染15 min,共培养3 d,能够得到较高的GUS基因瞬间表达,从而建立了一种新的瞬间表达系统.同时,构建了含不同长度的玉米(Zea mays)In5-2启动子片段缺失载体,利用新的瞬时表达系统分析其功能区域,推测出乙酰苯胺类化合物诱导元件位于ATG上游-220～-143 bp之间.结果表明新的瞬时表达系统可以快速有效地进行启动子的分析.  相似文献   

转基因食品安全课程的科普型教学改革与实践     

许文涛  程楠  朱龙佼  罗云波  黄昆仑 《现代农业科技》2014,(18)

转基因食品为解决未来全球粮食安全问题带来希望,但是略显高深的科学知识和公众的莫名恐慌使其科普教育变得十分困难和紧迫。本文就高等教育中开设的转基因食品安全课程与科普型教学相结合的科学性、必要性和紧迫性进行了初步探讨,同时提出了相应改革与实践的具体措施,此外又列举了3个典型案例作为本课程科普型教学改革与实践的参考,旨在让学生掌握科学方法、传播科学思想,使科学服务于社会,培养出适合未来发展的高素质人才。  相似文献