内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建     

吴萍  张文广  李金泉  李赛明  杨秀娟  徐磊  常子丽  刘兴亮  丽春  刘维  张燕军  王志新  张永斌 《中国畜牧兽医》2010,37(8):73-77

根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物,提取皮肤组织总RNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后与pGM-T载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞Top10,质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定,获得阳性Hairless、β-actin重组质粒;将阳性重组质粒按10³～10⁷拷贝/反应梯度稀释作为模板,进行实时荧光定量PCR,系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示,产物熔解曲线峰值单一,说明引物特异性高,且无引物二聚体;Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r²=0.998、r²=0.999,说明线性关系好。重复性试验结果显示,所构建的重组质粒9次同条件扩增Ct值具有良好的重现性,且变异率小于6%(10⁷拷贝/反应除外),说明标准曲线重复性好。试验成功构建了目的基因Hairless、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绒山羊Hairless基因的mRNA表达水平奠定基础。  相似文献   

转化生长因子受体Ⅱ基因在绒山羊皮肤中的表达     

刘兴亮  李金泉  张文广  王志新  张永斌  张燕军  常子丽  丽春  吴萍  刘维  高爱琴 《中国畜牧兽医》2010,37(7):86-85

选择在转化生长因子(TGF-β)信号转导中起关键作用的转化生长因子受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)为切入点来研究TGF-β信号通路在绒毛周期性生长中的作用。试验通过提取内蒙古绒山羊皮肤总RNA并采用RT-PCR技术对内蒙古绒山羊不同时期皮肤中TGF-βRⅡ基因表达进行测定。结果表明,TGF-βRⅡ在1(退行期)、3(休止期)、5(兴盛前期)和9月份(兴盛期)均有表达。由此推测,TGF-βRⅡ可能通过与TGF-β结合对绒山羊绒毛的周期循环起调控作用。  相似文献