山羊RORα基因的克隆、表达载体构建及功能分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

高登科  赵泓淙  董浩  靳亚平  陈华涛 《畜牧兽医学报》2022,53(6):1779-1794

旨在克隆山羊维甲酸相关孤儿受体α(RORα)基因并构建其真核表达载体,然后利用生物信息学工具系统分析RORα的生物学特性,最后对其在山羊生物钟系统中的作用机制进行初步探究。本研究以1只健康的12月龄雄性西农萨能奶山羊为试验动物,提取其肝组织总RNA,经逆转录PCR反转录为cDNA后,利用常规PCR扩增山羊RORα基因的编码区(coding sequence,CDS)片段,使用同源重组法将其与pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体相连接; 重组载体经PCR、酶切和测序鉴定后,将阳性质粒命名为pcDNA3.1-3HA-gRORα; 将pcDNA3.1-Puro-N-3HA和pcDNA3.1-3HA-gRORα质粒分别转染至HEK293T细胞后,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blotting,WB)技术检测山羊RORα的表达; 同时利用ExPASy、ProtScale等软件对山羊RORα基因进行系统的生物信息学分析。另外,使用同源重组法分别构建含有山羊生物钟基因BMAL1和NR1D1启动子片段的pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc及pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc的荧光素酶报告质粒,并通过双荧光素酶报告试验探究山羊RORα蛋白调控BMAL1和NR1D1基因启动子转录活性的作用机制。PCR、酶切和测序鉴定结果表明,pcDNA3.1-3HA-gRORα重组质粒构建成功; qPCR和WB结果显示,pcDNA3.1-3HA-gRORα转染组RORα基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平均显著高于pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组(P < 0.01)。生物信息学分析结果显示,山羊RORα基因CDS区序列与绵羊、牛和猪的相似性较高,分别为97.5%、97.1%和95.2%。山羊的RORα蛋白是一种亲水性蛋白。二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,有信号肽的概率较小,无跨膜区; 三级结构与小鼠和人的RORα蛋白差异性极小,三者具有高度相似性。此外,PCR、酶切和测序结果表明,pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc和pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc重组质粒构建成功。双荧光素酶报告试验结果表明,山羊RORα蛋白可以显著上调山羊BMAL1和NR1D1基因启动子的转录活性。本研究成功构建了山羊RORα基因的真核表达载体,并证明了RORα蛋白可以正向调控山羊BMAL1和NR1D1基因的启动子活性,这为进一步探究山羊核受体RORα的功能及山羊生物钟的转录调控机制提供了前期基础。  相似文献   

昌吉州今春以农田林网化建设为中心的植树造林取得历史最好成绩     

董浩生 《新疆林业》1985,(5)

今春,昌吉州以农田林网化建设为中心的植树造林,取得了历史上最好的成绩,造林44215亩,超额47.4％完成全年任务;四旁植树311万株,义务植树199.4万株,均超额完成了全年任务;营造速丰产林1065亩,超额77.6％完成计划;育苗7519亩;造林突破二千亩的乡有3个,突破千亩的乡有10个,有六个乡新造农田防护林带  相似文献   

武威加快核桃的条件分析与对策     

富远年  王晓英 《甘肃林业》2006,(6):21-23

  相似文献   

稀土微肥对樟树生长影响试验初报     

刘银苟  郭德选  龙光远  黎明晋 《江西林业科技》1989,(1):15-17

1987年在泰和用稀土微肥喷洒2年生樟树叶面，结果表明能促进植株生长。此法的特点是用量少、成本低、效益显著。  相似文献   

天然右旋龙脑加工技术的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

罗忠生  龙光远  彭招兰  周锡祥  李牛贵 《江西林业科技》2003,(1):11-12,14

研究了天然右旋龙脑的加工、提纯的工艺技术。提出较好的加工时间、冷却方式、面积、提纯的工艺方法。  相似文献   

病毒和细菌类生物制剂防治美国白蛾试验   总被引：6，自引：0，他引：6  

肖放  张文学  王昶远  刘平  都兴菊  张艳秋 《中国森林病虫》2005,24(3):34-36

采用美国白蛾核型多角体病毒和苏云金杆菌对美国白蛾幼虫进行了防治试验，效果均在74％以上。生物防治能有效地保护人居环境不受污染，保护自然界天敌，形成自控的生态系统。降低美国白蛾的危害。  相似文献   

天然冰片的新资源   总被引：5，自引：2，他引：5  

欧阳少林  龙光远  黄璐琦  项海英 《江西林业科技》2005,(5):38-38

天然冰片是一种名贵珍稀药材和高级香料．又称天然右旋龙脑、梅片。原产印尼的苏门答腊群岛，采用龙脑香科龙脑香树的树脂提取，我国历来依靠进口来满足需要。通过我国科技人员的不懈努力．在1980—1990年代．发现了3种樟科植物可提取天然冰片，①江西省吉安林科所从香樟Cinnamomum camphora的一种化学型——龙脑樟植物中提取的天然右旋龙脑；②湖南新晃县从油樟Cinnamomum longepaniculatum的一种化学型——龙脑型植物中提取的天然右旋龙脑；③中科院华南植物所从阴香Cinnamomum burmannii的一种化学型——梅片树中提取的天然右旋龙脑。现就天然冰片的3种新资源进行简单介绍。  相似文献   

樟树精油含量的研究   总被引：3，自引：1，他引：3  

龙光远  郭德选  刘银苟 《江西林业科技》1989,(6):7-14

对樟树不同化学类型、部位、年龄(胸径)、环境、采叶期精油舍量研究表明，各类型叶精油含量分别为：芳樟1．75±0．41％，脑樟2．06±0．42％，油樟1．99±0．38％，异樟0．40±0．16％，龙脑樟1．73±0．20%。除异樟外各类型成龄树的精油含量以根最高，干叶次之，枝最少；幼树则以叶最高，根次之，干枝最少。根含海量依树龄增加；叶舍油量与生长节律有关。利用脑樟、芳樟、油樟枝叶可获得比其根干更优质的精油，龙脑樟枝叶是樟科提取右旋龙脑的新资源。立地对樟树舍油量的影响视其类型和部位而定，河边沙壤脑樟的高于岗地虹壤上的，芳樟根舍油量则是岗地虹壤的更高，而立地对芳樟叶舍油量影响不大。  相似文献   

奶牛结核病IFN-γ基因的克隆及其在E.coli BL21(DE3)中的高效表达     

豆玲  豆思远  周峰  王佳  尚立宏  曹丽萍  鄂承钧 《畜牧兽医杂志》2015,34(1):18-21

动物机体内γ-干扰素(IFN-γ)是可被多种物质诱导产生的生物活性蛋白,克隆和诱导表达奶牛结核病IFN-γ蛋白,对于采用ELISA诊断牛结核病有着重要意义。本研究利用RT-PCR方法克隆了奶牛结核病IFN-γ基因,并成功构建了IFN-γ基因的原核表达载体重组质粒pET28a-IFN-γ,转入E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并对条件进行了优化。SDS-PAGE与Western Blot结果显示,在37℃条件下,0.75mmol/L IPTG诱导4h可见重组蛋白BovIFN-γ大量表达。本研究成功建立了利用原核表达系统获得牛IFN-γ蛋白的方法,对后续利用该蛋白作为免疫原,从而建立ELISA诊断方法奠定了基础。  相似文献   

种植密度和品种对青饲玉米生物量与营养品质的影响     

苏亚军  焦婷  吴建平  李玉  豆思远  刘婷  宫旭胤  王建福  雷赵民 《草业科学》2022,38(5):935-946

通过研究种植密度和品种对青饲玉米(Zea mays)生物量与营养品质的影响,筛选出适宜环县地区的较优青饲玉米品种及种植密度,以期为该区优质青饲玉米的推广种植及牛羊青粗饲草料资源的开发提供理论依据.试验于2019年选用'东单13'(H1)、'正大12'(H2)、'科玉188'(H3)、'衡远4038'(H4)及'濮单6号'(H5)5个青饲玉米品种为试验材料,每个品种分别设4.50×104(D1)、5.25×104(D2)、6.00×104(D3)、6.75×104(D4)及7.50×104(D5)株·hm?25个种植密度,结果表明,种植密度对鲜草产量和干草产量的影响极显著(P<0.01),对粗灰分(Ash)含量的影响显著(P<0.05).品种对粗脂肪(EE)、Ash、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、淀粉(ST)、钙(Ca)、磷(P)和总可消化养分(TDN)含量及48 h干物质体外消化率(IVDMD)的影响极显著(P<0.01),对干物质(DM)、水溶性碳水化合物(WSC)含量的影响显著(P<0.05).用灰色关联度对各处理生物量和营养品质指标综合评价后,结果排名前三的品种及密度依次为H1D5>H2D4>H3D5.综上,在环县地区表现较优、排名前三的青饲玉米品种及其密度分别为7.50万株·hm?2的'东单13'、6.75万株·hm?2的'正大12'及7.50万株·hm?2的'科玉188',可在该地区推广种植.  相似文献