应用PCR快速鉴别番鸭和鹅细小病毒   总被引：12，自引：0，他引：12  

胡奇林  陈少莺  林天龙  程由铨  李怡英 《中国预防兽医学报》2001,23(6):447-450

根据已发表的番鸭和鹅细小病毒基因组全序列，设计并合成了1对通用引物（PC1／PC2）和1对MPV特异引物（PS1／PS2），以MPV－DNA，MPV尿囊液，MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液，GPV－DNA，GPV尿囊液和GPV细胞培养物，DHV尿囊液和H2O为模板在同一条件下分别以2对引物进行扩增，PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示，在PC1／PC2系统中，除DHV尿囊液和H2O外，所有样品均出现长约480bp的特异核酸带，对MPV－DNA的敏感性为0．2pg，对GPV－DNA的敏感性为2pg；对MPV尿囊液的敏感性为100ELD50／2ul,PS1/PS2系统中，只有MPV－DNA，MPV尿囊液及MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液出现预期约1100bp特异扩增产物，对MPV－DNA的敏感性为0．2ng，对MPV尿囊液的敏感性为1000ELD50／2ul，而GPV－DNA，GPV尿囊液，GPV细胞培养物，DHV尿囊液和和空白对照均未见到条带，分别以1ngMPV0DNA,1ngMPV--DNA,1ngGPV-DNA,MPV尿囊液，GPV尿囊液，DHV尿囊液和空白对照样品进行扩增，3次重复实验结果完全一致，表明该PCR检测技术可准确，快速鉴别番鸭和鹅细小病毒，为临床上准确，快速鉴别诊断番鸭和鹅细小病毒病奠定了基础。  相似文献   

番鸭呼肠孤病毒活疫苗细胞免疫应答初步研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

林锋强  胡奇林  陈少莺  欧阳岁东  陈仕龙  程晓霞  朱小丽 《中国兽医杂志》2006,42(10):13-14

番鸭呼肠孤病毒病是由呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒引起的一种急性传染病。1997年以来，在福建省莆田、福清、福州、长乐和浙江金华、广东佛山等地流行。临床上以软脚为主要症状，以肝和脾表面有大量灰白色坏死点、肾脏肿大、出血、表面有黄白色条斑为主要病理变化的传染病。该病发生于番鸭、鹅和半番鸭，发病日龄为7～45日龄，发病率为30％～90％，病死率为60％～80％。临床上应用抗生素、磺胺类药物无治疗及预防作用，致使疫病迅速蔓延至全国番鸭饲养区，给番鸭业造成很大经济损失。  相似文献   

1 型鸭疫里默氏杆菌铁依赖抑制子RaDtxR 全长 基因的扩增及生物信息学分析     

向蓉  岳磊  李林林  孙敏华  董嘉文  胡奇林  袁建丰 《广东农业科学》2013,40(23):133-137

为了扩增1型鸭疫里默氏杆菌铁依赖抑制子基因（RaDtxR）全长序列,对SiteFing-PCR技术做了改良。改良后的SiteFinding-PCR 技术更加简单、方便且省时。SiteFinding-PCR结果显示,获得的目的片段大小为937 bp,向前延伸了710 bp。RaDtxR 全长基因序列为654个核苷酸,编码217个氨基酸。生物信息学表明,RaDtxR包含完整的铁离子依赖抑制子超家族保守结构域,在进化分类上更接近于白喉棒状杆菌毒素抑制子DtxR。同源建模表明,RaDtxR氨基酸序列含有典型的FUR/DtxR抑制子的HTH 结构。  相似文献   

鉴别伪狂犬病病毒强、弱毒株单克隆抗体的制备     

程晓霞  陈少莺  胡奇林  俞伏松  朱小丽  陈仕龙  林锋强  欧阳岁东  车勇良  林天龙  程由铨 《福建农业学报》2005,20(2):87-90

用纯化的猪伪狂犬病病毒闽A株(PRV—FA)免疫Balb／c鼠，取脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，经间接ELISA筛选，获得11株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中6株仅与强毒FA反应，而不与弱毒FB、Bartha及gE缺失疫苗株发生反应。特异性鉴定结果表明，各株单抗均不与猪瘟病毒、猪流感病毒、猪呼吸繁殖障碍综合症病毒、猪细小病毒等发生交叉反应。  相似文献   

以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA方法的建立     

张云  耿宏伟  郭东春  胡奇林  刘明 《水禽世界》2008,(1):34-39

将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,得到重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,经SDS-PAGE和westem-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应;以0.15m mol/LIPTG诱导,5h后融合蛋白δC表达量可达高峰,分子量为50ku;融合蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测鸭血清中的呼肠孤病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法,最佳包被浓度为51μg/ml;标准阳性血清的最适稀释倍数为1：40;用该方法对50份鸭血清样品进行检测,并与琼扩抗体检测法相比较,证明该ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,该研究为今后鸭呼肠孤病毒的诊断试剂盒的研制奠定了基础。  相似文献   

鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立     

孙敏华  董嘉文  李林林  袁建丰  邝瑞欢  胡奇林  张建峰 《中国动物传染病学报》2014,(6):1-5

本研究克隆了鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)佛山株(Foshan-2009)的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体p ET32a(+),构建重组质粒p ET32a-NS1。经转化,IPTG诱导表达及SDS-PAGE和Western blot分析表明,NS1蛋白得到了表达,并且能与抗GPV的番鸭血清发生特异性反应。通过棋盘法确定NS1蛋白包被量为0.5μg/孔,待检血清1:50稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:10 000倍稀释时ELISA反应条件最佳,并确定阴阳性临界值为0.399。该ELISA方法特异性强,与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应;重复性好,批内和批间重复试验的变异系数分别小于5%和10%;检出率高,GPV阳性番鸭血清的检出率为92%。本研究所建立的间接ELISA方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础。  相似文献   

番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用     

李林林  董嘉文  孙敏华  袁建丰  邝瑞欢  胡奇林 《中国动物传染病学报》2013,(6):8-11

通过比对分析GenBank上登录的多株番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus,MDPV）和鹅细小病毒（Goose parvovirus）全基因序列,选取两种病毒间相似性较低的区域设计合成了2对特异性引物,建立了能快速鉴别诊断MDPV的套式PCR方法。该法仅能特异地扩增MDPV,敏感性达到62copies／uL,比普通PCR高1000倍。运用该方法对分离的12份临床样品进行检测,结果检测出2份MDPV。本试验所建立的套式PCR方法可用于MDPV感染的临床诊断和流行病学调查。  相似文献   

用PCR法检测猪繁殖-呼吸综合征病毒和猪圆环病毒混合感染病例研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

欧阳岁东  胡奇林  陈仕龙  林锋强  程小霞  朱小丽 《福建畜牧兽医》2005,27(4):5-6

根据已发表的猪繁殖-呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的核苷酸序列设计特异性引物，应用PCR方法对从福清市某养猪场病猪采集的淋巴结、肺、脾等器官组织病料进行检测，发现该猪场病猪病料的检测结果PRRSV和PCV-2同时为阳性，从而证实了PRRSV和PCV-2在该病猪体内混合感染。  相似文献   

牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用     

刘维巍  林裕胜  张龙  江锦秀  张靖鹏  刘庆华  胡奇林 《福建农业学报》2023,(4):431-435

【目的】建立牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)便捷检测方法，为福建省BRV的流行病学调查检测提供便捷技术支持。【方法】根据GenBank公布的BRV基因组序列，利用Oligo7.0软件设计并合成1对特异性引物，通过优化反应条件，建立了检测BRV的RT-PCR方法，同时开展了特异性、敏感性和重复性试验，并将建立的方法应用于22份临床样品的检测。【结果】建立的方法仅能够扩增出BRV的特异性片段，对其他畜禽常见病原体无特异性扩增；该方法的灵敏度为6.86×10⁵ copies·μL^-1。对22份临床样品进行检测，检测出12份阳性样品，阳性率为54.55%。【结论】本研究建立的BRV RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床样本的检测，为福建省BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。  相似文献   

山羊地方性鼻内肿瘤病毒MAb的制备及间接ELISA方法的建立     

江锦秀  林裕胜  张靖鹏  游伟  张龙  毛坤明  胡奇林 《中国预防兽医学报》2023,(1):45-50

为建立检测山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)的间接ELISA方法，本研究以纯化的ENTV-2免疫BALB/c小鼠，采用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次克隆纯化后获得1株能够稳定分泌ENTV-2特异性单克隆抗体(MAb)的细胞株，命名为6E4，并采用鼠MAb亚类鉴定试剂盒鉴定6E4 MAb的亚类，结果显示，MAb 6E4的亚类为κ链、Ig G1亚型。进一步以6E4为检测抗体，经各反应条件的优化建立了检测鼻液样品中ENTV-2的间接ELISA方法，该方法的临界值为0.323。利用该方法 检测羊口疮病毒(ORFV)、绵羊肺炎支原体(Movi)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)以及纯化的ENTV-2和ENTV-2患病羊鼻液样品，结果显示，除纯化的ENTV-2及ENTV-2患病羊鼻液样品的检测结果呈阳性外，ORFV、Movi、Mmc的检测结果均为阴性，该方法特异性较强。将纯化的ENTV-2 (以蛋白浓度换算) 2倍倍比稀释(20μg/mL～0.08μg/mL)后，利用建立的间接ELISA方法检测，结果显示，纯化的ENTV-2稀释至0.3125μg/mL时检测结果仍可判定为阳性，该方法敏...  相似文献