草地贪夜蛾Sf9细胞对饥饿诱导自噬的响应   总被引：1，自引：0，他引：1  

谢昆  王丽仙  王靖  朱灵明  尹建华  叶青霞  孙艳 《华北农学报》2017,32(3)

为研究草地贪夜蛾对饥饿诱导自噬的响应。从草地贪夜蛾EST数据库中筛选到一段核苷酸序列,设计特异性引物,RT-PCR技术从草地贪夜蛾Sf9细胞中扩增该核苷酸序列,经过生物信息学分析该序列与昆虫自噬相关基因ATG8同源性最高,命名为SfATG8基因,并构建了pIEX-4-mCherry-EGFP-SfATG8载体转染Sf9细胞。Sf9细胞经饥饿(PBS)诱导4 h后,Lyso-Tracker染色、Western Blotting、共聚焦显微镜检测细胞对自噬的响应程度。结果表明,经饥饿(PBS)诱导4 h的Sf9细胞中出现Sf Atg8-PE的表达,共聚焦显微镜检测到Sf9细胞膜上的自噬小体。以上证据证实饥饿(PBS)能诱导Sf9细胞发生自噬,为深入研究Sf9细胞对自噬的响应奠定了基础。  相似文献   

本氏烟NbMBF1c的克隆、表达及在TMV侵染过程中的功能     

温玉霞  张坚  王琴  王靖  裴悦宏  田绍锐  樊光进  马小舟  孙现超 《中国农业科学》2022,55(18):3543-3555

【目的】烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）是危害茄科、十字花科、葫芦科等农作物的重要病毒,给农业生产造成了巨大损失。通过分子克隆获得本氏烟（Nicotiana benthamiana）多蛋白桥梁因子1c(multiprotein bridging factor 1c,MBF1c),综合应用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段,明确NbMBF1c的抗病毒功能和机制,为作物的抗病毒育种提供理论依据。【方法】根据Sol Genomics Network中报道的NbMBF1c序列全长,设计引物克隆NbMBF1c全长序列;使用GeneDoc及MEGA X对NbMBF1c蛋白和其他物种中的同源蛋白序列进行比对并构建系统进化树;利用生物信息学分析NbMBF1c的基因特征和蛋白结构;使用实时荧光定量PCR检测其组织表达及其在TMV侵染中的表达;利用烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）诱导的基因沉默（virus induced gene silencing,VIGS）技术沉默NbMBF1c后通过摩擦接种TMV-GFP,明确NbMBF1c对病毒...  相似文献   

番茄SlN-like的克隆、表达与抗病毒功能     

刘昌云  李欣羽  田绍锐  王靖  裴悦宏  马小舟  樊光进  汪代斌  孙现超 《中国农业科学》2021,54(20):4348-4357

【目的】番茄（Solanum lycopersicum）作为重要的蔬菜作物,其生长受到包括害虫、真菌、细菌和病毒等各种生物因素的危害。明确番茄抗性基因SlN-like的抗病毒功能与机制,为番茄的抗病毒育种与抗病毒药剂的靶向开发提供理论依据。【方法】从茄科植物基因组数据库Solanaceae Genomics Network中获得SlN-like的全长,并将其分为4段,利用融合聚合酶链式反应（fusion PCR）扩增获得SlN-like的序列全长;通过生物信息学分析SlN-like的进化关系、蛋白特征、保守结构域、亚细胞定位以及互作关系;通过实时荧光定量PCR分析SlN-like在番茄根、茎、叶、花和果实中的表达情况及其在烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）侵染后的叶片表达量;借助烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默技术（virus induced gene silencing,VIGS）沉默番茄内源SlN-like,摩擦接种TMV-GFP于沉默植株,明确SlN-like对病毒侵染的影响。实时荧光定量PCR分析沉默植株中脱落酸（abscisic acid）、茉莉酸（jasmonic acid）和乙烯（ethylene）激素相关基因的表达量及SlN-like在外施乙烯利（ethephon,ETH）3、6、12、24 h后的表达情况,最终明确SlN-like调控激素途径响应病毒侵染的机制。【结果】通过分子克隆与融合PCR技术,从番茄品种Micro-Tom中克隆获得全长3 444 bp 的SlN-like,上传至NCBI获得序列号MW792493。通过生物信息学分析发现SlN-like含有TIR、NB-ARC和NACHT结构域,并与马铃薯（Solanum tuberosum）N-like（AAP44394.1）亲缘关系最近。SlN-like在番茄各组织中均有表达,在茎中的表达量最高,其次是根、花,叶和果实中的表达量最低。TMV-GFP侵染番茄后第5、7天SlN-like的表达显著高于PBS处理,分别是PBS处理的1.6和2.2倍,并且TMV-GFP侵染会使SlN-like的表达持续升高。TRV载体介导沉默番茄的SlN-like,发现沉默78.3%的SlN-like不会影响番茄生长表型,但可促进TMV-GFP侵染;实时荧光定量PCR分析发现沉默植株中ERF1的表达显著降低,仅为对照组的12.5%;外施乙烯利处理番茄3 h后SlN-like表达量升高,并在12 h达到最高峰,是对照组的2.71倍,24 h后恢复正常。【结论】番茄SlN-like属NBS-LRR类抗病蛋白,其表达受TMV侵染诱导,沉默SlN-like促进TMV-GFP侵染,降低乙烯相关基因ERF1的表达,而外施乙烯利导致SlN-like的差异表达,揭示了SlN-like作为正调控因子可能影响乙烯途径介导的番茄抗病毒防御。  相似文献   

机械自动化设计与制造存在的问题及改进方法分析     

王靖憓 《湖北农机化》2020,(2)

在机械自动化设计与制造过程中,由于种种因素都会影响到设计与制造,导致问题的出现。对于这些问题,我们应该采取积极的解决措施,来保证机械自动化设计与制造的合理性和科学性。本文通过分析机械自动化设计与制造过程中存在的问题,提出其改进措施。  相似文献   

BIO PERFOR体系室内暂堵评价及现场应用     

黄华祥  王靖  罗少锋 《长江大学学报》2014,(5):99-102

在修井作业中，因井下地层压力亏空常常导致大量修井液进入储层，从而造成对储层不同程度的伤害。有效控制修井液进入储层的漏失量是储层保护的一项重要措施。这就要求选用有效的暂堵剂建立井筒液柱实现过平衡压井。对BIO PERFOR暂堵液体系基本配方的承压指标、酸溶、储保、综合性能以及高温配方所需破胶时间等5个方面进行了室内评价。评价结果表明，该体系具有良好的暂堵效果，储保效果优，配套的隐形酸完井液对该体系具有辅助破胶功能，且耐高温配方具有自行破胶和易于破胶的特点。BIO PERFOR暂堵液体系应用在一油田5口井修井作业过程中获得成功，暂堵储保效果令人满意。  相似文献   

昆虫蛋白质的功能 制备方法及相关食品的开发现状     

张佳兰  王靖  任广旭  高梦祥 《农产品加工．学刊》2019,(8)

由于昆虫类群大、繁殖速率高、生长发育快、蛋白质含量高、氨基酸类别丰富、食物利用率高,被认为是最具开发潜力的动物蛋白源。阐述了昆虫蛋白的组成特点、昆虫蛋白的营养保健价值、昆虫蛋白制备方法和昆虫蛋白食品的开发利用现状。  相似文献   

汗水筑成林区路     

王靖 《山西林业》1994,(3)

汗水筑成林区路位于太行山中段的太行林区，地跨和顺、左权、榆社３县，纵横连绵千里。为了开发林区丰富自然资源，把木材和林副产品尽快推向市场，太行林局每年投资１０万余元用于筑路。截至目前，已投工２６万个，投资２５０万元，修通林区道路１５０余条，总长５００公...  相似文献   

辽宁发生茄子棒孢叶斑病   总被引：7，自引：2，他引：7  

李明远  李兴红  张涛涛  王靖  严红 《植物保护》2001,27(6):48-49

近年来 ,辽宁海城地区保护地茄子发生了一种新病害 ,对产量造成较大的影响 ,我们对海城市温乡镇后湖村送来的标本进行了鉴定 ,现将结果报道如下。1　症状发病初期叶片生褐色小点 ,扩大后呈星状 ,边缘不整齐。在潮湿条件下病斑扩大呈近圆形至不整齐形 ,有时病斑有少量的轮纹 ,边缘无明显的晕圈。在叶面形成大小不等的病斑 ,大的直径可达 15ｍｍ ,病斑数量多时引起植株早期落叶。该菌还可以危害茄子植株茎基部 ,初为淡褐色 ,稍后表面凹陷 ,最后呈干腐状 ,表面生浓密黑色霉层 ,严重时引起上部萎蔫 (封面彩图 3)。据介绍该病也发生在果实上 ,但…  相似文献   

家蚕抗菌肽基因BmCecropinD的克隆及重组蛋白的自诱导表达     

谢昆  谭玉婷  王靖  赵昱  张成桂  杨自忠 《动物医学进展》2018,(5)

BmCecropinD是家蚕体内的一种抗菌肽,具有极强的抗菌活性。以家蚕中肠总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增BmCecropinD基因,构建pET32a-BmCecropinD原核表达载体,采用自诱导表达系统表达BmCecropinD重组蛋白。结果表明,BmCecropinD基因大小186bp,编码61个氨基酸,自诱导表达的重组蛋白约为18ku,表达产率比IPTG诱导的重组蛋白表达产率高,为BmCecropinD抗菌肽的纯化、活性鉴定及应用奠定了基础。  相似文献   

远海钢质养殖平台锚泊模型试验研究     

王靖  焦尔  张彬  谌志新 《渔业现代化》2018,(3)

为保证钢质养殖平台在远海恶劣海况下的安全性,对养殖平台锚泊方案进行风、浪、流水池模型试验论证。根据模型试验的相似准则,采用养殖平台与模型几何相似、水池流体动力相似、非定常流动相似、模型缆绳与实体满足弹性相似的条件。通过试验,测出在不同大小和方向的风、浪、流作用下每根缆绳的受力值,以及养殖平台模型的运动状态、位移和方向。结果显示:在横风、横浪和横流(均为90°)工况下,缆绳受力最大,最大值为114.96 k N,垂荡和橫摇运动量最大,垂荡最大值7.99 m,橫摇最大值12.25°;在斜风、斜浪和斜流(均为45°)工况下,纵摇运动量最大,最大值为8.4 m;波浪越高,缆绳受力也越大,养殖平台运动量也变大。研究表明:与船级社指南对比,在各个工况下,该养殖平台锚泊方案符合船级社系泊指南要求。  相似文献