精液中猪细小病毒DNA三种提取方法效果比较     

魏战勇  梁静怡  李厚伟  王东方  陈红英  崔保安 《浙江农业学报》2009,21(5):0

猪精液中含有高浓度的蛋白质,因此提取高纯度DNA较为困难;试验分别用水煮法、异硫氰酸胍法和Trizol法三种方法对连续稀释梯度猪精液提取猪细小病毒DNA,应用Taqman荧光定量PCR技术评价提取效果并加以对比。结果发现Trizol法可以提取出高纯度的DNA,但因Trizol试剂价格昂贵,不适用临床检测;比较另外两种方法,水煮法较异硫氰酸胍抽提法更为有效,是一种迅速、简便、经济、高效的DNA提取方法,适合于临床大量样品的检测。  相似文献   

猪细小病毒HN-3株VP2基因克隆与抗原性分析     

梁秀丽  方丽云  王东方  貊鹏涛  付云飞  魏战勇 《河南农业科学》2007,(11):100-103

参考GenBank公布的NADL-2株序列,设计出1对引物。利用该引物扩增了猪细小病毒HN-3株VP2主要抗原基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体上;测序获得1 438 bp核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。共编码475氨基酸,与NADL-2株相应的序列进行比较分析,两者核苷酸同源性为99.4%,氨基酸同源性为99.3%。应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测,共有11个抗原表位,分别在氨基酸N端的11~24,81~108,121~135,139~148,150~172,221~239,241~259,316~342,344~352,390~405和426~439区段,此序列具有较好的免疫原性。  相似文献   

一起猪乙脑的RT-PCR诊断与防制     

吕晓丽  崔保安  陈红英  魏战勇  赵丽  王东方  高文明  管倩 《畜牧与兽医》2007,39(9):59-60

2006年9月,新郑市某猪场发生了一种以初产猪流产、死产为特征的疾病。提取流产胎儿的脑RNA,采用猪乙脑病毒E基因的一对特异引物,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,检测猪乙脑病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪乙脑病毒病。对该猪场采取综合防制措施,取得了较好的效果。  相似文献   

反义基因治疗技术研究进展     

王宝琴  魏战勇 《中国预防兽医学报》2003,25(1):74-76

反义脱氧寡核苷酸 (Ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｃｏｔｉｄｅ ,Ａ ＳＯＤＮ)是一段与ｍＲＮＡ或ＤＮＡ特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的ＤＮＡ分子。ＡＳＯＤＮ能通过封闭或抑制肿瘤细胞和病毒的关键编码基因来特异性抑制肿瘤细胞增殖和病毒的复制 ,是治疗肿瘤和病毒性传染病的潜在新型药物[1] 。自从 1 990年美国科学家首次完成了 1例联合免疫缺陷综合症的基因治疗并取得了较好疗效以来 ,人们开始设想通过反义基因治疗来控制肿瘤、病毒性疾病和炎症[2 ,3 ] 。反义基因具有使用方便和容易大量生产等优点 ,与传…  相似文献   

猪圆环病毒2型和猪细小病毒混合感染的PCR检测     

吴宇阳  陈龙彪  王林青  崔保安  卢权威  钞安军  李坤  陈红英  魏战勇 《安徽农学通报》2013,19(4):129+147

2012年9月河南省新乡市某养猪场发生一例以初产母猪流产、死产,断奶仔猪精神沉郁、呼吸困难、食欲不振、轻微腹泻、渐进性消瘦为特征的疾病。采用PCR技术进行检测,结果表明猪圆环病毒2型和猪细小病毒均为阳性,结合发病情况、临床症状及剖检变化,初步确定为PCV2和PPV混合感染。  相似文献   

提高农科院校生物工程专业本科毕业论文质量的探索     

刘芳  魏战勇  吴华  董海聚 《中国农学通报》2012,14(28)

毕业设计(论文)质量的高低反映了学生对基础理论知识的理解程度和运用本专业知识解决实际问题的能力大小,同时也是检验学校人才培养质量高低的一个重要标志,是对高校毕业学生科研思路和创新理念的全面检验,本文列举了农科院校生物工程专业本科生毕业设计(论文)存在的问题,对其中的突出现象进行了分析,并结合学校教学改革实际提出了实现“毕业论文实践和设计的三结合”和实施本科毕业论文分批答辩等提高生物技术专业本科毕业论文质量的建议.  相似文献   

4种中药多糖体外抗猪伪狂犬病毒的作用研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张红英  胡梅  夏平安  王学兵  魏战勇  崔保安 《江苏农业学报》2010,26(3)

采用先加多糖与细胞作用后再加病毒(研究多糖对病毒的阻断作用)、先病毒吸附细胞后再加多糖(研究多糖对病毒的抑制作用)和病毒与多糖作用之后再加细胞(研究多糖对病毒的直接杀灭作用)3种不同用药方式,用细胞培养和中性红染色法,测定了板蓝根多糖(IRPS)、黄芪多糖(APS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)抗猪伪狂犬病毒(PRV)感染的作用效果。结果表明,4种中药多糖对PRV感染均具有显著的阻断作用,其中APS、IRPS还具有抑制和直接杀灭PRV作用。  相似文献   

PPV感染Marc-145细胞后对其分泌IL-13转录时相的影响     

刘石  哈斯通拉嘎  王瑞宁  郭东辉  胡清林  魏战勇 《浙江农业科学》2011,(3):710-713

运用荧光定量PCR技术,测定和分析猪细小病毒(PPV)感染Marc-145细胞后引起的病毒DNA含量的变化和IL-13的分泌水平.结果IL-13的表达量在1,3和24 h明显增加,48 h轻微下调.  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与ChIL-2重组禽痘病毒的构建及其免疫效力试验     

杨明凡  张素梅  陈红英  魏战勇  崔保安 《中国兽医学报》2012,32(12)

将鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gD基因和鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因通过同源重组法重组禽痘病毒转移载体,构建含ILTVgD基因和ChIL-2基因的重组禽痘病毒转移载体rFPVIL2ILTV—gD,蓝色蚀斑纯化法纯化重组病毒,用IFA检测重组病毒中ILTVgD基因的表达和用ELISA试剂盒检测ChIL-2的表达。重组病毒rFPV—IL2-ILTV-gD免疫试验鸡,间接ELISA测定血清中ILTV抗体效价,动物试验用构建的ILTV强毒以滴鼻方式攻击各组试验鸡,结果表明,外源基因在重组禽疽病毒中得到了稳定表达;ELISA检测结果表明在免疫7d后能够检测到血清抗体,免疫21d后血清抗体达到高峰,此后便开始逐渐下降,符合疫苗免疫的消长规律;攻毒后每组鸡的发病情况可以看出重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD组和疫苗对照组对ILTV强毒攻击的保护率分别为96％和92％,而空白对照组为8％。说明构建的重组病毒rFPV-IL2-ILTV—gD免疫效力稍优于弱毒疫苗,能够较好的保护免疫鸡群。  相似文献   

一例猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防治   总被引：1，自引：0，他引：1  

王学兵  崔保安  魏战勇  张红英  申晓庆 《中国农学通报》2009,25(20)

2008年3月,新乡市某猪场发生了以一种经产母猪和初产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为特征的疾病.为确定病原,采集流产胎儿和死胎的肺、肝、脾脏等病料,制悬液,取上清,进行细胞培养,观察细胞病变,另根据猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株VR-2332 ORF7基因序列设计一对特异引物,提取流产胎儿的肺、肝等组织中PRRSV的RNA,经RT-PCR扩增,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪繁殖与呼吸综合征.通过对该猪场采取紧急接种疫苗、彻底消毒等综合防治措施,控制了该病的流行与蔓延.  相似文献