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利用Real-time PCR技术检测猪细小病毒在PK-15细胞增殖动态研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将猪细小病毒HNI株接种于PK-15细胞,用TaqMan荧光定量PCR方法研究了猪细小病毒增殖的基本特征与规律.结果表明,在PK-15细胞中,病毒在接种后2 h开始增殖,在12~60 h增殖最为迅速,在60 h病毒达到增殖最高峰.研究还发现在6 h病毒开始释放,72 h达到最高峰. 相似文献
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猪干扰素α和γ在杆状病毒中共表达及对PRRSV抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究.[方法]本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化.将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性.[结果]通过问接免疫荧光、Western-blot证明猪干扰素α和γ重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中均获得表达,表达产物主要分布在培养上清中.通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到3.24×10<'7>U·mL<'-1>.在Marc-145细胞,昆虫细胞上清经2<'-11>稀释能够抑制100个TCID<,50>的PRRSV的致细胞病变作用.[结论]应用杆状病毒表达系统实现猪干扰素α和γ在昆虫细胞上分泌共表达,重组蛋白在细胞上对PRRSV具有抑制作用. 相似文献
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细胞自噬在病毒感染和致病过程中具有重要作用。针对目前冠状病毒在全世界传播尤其是严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引发的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)危害人类健康的现状,综述了冠状病毒和细胞自噬的研究进展,分析了细胞自噬与病毒感染之间的关系,包括细胞自噬抑制及促进病毒感染的作用,重点探讨了冠状病毒诱导细胞发生自噬、细胞自噬影响冠状病毒的复制以及冠状病毒调控细胞自噬的分子作用机制3个方面,最后对靶向细胞自噬防控冠状病毒的感染与传播进行了展望,不仅有助于了解冠状病毒的致病机制,而且为抗病毒药物和疫苗的研发提供理论基础,从而为冠状病毒的防控提供新思路。 相似文献