PEDV CH-HeB14株S1蛋白表达及其多克隆抗体的制备     

唐青海  李晓蓉  杨海 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2018,46(4):1-12

【目的】制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH-HeB14毒株S1蛋白的多克隆抗体,为PEDV新流行毒株诊断试剂盒和疫苗研制提供基础材料。【方法】利用RT-PCR扩增PEDV CH-HeB14毒株S1基因,对序列特征进行生物信息学分析,用PCR将S1基因截成不同片段(S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2),分别克隆至原核表达载体pET28a,转化BL21(DE3)构建重组表达菌株;用IPTG诱导重组蛋白表达,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。将表达蛋白与佐剂乳化制备免疫原免疫兔多克隆抗体,Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。【结果】PEDVS1、S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2片段长度依次为2 079,600,600,878,549和447bp。系统进化树表明,CH-HeB14株与2010年以来的22个新流行毒株亲缘关系较近,而与经典疫苗株CV777、attenuated DR13亲缘关系较远。成功截短表达了S1蛋白不同区段S1A、S1B和S1C-1重组蛋白(rS1A、rS1B和rS1C-1),且蛋白均以包涵体形式表达。制备了抗rS1A、rS1B和rS1C-1蛋白的多克隆抗体,其与这3种蛋白反应良好,且抗rS1A重组蛋白的多克隆抗体Western blotting效价为1∶32 000;IPMA结果显示,该抗体能与PEDV CHHeB14毒株和经典疫苗毒株attenuated DR13均发生特异性反应。【结论】成功克隆、表达了变异毒株PEDV CHHeB14的S1基因,所制备的S1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性。  相似文献   

25份抗BmNPV家蚕育种素材对人工饲料育的适应性     

刘敏  李继娅  范永慧  廖鹏飞  杨海  李国灿  董占鹏 《中国蚕业》2024,(1):10-14

为选育出对人工饲料育适应性优良的抗BmNPV家蚕品种,对云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所保存的25份抗BmNPV家蚕育种素材进行了人工饲料育适应性研究,调查分析了这些家蚕育种素材24 h疏毛率、2眠蚕体质量及3龄蚕存活率。结果表明：供试的25份家蚕育种素材中,24 h疏毛率在90.10%～100%之间的有18份,在80.10%～90.00%之间的有5份;人工饲料育2眠蚕体质量多数低于桑叶育,但是其中有5份高于桑叶育,明8C高出桑叶育43.08%;3龄蚕存活率在90.10%～100%之间的有6份,在80.10%～90.00%之间的有13份,在60.10%～80.00%之间的有6份;24 h疏毛率在80.00%以上且与3龄蚕存活率差距在10个百分点以内的有11份,对该11份家蚕育种素材的24 h疏毛率和3龄蚕存活率相关性分析结果表明,它们的相关系数为0.634,呈显著相关。通过本试验,筛选出24 h疏毛率高和3龄蚕存活率高的家蚕育种素材,为选育出对人工饲料育具有良好适应性的抗BmNPV家蚕新品种打下基础。  相似文献   

高盐土壤环境对土壤水分传感器的影响及校正研究          下载免费PDF全文

刘鹏  姜月华  杨海  贾正阳  牛晓楠  杨辉  吕劲松 《西北农业学报》2023,(1):109-116

为对市场上主流水分传感器在高盐土壤中的含水量测量值进行定量化对比及校正，选取8种主流传感器(EC-5、5TE、Teros12、Hydra-probeⅡ、TDR315L、TDR315H、TDR305H、CS655),在江苏如东滨海重度盐土(全盐量为6.8 g·kg^-1)中进行含水量测量值对比及校正研究。在土柱中配制0.20～0.45 cm³·cm^-3 6个标准土壤含水量级土样，进行测量记录。对比结果发现：各传感器含水量测量值均呈现不同程度偏高。除EC-5外，其他传感器均出现局部高含水量区间失真现象，失真类型又分突变型和不敏感型两种。CS655全量程突变失真，Hydra-probeⅡ、5TE、TDR315L和TDR315H在0.35～0.40 cm³·cm^-3出现突变失真，TDR305H和Teros12超过0.40 cm³·cm^-3后呈现不敏感失真。在各传感器含水量测量值小于失真阈值范围内，TDR315H和TDR305H含水量测量值偏高程...  相似文献   

犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备          下载免费PDF全文

薛姣雄  赵婷芳  张倩  唐青海  高翠翠  赵铖  张妍  全飞杨  刘婷  杨灿  杨海  王文秀 《浙江农业学报》2023,(11):2568-2583

为表达犬冠状病毒(canine coronavirus, CCV)S1蛋白，制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S1基因全长及其截短片段，分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中，转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株；用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白；纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原，免疫蛋鸡，用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体，通过Western blot检测抗体滴度，用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示，S1蛋白全长无表达，CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128 000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈...  相似文献   

人工饲料和桑叶对家蚕机体3种代谢酶活性的影响     

王永生  朱水芬  陈松  陈云明  江亚  范永慧  杨启慧  李琼艳  杨海 《河南农业科学》2023,(1):154-160

为明确人工饲料和桑叶饲育对蚕体代谢酶活性的影响，自五龄起蚕开始用人工饲料和桑叶分组饲养家蚕，采用分光光度法检测家蚕中肠组织和血淋巴中碱性磷酸酶（ALP）、羧酸酯酶（CarE）和乙酰胆碱酯酶（AchE）的活性变化。结果显示，人工饲料组家蚕的血淋巴ALP活性无显著变化，而桑叶组血淋巴ALP活性呈现逐渐增强的趋势；在60 h和72 h，桑叶组的ALP活性显著高于人工饲料组。桑叶组和人工饲料组血淋巴CarE活性均随时间的延长逐渐增强，其中人工饲料组CarE活性略高于桑叶组，但差异不显著。在12 h和24 h，桑叶组血淋巴AchE活性略低于人工饲料组；在36 h，桑叶组血淋巴AchE活性开始升高，并且在48、60、72 h持续高于人工饲料组，AchE活性分别是人工饲料组的1.52、1.64、1.71倍。桑叶组家蚕中肠ALP活性在36 h开始显著高于人工饲料组，并随着时间的推移持续升高，在72 h，酶活性极显著高于人工饲料组，酶活性为人工饲料组的2.13倍。人工饲料组中肠CarE活性在24 h开始显著高于桑叶组，在60 h达到最高值，为桑叶组的2.61倍；在72 h,CarE活性有下降的趋势，但仍...  相似文献   

联合收割机电子控制系统的设计     

付昌星  杨海  宋玲  肖露云 《农机使用与维修》2023,(4):34-36

我国是农业大国，联合收割机是农业生产中的重要装备之一，在谷物收获过程中发挥着重要的作用。但是目前联合收获机存在自动化和智能化水平较低等问题，限制了联合收割机田间工作效率的提升。以实现联合收割机智能化控制为研究目标，基于CAN总线构建联合收割机控制系统，并对相关部件的设计与选型进行论述，最后通过田间试验验证整机控制效果，研究结果表明联合收割机整体控制精度较高，满足农业生产基本要求。  相似文献   

白乌鱼陆基帆布池养殖试验     

杨海  邓语  苏建  樊威  焦晓磊  吴俊  苏全森  卓婷 《科学养鱼》2023,(2):43-44

<正>本文通过白乌鱼陆基帆布池养殖试验，从生长情况、养殖成活率、养成个体、经济效益等方面分析白乌鱼在陆基小水体养殖条件下的生长情况，为白乌鱼小规格、高密度养殖探索新模式。一、试验条件与方法1.陆基帆布池安装选择一块空地安装陆基帆布池，陆基帆布池规格为直径3米、高1.8米的圆形镀锌板帆布池。镀锌板帆布池安装方法为：先根据帆布池大小，  相似文献   

猪圆环病毒2a型和2b型Cap蛋白的原核表达及鉴定     

赵婷芳  高翠翠  唐青海  赵铖  蔡林娜  侯鑫军  刘婷  全飞杨  胡意  刘会敬  杨灿  杨海 《湖南畜牧兽医》2023,(1):38-43

为制备猪圆环病毒2a型（PCV2a）和2b型（PCV2b）Cap蛋白，用生物信息学软件优化PCV2a Cap基因和PCV2b Cap基因密码子、克隆至p ET28a载体中、转化BL21(DE3)、构建重组蛋白表达菌株，通过优化原核表达的温度、IPTG浓度等条件进行蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果显示：重组PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白的分子量约为30 k Da，在不同温度下都以包涵体形式存在，在37℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达的Cap蛋白表达量最高。试验成功制备了PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白，为制备PCV2二价疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。  相似文献