禽呼肠孤病毒σ3基因在烟草中的表达与鉴定     

王盛  谢芝勋  黄莉  谢丽基  邓显文  谢志勤  刘加波  罗思思  曾婷婷 《中国农业科学》2015,48(9):1836-1844

【目的】研究禽呼肠孤病毒S1基因编码的σ3基因在烟草中的表达及其表达产物的反应原性。【方法】根据Gen Bank中公布的禽呼肠孤毒株S1133的基因序列,设计特异引物扩增σ3基因,构建重组植物表达载体p BI121-σ3,热激法转化农杆菌EHA105感受态细胞,筛选含有重组质粒的p BI121-σ3的阳性工程菌株EHA105。采用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草,卡那霉素筛选获得抗性植株。随后通过σ3基因的特异引物,PCR方法初步筛选获得转σ3基因的烟草植株。进一步对阳性植株通过实时荧光定量PCR方法检测σ3基因在转基因烟草中的拷贝数,以烟草自身单拷贝的内源基因核糖核酸还原酶-RNR2作为内参基因,通过梯度稀释分别构建RNR2及σ3基因的起始模板量和对应CT值的标准曲线,通过检测样品中σ3基因和RNR2基因模板量对数值的比值估算出σ3基因在转基因烟草中的拷贝数。并通过Western-blotting方法对转基因烟草中表达的σ3融合蛋白的反应原性进行分析。【结果】1通过双酶切和测序验证表明σ3基因插入位置、大小和读码框均正确,表明σ3基因已经成功的构建于植物表达载体p BI121的花椰菜花叶病毒(Ca MV)35S启动子的下游,以NOS为终止子,含有卡那霉素抗性标记(NPT II)。其表达的蛋白与下游的绿色荧光蛋白形成融合蛋白,其大小约为61.6 ku;2在转化筛选抗性植株的过程中采用350 mg·L-1的头孢霉素可以很好地抑制农杆菌的污染,100 mg·L-1的硫酸卡那霉素筛选压力能够很好地抑制非转化细胞的生长;3随机选取10株转化烟草进行PCR检测发现8株转化烟草可以扩增到清晰的目的条带约994 bp;4内参基因RNR2的标准曲线为y=-3.5352x+15.143,σ3基因的标准曲线为y=-3.5366x+1.8265,两个标准曲线的相关系数均接近于1。在检测的5株转化烟草中σ3基因的拷贝数均为4,阴性对照没有扩增。5Western-blotting显示σ3融合蛋白在转化烟草中可以正确表达,目的条带大小约为61.6 k D,与预计大小一致;σ3融合蛋白能够与禽呼肠孤病毒的阳性血清发生特异反应,表明该融合蛋白具有良好的反应原性。【结论】成功地构建了植物表达载体p BI121-σ3,筛选获得低拷贝的转σ3基因的烟草,σ3融合蛋白能够在烟草中表达且具有相应的反应原性,为进一步研究σ3基因的功能和利用植物作为生物反应器生产σ3蛋白口服疫苗的研发奠定了基础。  相似文献   

马类动物气喘病血液学值的变化     

王秋婵  黄莉 《畜牧与兽医》1991,23(6):243-245

<正> 甘肃省马类动物气喘病是一种以呼吸困难、气喘和咳嗽为主要症状的呼吸系统疾病,主要分布于河西走廊一带。甘肃农业大学近年来的研究确定,本病是由有机尘和无机尘共同作用所致的一种混合性尘肺。有机尘主要包括普通嗜热放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)和干草小多孢菌(Micropolyspora faeni),无机尘主要是来自外界的土尘(铝硅酸盐类矿物)。血液学检验在许多疾病的诊断上都具有重要意义,马气喘病也不例外。在本病的研究中,我们对126例自然病例和临诊病例进行了全面系统的检查和血液学检验,现报告如下。  相似文献   

三线建设与西部大开发     

黄莉 《山地农业生物学报》2002,21(5):357-362,380

三线建设是指发生在20世纪60年代中国西部地区的一场大规模的战略后方建设运动；而西部大开发，则是指发生在20世纪末并将延续下去的，对中国西部地区新一轮大规模的开发。对比研究两次西部开发，具有深远的历史意义和现实意义。“冷战”与“和平与发展”的国际背景以及国内经济状况。使中国两代领导人制定了两个不同的中国发展战略。由“吃、穿、用”计划到战备计划，三线建设是国际局势突变，周边形势紧张和国内经济处于困境的情况下作出的决策；西部大开发则是在和平与发展成为世界主题，国内经济状况良好的情况下提出的，是邓小平两个大局思想的具体体现。三线建设实现了西部经济的第一次快速发展；新一轮的西部开发，是在社会主义市场经济条件下进行的，从政府主导到市场主导。三线建设为新一轮西部开发提供了历史的和现实的借鉴。  相似文献   

不同花生品种白藜芦醇含量鉴定评价     

陈海文  徐思亮  郭建斌  陈伟刚  罗怀勇  刘念  黄莉  周小静  吴贝  姜成红  任小平  姜慧芳 《中国油料作物学报》2021,43(5):942

本研究选取59份花生品种,连续2年在武汉、石家庄、濮阳和周口4个地点共8个环境种植,成熟收获后检测花生籽仁白藜芦醇含量。结果表明,供试花生品种白藜芦醇含量在品种间、环境间均存在极显著差异。武汉环境下所有材料两年白藜芦醇含量均值相对较高。综合分析2年4点种植的检测结果,筛选出多个环境下白藜芦醇含量表现较高且稳定的材料2份（冀花2号和冀花13号）。结合前期对这些品种的含油量和脂肪酸检测结果的相关性分析表明,花生籽仁白藜芦醇含量与含油量和8种主要脂肪酸含量均不存在显著相关性。本结果为培育高白藜芦醇兼具高油和优良脂肪酸组成的花生品种提供了理论基础。  相似文献   

马山县甘蔗新品种比较试验     

林姣艳  黄金恩  陈麒仕  黄莉  陈艳衡  黄小艳  张艳美  韦政民 《广西糖业》2022,42(1):3-8

为筛选出适宜马山县种植的甘蔗优良品种,实现品种多样化,优化甘蔗品种结构,该研究以新台糖22号为对照,对近几年登记推广的7个甘蔗新品种进行一年新植一年宿根的比较试验,调查其主要农艺性状、经济性状和抗性等指标,并进行对比分析和综合评价.试验结果表明,桂糖49号、桂糖44号和桂糖42号这3个品种的农艺性状、经济性状、抗性等综...  相似文献   

水稻二化螟的发生与防治技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

许科友  古诚荣  黄莉  黎祖德  李斌 《植物医生》2009,22(6):8-9

隆昌县常年种植水稻2．1万hm^2左右．占粮食种植面积的76．51％．为主栽品种,水稻上的重大虫害主要是二化螟。为了有效防治二化螟的为害．减少农药残留量和环境污染,净化水域环境．保护水生动物．最大限度扩大水稻的绿色成分,笔者研究探索了二化螟的生物学特性,找准防治的最佳时期．选用高效低毒低残留的农药．推广生物防治．示范“稻鸭共育控螟”技术．取得了较好的效果。  相似文献   

利用3个F_2群体整合高密度栽培种花生遗传连锁图     

郭建斌  黄莉  成良强  陈伟刚  任小平  陈玉宁  周小静  沈金雄  姜慧芳 《作物学报》2016,42(2):159-169

遗传图谱的构建及整合是开展花生分子育种研究的基础,利用多个作图群体整合遗传图谱是解决图谱标记密度低的有效途径。本研究采用基于锚定SSR标记的作图策略,构建3个F_2群体3张遗传连锁图,利用Join Map 3.0软件整合图谱,获得一张包含20个连锁群、792个位点、总遗传距离为2079.50 c M,标记间平均距离为2.63 c M的整合图谱,各连锁群标记数在20~66个之间,遗传距离在59.10~175.80 c M之间。将3个分离群体中检测到的与荚果及种子大小相关的QTL区段与整合连锁图的标记比较发现,各群体中检测到的位于各染色体上的QTL在整合图谱中都能出现,有些QTL标记区间在整合图谱中存在更多的标记,为今后利用这些标记进行精细定位奠定了基础。  相似文献   

花生出仁率和株高的QTL定位分析     

陈伟刚  郭建斌  徐志军  喻博伦  邱西克  黄莉  宋延滨  陈玉宁  周小静  罗怀勇  刘念  任小平  姜慧芳 《作物学报》2018,44(8):1142-1151

花生出仁率、株高等性状都对产量有重要影响, 鉴定出仁率和株高相关的主效QTL, 分析QTL的加性、上位性及其与环境的互作效应以及出仁率与株高之间的遗传关系, 有助于加快花生分子育种研究进程。本研究以远杂9102×徐州68-4构建的RIL群体为材料, 在4个环境中调查出仁率和株高等表型性状, 相关性分析结果表明, 4个环境中, 出仁率与株高均存在极显著负相关。利用前期构建的高密度遗传图谱, 通过QTLNetwork 2.0软件对出仁率和株高进行QTL定位分析, 检测到13个具加性效应的出仁率QTL, 8个具加性效应的株高QTL, 其中, 2个与出仁率相关的主效QTL (qSPA05.2和qSPA09.1)和1个与株高相关的主效QTL (qPHA09.1)至少能在3个环境下被重复检测到。还检测到11对上位性QTL, 包括出仁率6对和株高5对, 与环境之间均存在互作效应。比较QTL在连锁群上的位置发现, 在A09染色体Ad91I24-AGGS2492区间同时检测到稳定的出仁率主效QTL (qSPA09.1)和株高主效QTL (qPHA09.1)。通过条件QTL排除该位点株高的效应后, 出仁率加性效应贡献率从14.37%下降到5.50%, 表明qSPA09.1和qPHA09.1为同一位点, 同时控制株高和出仁率。  相似文献   

脱水蓖麻油聚酰胺-环氧树脂体系的固化反应动力学研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

许蓉  谢晖  黄莉 《林产化学与工业》2009,29(2):59-62

由脱水蓖麻油制得聚酰胺固化剂,并用差示扫描量热法(DSC)研究了该固化剂与环氧树脂体系(DCOPA-EP)的固化反应动力学.综合采用Kissinger、Crane和Malek等方法探讨DCOPA-EP固化体系的固化动力学模型参数.由Kissinger方法算得表观活化能( E a)55.94kJ/mol,频率因子( A )1.61×107s-1;并经过分析验证,Malek法所得自催化反应模型(反应级数 m ＝0.135, n ＝0.766)比Crane法的 n 级反应模型(反应级数 n =0.90)更适合DCOPA-EP固化体系.  相似文献   

闵行区渔业用水水质及水产品质量安全检测与评价     

王艳菊  罗贞  褚静娟  冯志龙  黄莉花 《上海农业科技》2018,(5)

为进一步提高上海市闵行区水产养殖能力和水产品质量安全,对闵行区20家水产养殖场的渔业用水和水产品进行了抽样检测。结果显示,20个渔业用水样本的孔雀石绿(有色、无色)、镉、铅、砷、汞5个指标全部合格;20个水产品样本的氯霉素、孔雀石绿(有色、无色)、喹乙醇、恩诺沙星、环丙沙星、磺胺类、硝基呋喃类(呋喃唑酮代谢物、呋喃妥因代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物)、甲基汞、无机砷、铬、铅14个指标全部合格,且重金属含量都在限量值以内。  相似文献