鸭瘟活疫苗外源病毒检验方法（鸡检查法）的修订     

李启红  李俊平 《中国兽药杂志》2012,46(11):9-11

对二〇〇五年版《中华人民共和国兽药典》中鸭瘟活疫苗外源病毒检验的鸡检查法进行了修订,确定选用9-12周龄SPF鸡,在原药典规定方法的基础上增加低剂量基础免疫程序,并用该外源病毒检验方法对5批鸭瘟活疫苗进行了验证,结果表明修订后的鸭瘟活疫苗外源病毒检验方法可靠,可操作性强。  相似文献   

鸡新城疫高免血清的制备   总被引：1，自引：1，他引：0  

李翠  王在时  关孚时  李俊平  冯杉  徐璐 《中国兽药杂志》2008,42(2):30-31

采用鸡新城疫Lasota株病毒（NDV）和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但是NDV两次免疫后只能使抗体水平增长到10log2,而再以灭活疫苗免疫可使抗体水平达到14log2。  相似文献   

实验动物粪便中金黄色葡萄球菌和沙门菌检验方法的比较     

王秀丽  辛凌翔李建张一帜  张媛  李俊平 《中国兽药杂志》2020,54(1):16-20

为探讨实验动物粪便中金黄色葡萄球菌和沙门菌的检测方法,试验比较了国标的方法、ATB生化鉴定试纸条、rRNA测序分析对样品的检测结果,发现生化鉴定试纸条和16S rRNA测序分析均可以准确、高效地检测出沙门菌和金黄色葡萄球菌,而参考国标的方法,有些金黄色葡萄球菌和沙门菌的鉴定结果与国标不一致。试验表明,用ATB生化鉴定试纸条和16S rRNA序列分析检测沙门菌和金黄色葡萄球菌及其他菌的方法更可靠。  相似文献   

猪圆环病毒2型感染性克隆构建     

辛子琪  杨明珠  张晓茜  靳继惠  陈晓春  李俊平 《中国兽药杂志》2024,58(5):1-9

基于PCV2滚环复制原理,在分析PCV2不同基因亚型代表毒株基因组结构和序列的基础上,设计2对引物用于PCR扩增PCV2基因组序列。以从收集到的疑似PCV2感染的10份猪血清样品中提取的DNA为模板,用设计的引物扩增目的片段,并进行测序分析,1株为PCV2a型,4株为PCV2b型,5株为PCV2d型。每种基因型毒株中各选取一个样本,利用上述2对引物进行PCR扩增,并将扩增产物克隆至pEASY-Blunt simple载体中,通过双酶切连接2个PCR片段,构建含有约1500 bp重叠序列的PCV2基因组的质粒。通过脂质体转染法将含PCV2全基因组的质粒转染至PK-15细胞进行病毒拯救,经PCR和IFA两种方法验证,证明成功拯救出3个基因型的PCV2毒株。通过对PCV2全基因组结构及序列分析,该方法同样适用于PCV2g、PCV2h基因型病毒的感染性克隆构建。本研究建立了一种基于反向遗传学技术的PCV2感染性克隆的构建方法,为开展PCV2的病原学研究提供了技术支持。  相似文献   

表达绿色荧光蛋白重组鸭肠炎病毒构建   总被引：2，自引：2，他引：0  

孙莹  李俊平  黄小洁  李岭  曹明慧  李启红  李慧姣  杨承槐 《中国农业科学》2016,49(14):2805-2812

【目的】鸭肠炎病毒(duck enteritis virus, DEV)不同毒株间存在明显差异,DEV疫苗株的UL2基因在195bp后连续缺失528bp,导致第65位氨基酸后连续缺失176aa^[1]。将绿色荧光蛋白（GFP）基因插入DEV UL2基因中,获得表达绿色荧光蛋白的重组病毒,以研究UL2基因对DEV生物特性的影响和探讨DEV作为载体表达外源基因的可行性。【方法】以实验室保存的DEV细胞适应株DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体;以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂,将CMV启动子控制的含有GFP-gpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中,构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染CEF细胞,待80%细胞出现病变后,冻融3次,接种到新鲜CEF细胞单层的6孔培养板中,用含5%血清、1%双抗、1%琼脂的M199培养液覆盖,在荧光显微镜下挑取单个有绿色荧光的蚀斑,再接到新的细胞上,重复蚀斑筛选、纯化表达绿色荧光蛋白的重组病毒;利用PCR、基因测序技术鉴定重组病毒;重组病毒接种CEF（moi=0.01）,每12h取出1瓶接毒细胞,分别收集上清和细胞,测量其病毒含量,绘制一步生长曲线;重组病毒在CEF中连续传代20次,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,并用PCR检测GFP的传代稳定性;重组病毒免疫4周龄SPF鸭后14d,肌肉注射接种DEV强毒（CVCC AV1221）,观察免疫保护情况。【结果】经双酶切鉴定,成功构建了含绿色荧光蛋白报告基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt,将其与DEV共转染CEF细胞后8h,即可见转染细胞中有带有绿色荧光的梭形细胞,经过8轮蚀斑筛选,获得纯化的重组病毒rDEV-△UL2-GFP-gpt;PCR鉴定及基因测序结果显示,GFP标记基因成功地插入到DEV基因组中,替换了DEV UL2基因的196-723位核苷酸;一步生长曲线结果显示,重组病毒在细胞和上清中的病毒含量分别在36h和72h达到峰值,为10^6.2TCID₅₀/0.1mL、10^5.5TCID₅₀/0.1mL,与亲本毒无明显差异;重组病毒在CEF中连续传代,1-5代可以稳定表达GFP基因,第6代起,开始出现少量没有荧光的细胞病变,15-20代中绝大部分细胞病变无绿色荧光,GFP在细胞连续传代过程中容易出现突变;重组病毒以10^3.0TCID₅₀/只免疫麻鸭,免疫后14d能完全抵抗DEV强毒株的攻击,与亲本毒免疫原性一致。【结论】成功构建了表达绿色荧光蛋白的DEV,首次证实UL2基因缺失不影响其在细胞中的复制,也不影响其免疫原性,为DEV UL2基因功能、活载体疫苗研究奠定了基础。  相似文献   

带移民的二次加权分枝过程的吸收概率     

张红霞  李俊平 《安徽农业科学》2011,(9):5068+5072-5068,5072

研究了带移民的二次加权马尔可夫分枝过程,得到了吸收概率的相关结果,该结果在排队网络、生物学等诸多领域具有广泛的应用前景。  相似文献   

丙二醇对围产期奶牛氮平衡和尿中3-甲基组氨酸的影响     

刘强  王聪  李俊平  白元生  杨子森  师周戈  王文义 《中国畜牧杂志》2011,47(23)

选用24头体重(683.1±14.9)kg、胎次(2.5±0.2)、上一泌乳期305 d产奶量(7339±18)kg和预产期(24.5±0.2)d的经产奶牛,随机分为4组,从分娩前19 d开始分别在基础日粮中添加丙二醇0、150、300、450 mL/d,研究丙二醇对围产期奶牛氮平衡和尿中3-甲基组氨酸(3-MH)的影响。结果表明:各组奶牛分娩后第7、21、35天沉积氮逐渐增加(P<0.05),但均显著低于分娩前第21和第14天(P<0.05)。而奶牛分娩后第7、21、35天尿中3-MH逐渐增加(P<0.05),均显著高于分娩前第21和14天。分娩前第21天各组奶牛沉积氮和尿中3-MH没有显著差异(P>0.05),日粮添加丙二醇显著提高了奶牛分娩前第14天的沉积氮;与对照组相比,添加丙二醇300、450 mL/d显著提高了奶牛分娩后第7、21天和35天的沉积氮(P<0.05),显著降低了分娩前第14天和产后第7、21、35天尿中3-MH(P<0.05)。本试验结果表明,在日粮中添加丙二醇有益于改善围产期奶牛氮平衡和降低体蛋白质分解代谢,适宜添加量为300 mL/d。  相似文献   

鸡抗REV血清的制备与检定   总被引：1，自引：1，他引：0  

李俊平 《中国兽药杂志》2011,45(9):15-18

用网状内皮组织增生症病毒（REV）HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISA、IFA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种（或亚型）病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验（IFA）的效价为1：2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗（11818和11854的混合物）相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。  相似文献   

CAML蛋白对流感病毒复制调控机制的初步研究     

孔凡迪  王广文  严娅  温霞  王倩  赵玉辉  梁立滨  李俊平  李呈军  陈化兰  姜丽 《中国预防兽医学报》2021,(2):115-120

为探究宿主因子钙离子信号调节亲环素配体(CAML)调控流感病毒复制的机制,本研究通过siRNA干扰技术下调CAML的表达后,利用病毒蚀斑试验检测CAML对流感病毒复制的影响,利用激光共聚焦显微镜观察CAML对流感病毒NP蛋白入核的影响,通过流式细胞仪检测CAML对流感病毒诱导的细胞凋亡的影响.瞬时过表达CAML后,利用...  相似文献   

伪狂犬病毒5基因缺失株体外重组获得缺失基因的研究     

陈晓春  韩爽  吴华伟  邓永  曹明慧  李俊平＊ 《中国兽药杂志》2018,52(11):19-24

为研究伪狂犬病毒缺失株体外重组情况,将伪狂犬病毒5基因缺失毒株PRV-gE-/gI-/US9-/△UL49.5/TK-株与野毒株等量混合,经PK15细胞连续传代至第10代,通过分析第10代培养物中毒株类型和比例了解缺失毒株体外同源重组的情况。结果发现,除PRV野毒株和PRV-gE-/gI-/US9-/△UL49.5/TK-株外,出现了5种新的基因组合类型,分别为PRV（gI-/gE-/US9-/TK-）、PRV（gI-/gE-/US9-/gN-）、PRV（gI-/gE-/US9-）、PRV（TK-）、PRV（gN-）,病毒重组百分率为72%。重组毒株中以gI/gE/US9三基因缺失型为主,占重组蚀斑数的41.7%,占挑选蚀斑数的30%,高于野毒株和5基因缺失毒株的比例（26%和2%）,成为主要的优势重组毒株。从各病毒类型比例上看,缺失株同时获得所有缺失基因的几率很小,且重组后的毒株趋向于稳定的自然缺失毒株（如gE自然缺失的Bartha株）。5种新的基因组合类型的毒株以103.0TCID50接种健康易感家兔,未出现伪狂犬病典型临床症状,安全性好。  相似文献