猪腺苷酸活化蛋白激酶α基因(AMPKα)特异性siRNA载体的构建及干扰效果评价     

黄晶  任阳  余秀锋  周锡红  汪以真 《农业生物技术学报》2013,21(9)

腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),在真核细胞生物中广泛存在,是调控机体能量代谢的关键酶.本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)AMPKα基因的有效siRNA干扰载体,并探讨AMPKα基因对脂肪分解关键酶基因表达的影响.根据猪AMPKα基因(GenBank登录号:NM-001167633)全长cDNA序列,设计合成其特异性发夹siR-NA干扰片段,将其克隆插入pSilencer 4.1-CMV neo Vector干扰载体中,构建猪AMPKα基因的siRNA真核表达载体RA1和RA2,并通过PCR、双酶切和测序对其进行鉴定.构建成功后转染猪肌内脂肪前体细胞并检测其干扰效果及对脂肪分解关键酶一一激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和肉毒碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPTl)基因表达的影响.结果表明,所构建的猪AMPKα基因的特异性siRNA表达载体RA1和RA2均可降低猪AMPKα mRNA表达(P＜0.05),而且RA2干扰效果优于RA1.用RA2干扰AMPKα后,猪肌内脂肪前体细胞中AMPKα及脂肪分解关键酶HSL、ATGL和CPT1基因表达量显著下降(P＜0.05).提示,抑制AMPKα基因表达后,猪肌内脂肪前体细胞中脂肪分解和脂肪酸氧化速率降低.本研究结果为深入探讨AMPKα对猪脂肪代谢的影响机制及通过营养调控基因表达进而调控猪体脂沉积提供基础资料.  相似文献   

猪背最长肌肌红蛋白基因片段的克隆及甘氨酸铁对其表达的影响          下载免费PDF全文

马文强  冯杰  许梓荣  汪以真  刘建新 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2009,35(5):503-508

    从杜长大断奶仔猪背最长肌中克隆肌红蛋白(Mb)基因的部分序列并探讨甘氨酸铁对其表达的影响.从仔猪背最长肌提取总RNA,用RT-PCR扩增Mb基因,获得1条约335 bp的片段,以pGEM-T Easy为载体,将该基因片段克隆到大肠杆菌 (Escherichia coli) DH5α中.从筛选的阳性克隆中分离出Mb基因,测定其序列.分析表明,该片段为Mb cDNA的部分序列,编码111个氨基酸组成的多肽.研究得到的基因片段与报道的猪背最长肌Mb cDNA部分序列相似性达到99%.以Mb基因片段克隆为基础,构建优化的半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究不同甘氨酸铁添加量对Mb基因表达的差异.结果表明,与对照组相比,饲养35 d后,60、90和120 mg·kg-1甘氨酸铁组(以铁计)仔猪背最长肌Mb的相对表达量增加了97.35%、108.87%和86.17%(P<0.05).据此认为,甘氨酸铁在一定程度上可以调控肌红蛋白基因表达,改善肉色.  相似文献   

抗菌肽与抗生素对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的体外协同抗菌效果研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

刘倚帆  徐良  朱海燕  张立可  汪以真 《动物营养学报》2010,22(5)

本试验旨在研究抗菌肽与抗生素联合使用对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌的作用效果.通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定,联合药敏试验,研究牛乳铁蛋白肽(Lactoferricin B,LFcin B)、天蚕素A(Cecropin A)及金霉素、新霉素对大肠杆菌(Escherichia coli ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(Staphylo-coccus aureus ATCC25923)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CMCC50013)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa CMCC10014)的体外协同抗菌效应.结果表明:Cecropin A与LFcin B联合使用对所试革兰氏阴性菌均表现为协同作用,两者联用时的MIC分别是单用时的1/4和1/8～1/4;金霉素与LFcin B联合使用对革兰氏阴性菌和阳性菌表现为协同作用,两者联用时的MIC是单用时的1/8～1/4;另外,Cecropin A与金霉素联合使用对革兰氏阴性菌也表现为协同作用.4种药物的两两合用对受试菌株均不表现拮抗作用.结果提示,LFcin B、Cecropin A及金霉素联合使用对革兰氏阴性菌及阳性菌具有协同作用.  相似文献   

黑龙江苹果腐烂病防治技术     

卜海东  刘延杰  顾广军  刘畅  程显敏  冯章丽  孙晓环 《中国林副特产》2015,(2):40-41

苹果腐烂病是苹果树的主要病害,严重时造成毁园。近年来黑龙江地区苹果腐烂病发病率高,是影响苹果产量的重要因素,选择一种适合黑龙江地区的防治技术,为黑龙江省苹果产量的提高提供理论和技术支持。  相似文献   

动物营养和饲料科学研究方法发展趋势   总被引：6，自引：0，他引：6  

李勇竞  汪以真 《中国饲料》2004,(2):14-15

自法国科学家拉瓦锡于 1 783年第一次进行动物测热试验算起 ,动物营养和饲料科学已走过了 2 2 0年的发展历程。在 2 2 0年的发展历史中 ,动物营养和饲料科学的研究方法从最初的经验阶段即描述阶段正在逐渐向控制阶段发展。也就是说目前营养学的研究已不仅仅是停留在对营养规律的探讨上 ,而是正在向预测营养过程和控制营养过程的方向发展。1　由孤立静态的方法转向系统科学的方法动物营养和饲料科学从一开始就和物理、化学特别是生物化学紧密结合在一起。由于研究工作的早期受到当时占统治地位的机械唯物观点的影响 ,直到 2 0世纪 40年代动物…  相似文献   

浅谈畜禽废弃物处理与环境保护策略     

陈希杭  汪以真 《上海畜牧兽医通讯》2009,(5):59-61

我国畜禽生产的废弃物（以粪便为主）产生量很大，并且快速增长。据统计，1999年全国畜禽粪便产生总量约为19亿t，而我国当年工业固体废物为7．8亿t，畜禽粪便产生量是工业固体废弃物的2．4倍；到2000年，全国畜禽粪便达27亿t，是工业废弃物的2．7倍；估计到2010年，排放量将达45亿t。根据研究估计，我国畜禽粪便主要污染物COD、BOD、NH3-N、TP、TN的流失量分别为797．31万t、580．87万t、155．88万t、46．76万t和407．14万t，  相似文献   

俄罗斯苹果种质资源的保存鉴定与利用概况     

王昆  刘凤之  曹玉芬  刘延杰 《中国果树》2010,(4)

俄罗斯巴普洛夫斯克试验站保存苹果种质资源10个种463份,迈科普试验站保存苹果种质资源44个种2 000余份;系统开展了抗病性、抗寒性等鉴定评价工作,编制了目录;利用丰富的资源,已选育出一批抗病、抗寒、商品性好的苹果品种,育出的CK系列苹果砧木已在生产上试栽。  相似文献   

黑龙江省小苹果高接衰退病的调查与检测初报     

刘畅  卜海东  顾广军  程显敏  刘延杰 《现代园艺》2012,(22):148-149

对黑龙江省宁安市地区主要果树栽培果园,以随机取样的方式,采用RT-PCR法检测了小苹果上主要果树病毒并明确带病类型,同时对果树发病情况进行了调查。结果表明:发病严重的果园,新梢生长量仅占正常树新梢生长量的33%～40%,病株率达40%～65%,病死树率达13%～40%。平均单果重仅占正常果的30%～50%大小。  相似文献   

金华猪和长白猪 AMPK 基因的表达差异研究     

余秀锋  任阳  黄晶  汪以真 《中国畜牧杂志》2014,(9):10-14

  相似文献   

动物源抗菌肽的研究现状和展望   总被引：3，自引：0，他引：3  

汪以真 《动物营养学报》2014,26(10)

动物源抗菌肽是机体先天免疫系统的重要效应分子,因其具有广谱高效抗菌活性、细胞选择性及不易产生耐药性等特点,一直被人们认为是抗生素的理想替代品.此外,由于动物体自身分泌的抗菌肽远未达到抑制细菌所需浓度,因此其生物学功能不仅局限于抗菌活性.大量研究表明,抗菌肽不仅具有抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等效果,在体内还表现出抗炎症反应、招募免疫细胞、促进上皮损伤修复、促进细胞吞噬细菌等重要作用.然而抗菌肽在一些方面的研究尚不透彻或存在争议,如抗菌肽是否存在耐药性以及通过重组表达技术生产的抗菌肽是否能安全有效地应用.关于抗菌肽的一些生物学功能与分子机制还有待系统深入的研究,如抗菌肽的构效关系、抗菌肽对益生菌的影响、抗菌肽与抗生素的互作效应、抗菌肽的稳定性及其吸收与代谢情况、营养物质调控内源抗菌肽的表达等.因此本文旨在从动物源抗菌肽的生物学功能、作用机制、稳定性与吸收、表达规律与营养调控、分子改良以及重组表达6个方面进行综述,为研发新型、高效、环保型抗生素替代品提供重要信息和策略.  相似文献