鸡BRD2基因及其剪接体的克隆测序与亚细胞定位分析          下载免费PDF全文

周磊  袁超  韩一帆  高洪波  王燕碧  赵采芹  唐宏  段志强 《南方农业学报》2020,51(8):1806-1815

[目的]克隆鸡含溴结构域蛋白2(BRD2)基因及其剪接体,并对其进行序列分析和亚细胞定位,为深入研究鸡BRD2基因及其剪接体在细胞转录调控中的作用机理打下基础.[方法]通过RT-PCR扩增鸡BRD2基因及其剪接体的编码区(CDS)序列,采用BioEdit、ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、CDART等在线软件进行生物信息学分析;鸡BRD2基因及其剪接体经Xho I和BamH I双酶切后,分别亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1多克隆位点上构建重组真核表达载体,通过转染HEK-293T细胞进行亚细胞定位分析.[结果]鸡BRD2基因CDS序列全长2340 bp,编码779个氨基酸残基,分子量为85.66 kD,理论等电点(pI)为8.74,其编码蛋白二级结构主要由无规则卷曲(60.59%)和α-螺旋(28.50%)组成,含有3个明显的功能结构域(2个BD结构域和1个ET结构域).与鸡BRD2基因相比,其剪接体BRD2-X1、BRD2-X2和BRD2-X3的CDS序列长分别为2301、2283和1983 bp,编码766、760和660个氨基酸残基.以鸡BRD2氨基酸序列为参照,BRD2-X1表现为第526~537位氨基酸缺失,BRD2-X2表现为第1~19位氨基酸缺失,BRD2-X3表现为第1~119位氨基酸缺失;与鸡BRD2蛋白相比,鸡BRD2基因剪接体BRD2-X1和BRD2-X2并未影响鸡BRD2蛋白的功能结构域,而剪接体BRD2-X3导致鸡BRD2蛋白第一个BD结构域部分缺失.鸡BRD2基因融合蛋白EGFP-BRD2及其剪接体融合蛋白EGFP-BRD2-X1、EGFP-BRD2-X2和EGFP-BRD2-X3均定位在细胞核,EGFP-BRD2和EGFP-BRD2-X1在细胞核中呈均匀分布,而EGFP-BRD2-X2和EGFP-BRD2-X3在细胞核中呈不均匀的点状分布.[结论]鸡BRD2蛋白及其剪接体均定位在细胞核,但BD结构域缺失可引起BRD2剪接体BRD2-X3细胞核定位模式的变化.  相似文献   

鹅源新城疫病毒M基因的原核表达及其多克隆抗体制备     

段志强  胡娇  胡增垒  王郁杨  朱杰  胡顺林  刘秀梵 《江苏农业学报》2012,(1):125-130

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物;用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白;采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定。结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白;ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白。  相似文献   

新城疫病毒M蛋白细胞核定位的机制与功能研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

段志强  谢玲玲  周迪  王燕碧  赵采芹  唐宏 《畜牧兽医学报》2021,52(4):891-898

新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）M蛋白一种非糖基化膜相关蛋白,主要位于病毒囊膜内表面,构成了病毒囊膜和核衣壳连接的支架。研究表明,M蛋白是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白。在NDV感染早期,M蛋白可通过自身携带的核定位信号进入细胞核。根据已报道的相关RNA病毒M蛋白功能的研究结果,推测NDV M蛋白早期的细胞核定位有利于细胞质中病毒基因组的复制和转录,并且可能会抑制细胞基因的转录和蛋白质合成。目前,国内外对M蛋白的研究主要集中在M蛋白与NDV毒力和复制的关系以及以M蛋白为核心的病毒样颗粒形成机制和利用方面,而对M蛋白细胞核定位的机制和功能研究相对较少。鉴于M蛋白细胞核定位在NDV复制和致病过程中的重要作用,本文主要从NDV M蛋白的细胞定位特征、M蛋白细胞核定位的分子机制和功能方面进行阐述,以期为NDV M蛋白细胞核定位的功能及其作用机制研究提供理论参考。  相似文献   

猪源新城疫病毒研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

段志强  朱艳梅 《猪业科学》2011,28(1):92-94

新城疫病毒是一种变异及进化速度很快的病原,随着世界范围内新城疫病毒的4次大流行和疫苗的广泛、大量重复使用,新城疫病毒的宿主范围随之明显扩大,现已向哺乳动物——猪跨进.对猪源新城疫病毒病原学、引发的临床症状、实验室诊断方法及其毒力和基因变异等方面进行综述,并对猪源新城疫病毒发生的可能原因进行了分析.  相似文献   

郑州黄河湿地自然保护区生态评价     

杨彦利  邱记东  段志强 《河南林业科技》2011,(3):26-27

以具有代表性的湿地评价的生物多样性、代表性、稀有性、自然性、面积适宜性,脆弱性和人类威胁等7个指标建立评价体系,对郑州黄河湿地自然保护区进行了生态评价,结果表明：该保护区生态质量较好,但仍需措施来提高保护区的生物多样性保护能力。  相似文献   

项目教学法在餐饮企业管理专业教学中的应用     

王风雷  段志强 《河南农业》2012,(20):35-36

以郑州旅游职业学院餐饮企业管理专业为例,简要介绍了项目教学法的基本原理,并对项目教学法与传统教学方法进行了对比.同时,结合实践教学中积累的经验,以实例展示项目教学法在餐饮企业管理专业教学中的应用.  相似文献   

浅析高河水库上游人工湿地净化工程设计     

李莉段志强白娟张卫张方方 《现代农业科技》2020,(5)

高河水库上游人工湿地工程的主要是为了净化高河水库入库水质,提高高河水库供水水质安全性,使高河水库水质满足地表饮用水Ⅲ类标准。上游入库河流东沟河,其河水受到了一定程度的污染。采用表面湿地系统中的物理、化学和生物作用的优化组合对入库前的河水净化处理,本文进行了表面人工湿地设计方面的探讨。  相似文献   

猪支原体肺炎诊断方法的研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

浦同灿  段志强  嵇辛勤 《猪业科学》2010,27(6):74-76

猪支原体肺炎又称猪喘气病,几乎在所有养猪的国家和地区均有发生和流行.该病主要导致患猪生长缓慢、饲料转化率低,给养猪业造成巨大的损失.在当今规模化猪场中,猪感染后多呈慢性或隐性感染,给该病的诊断带来了不便.本文简要概述了国内外对猪支原体肺炎的诊断方法,包括临床诊断、病理组织学诊断和实验室诊断方面的方法,以期为该病的诊断提供帮助.  相似文献   

NaCl胁迫对怀牛膝种子萌发、幼根生长以及K、Ca、Fe含量的影响     

丁笑生  段红英  宋建英  何云龙  段志强  李新伟 《河南农业科学》2010,(4)

以中草药怀牛膝的2个品种核桃纹和风筝棵为材料,研究了NaCl胁迫对怀牛膝种子萌发、幼根生长以及K、Ca、Fe元素含量的影响。研究发现,高浓度NaCl对怀牛膝种子发芽率和根长有明显的影响,与对照相比,NaCl处理的怀牛膝种子发芽率极低,且根生长缓慢,没有形成侧根。通过原子吸收光谱法检测,发现风筝棵和核桃纹中均含有K、Ca、Fe元素,核桃纹中K、Ca的含量高于风筝棵中的,而风筝棵中的Fe含量明显高于核桃纹中的。62.5 mmol/L NaCl处理使怀牛膝中K、Ca、Fe元素含量都降低。但是,NaCl胁迫对核桃纹品种的影响大于对风筝棵的影响。以上研究结果表明,NaCl胁迫对怀牛膝2个品种核桃纹和风筝棵的发芽率、幼根生长以及K、Ca、Fe等元素含量都有不同程度的影响。  相似文献   

林业院校学生创业教育刍议     

段志强 《湖南林业》2001,(3):14-14

１９８９年１１月在北京召开的“面向２１世纪教育国际研讨会”上，正式提出了“创业教育”这个新概念、新名词。其内涵是以开发和提高青少年创业精神和创业能力，使之成为具有开创性的社会主义建设者和接班人。林业院校对学生加强“创业教育”，就是要培养学生创业和开拓进取精神，提高他们的创业能力和竞争力，使之在就业竞争中始终处于有利地位。“创业教育”和“素质教育”的目标是一致的。国务院李岚清副总理指出：“素质教育的根本目的是使教育面向全体学生，全面提高学生的基本素质，促进学生在德、智、体和美育等方面全面发展，注重…  相似文献