利用原核表达的外壳蛋白制备草莓轻型黄边病毒抗血清   总被引：1，自引：0，他引：1  

代红艳  于翠梅  张志宏  李贺  马跃  刘月学 《果树学报》2013,(4):578-581

【目的】探索以原核表达的草莓轻型黄边病毒(SMYEV)外壳蛋白(CP)为抗原制备抗血清的方法,从而建立利用ELISA检测SMYEV的技术体系。【方法】利用IPTG诱导SMYEV CP重组蛋白在大肠杆菌中表达,分离纯化重组蛋白并以其为抗原对新西兰兔进行免疫。血清效价达到要求后,分离纯化抗血清并利用DAC-ELISA对草莓植株进行SMYEV检测,同时利用RT-PCR对DAC-ELISA检测结果进行验证。【结果】宿有SMYEV CP基因的大肠杆菌经IPTG诱导后出现一条52.0 ku左右的特异性重组蛋白谱带,以纯化的重组蛋白为抗原制备出专一性较强的针对SMYEV的抗血清,该抗血清稀释800倍后仍能有效检测草莓植株中的SMYEV。利用DAC-ELISA和RT-PCR对26份草莓试材分别进行SMYEV检测,2种检测方法的检测结果基本一致。【结论】以原核表达的SMYEV CP为抗原可以制备出专一性较强、效价较高的SMYEV的抗血清。  相似文献   

根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨越  张志宏  刘月学  何平  周宇  代红艳  赵桂玲 《果树学报》2010,(2)

以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3～4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。  相似文献   

平邑甜茶子叶和下胚轴离体再生不定芽的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘霁菡  代红艳  赵恺  张志宏 《东北农业大学学报》2011,42(10):90-94

为了建立高效的平邑甜茶离体再生体系,以平邑甜茶子叶和下胚轴为外植体,研究了不同外植体部位、暗培养时间、基本培养基、激素种类和浓度对不定芽再生的影响.结果表明,近轴端子叶的再生频率是远轴端子叶的3.1倍、下胚轴的3.7倍.在附加不同浓度的NAA、IBA与TDZ的SC培养基上,近轴端子叶的不定芽再生率达90％以上.在附加1...  相似文献   

草莓AP1同源基因的克隆、表达及启动子分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

邹冬梅  刘月学  张志宏  李贺  马跃  代红艳 《中国农业科学》2012,45(10):1972-1981

【目的】从草莓（Fragaria×ananassa）中克隆APETALA1(AP1)同源基因,并分析其在不同组织、器官及不同花发育阶段的表达水平,探讨其在草莓植株成花进程中的作用。【方法】根据其它物种AP1同源基因的保守序列设计简并引物,以草莓幼叶和花芽为试材,克隆得到AP1的基因片段,在此基础上利用RACE的方法分离获得其cDNA全长。利用实时定量RT-PCR分析草莓不同组织、器官及不同花发育阶段中AP1同源基因的表达水平。利用染色体步移的方法分离启动子序列。【结果】从草莓品种‘花姬’中克隆出AP1同源基因的cDNA全长序列,命名为FaAP1;其CDS长度为735 bp,编码245个氨基酸,与玫瑰AP1-1的氨基酸序列同源性最高,达到92%,与拟南芥AtAP1的氨基酸序列同源性为64.00%。FaAP1编码的氨基酸全长序列符合MADS-box基因家族特征,包含MADS-box、I-间插域、K-box域和C-末端几个结构域,是MIKC类型的MADS-box基因家族的成员。实时定量RT-PCR结果表明,在不同组织、不同花器官及不同花发育阶段中FaAP1的表达量存在差异。其启动子除了具有TATA/CAAT-box外还包含一些特异作用元件。【结论】从草莓中分离出的FaAP1基因,在花分生组织形成和花器官发育中有一定的调控作用。  相似文献   

山楂胚离体培养及四倍体诱导研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

代红艳  郭修武  何平  张志宏 《果树学报》2012,(1):71-74,159

以山楂为材料,研究了幼胚和成熟胚离体培养及四倍体诱导技术。花后40 d的山楂幼胚离体培养的成苗率很低,供试的15份资源的成苗率都小于20%。成熟胚离体培养的成苗率较高,调查的4份资源的成苗率均大于50%。用0.5%秋水仙碱+1%二甲基亚砜的混合溶液处理山楂成熟胚48 h,然后在SC+IBA 0.1 mg.L-1+TDZ 1.0 mg.L-1培养基上诱导芽分化。对秋水仙碱处理成熟胚再生植株进行茎尖染色体数目观察,检测的67个隆化粉肉植株中有3个是四倍体,变异率达4.5%。研究建立了山楂多倍体离体诱导体系,为培育山楂多倍体品种奠定了重要基础。  相似文献   

草莓轻型黄边病毒的RT-PCR检测及其3''端序列分析   总被引：2，自引：1，他引：2  

杨洪一  张志宏  高秀岩  杜国栋  代红艳  李贺 《园艺学报》2005,32(3):403-407

利用RTPCR技术对草莓植株中草莓轻型黄边病毒(SMYEV)的外壳蛋白基因片段进行特异扩增,扩增产物经测序证明为SMYEV的特异片段。建立了稳定的SMYEV的RTPCR检测体系,并对19个草莓品种和2种野生草莓进行检测,其中12个品种和五叶草莓带有SMYEV。从SMYEV的沈阳分离物SY01上扩增出了932bp的基因组3末端区域,其核酸序列与国外分离物的序列同源性为86%～96%。系统进化树显示SMYEV分为3个组群,沈阳分离物SY01与欧美分离物位于同一组群内,但独立形成1个小的分支。RNA二级结构分析显示SMYEV基因组3末端形成3个茎环结构,不同分离物的序列变化并未引起茎环结构的明显变化。  相似文献   

丛生福禄考的离体繁殖   总被引：2，自引：0，他引：2  

代红艳  张志宏  高秀岩  王凤兰 《园艺学报》2004,31(3):397-399

 建立了丛生福禄考离体繁殖体系。用0.1％ HgCl₂溶液对丛生福禄考的新生嫩茎进行消毒， 适宜的消毒时间为10 min。1 mm茎尖的成苗率达到83.3％。去顶芽的试管苗新梢比具顶芽的试管苗新梢的增殖能力高约50％。采用腋芽萌发途径，品种丹尼尔垫和多摩流的增殖系数分别达18和8。在附加IBA 0. mg／L的1/2 MS培养基上新梢的生根率达到80％。试管苗大规模移栽的成活率达90％以上。基因型显著地影响丛生福禄考离体增殖的效率。  相似文献   

鸡传染性鼻炎的诊治     

代红艳 《养禽与禽病防治》2001,(5)

一、发病情况及临诊症状 ２０００年１０月上旬，某养殖场饲养的４０００套海兰白父母代种鸡在１２５天龄时发现有个别公鸡肿眼、肿脸现象，以后每天能检出１０多只相同症状的公鸡。病鸡厌食，卧在笼中，闭目似睡，精神倦怠，不愿走动，排绿色粪便，严重的整个头部肿大，眼睛陷入肿胀的眼眶内，两侧肉髯肿大。 二、剖检变化 鼻腔及窦腔粘膜有卡他性炎症，鼻分泌物增多，面部及肉髯皮下水肿。 三、实验室检查 １．采取病料：以无菌操作剪断鼻的前部，剪开窦腔，将灭菌棉拭深深插入窦腔中。 ２．分离培养：将蘸有病料的灭菌棉拭在血琼脂平板上…  相似文献   

草莓LFY 同源基因的克隆及其表达分析     

刘月学  邹冬梅  李贺  张志宏  马跃  代红艳 《园艺学报》2012,39(5):861-868

 以草莓（Fragaria × ananassa）品种‘花姬’为试材,通过PCR和RACE的方法克隆出LFY同源基因的cDNA全长序列,命名为FaLFY（GenBank收录号JN788260）,通过定量PCR的方法检测了该基因在草莓植株各组织和花器官中的表达。结果表明FaLFY编码区长度为1 236 bp,编码412个氨基酸,与其他物种的氨基酸序列都有一定的同源性,其中与蔷薇科玫瑰的LEAFY-1同源性最高,达到88%。实时定量RT-PCR结果表明,在不同的组织、不同的花器官中FaLFY的表达量存在差异,其中在花芽中的表达量最高,在营养生长的组织中基本不表达,在成熟花器官中同样不表达,说明该基因在草莓的成花进程中发挥重要作用。  相似文献   

草莓轻型黄边病毒的RT-PCR检测及其3'端序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨洪一张志宏  高秀岩杜国栋  代红艳李贺 《园艺学报》2005,32(3):403-407

 利用RT-PCR技术对草莓植株中草莓轻型黄边病毒( SMYEV) 的外壳蛋白基因片段进行特异扩增, 扩增产物经测序证明为SMYEV的特异片段。建立了稳定的SMYEV的RT2PCR检测体系, 并对19个草莓品种和2种野生草莓进行检测, 其中12个品种和五叶草莓带有SMYEV。从SMYEV 的沈阳分离物SY01上扩增出了932 bp的基因组3'末端区域, 其核酸序列与国外分离物的序列同源性为86% ～96%。系统进化树显示SMYEV分为3个组群, 沈阳分离物SY01与欧美分离物位于同一组群内, 但独立形成1个小的分支。RNA二级结构分析显示SMYEV基因组3'末端形成3个茎环结构, 不同分离物的序列变化并未引起茎环结构的明显变化。  相似文献