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山羊痘病毒P32基因跨膜区缺失载体的构建与表达* 总被引:2,自引:0,他引:2
P32基因是山羊痘病毒的主要免疫原性基因,含有跨膜区,用一般的诱导方法进行诱导表达,表达量较低。本文尝试用重组PCR消除跨膜区,连接入pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-s重组表达载体,再用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果发现,在58KDa处检测到蛋白,与预期目的蛋白位置相符,用山羊痘标准阳性对表达产物进行Western检测,表达产物可被山羊痘标准阳性血清识别。表达产物以融合蛋白的形式存在,融合蛋白出现在沉淀中,以包涵体的形式存在,用Bandscan软件对所表达的蛋白进行分析发现,表达产物约占菌体蛋白的29.4%。 相似文献
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5株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因的序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在广西的遗传变异情况,对5株不同年代的广西H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行克隆测序及同源性、遗传进化分析。结果表明,5株分离株均为低致病性AIV(LPAIV),HA、NA基因均属于欧亚谱系中的DK/HK/Y280/97(第I亚群),与我国代表株CK/BJ/1/94HA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.5%~95.9%,NA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.8%~95.8%。分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05HA基因第226位氨基酸由谷氨酰胺(Gln)突变为亮氨酸(Leu),具备人类流感病毒的受体特征,而在糖基化位点方面,除了CK/GX/6/00HA基因的第218位发生变异以外,5株分离株HA基因上其余各糖基化位点均未发生变异;分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05、QA/GX/B1/06NA基因均缺失第63、64、65位3个氨基酸,导致1个糖基化位点缺失,而CK/GX/6/00、WB/GX/A1/06NA基因则未发生缺失。 相似文献
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采用PCR和RT—PCR对2004~2008年广西种猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病(PR)进行监控。结果表明,2004~2008年广西种猪场CSF、PRRS、PR、PCV2均有不同程度的发生,其中2004年阳性率最高,2008年阳性率最低(全部为阴性)。从2004~2008年,组织样品的PRRSV阳性率呈逐年下降趋势;CSFV和PRV的阳性率变化趋势相似,即2004年较高、2005年有所下降、2006年有所反弹、2007~2008年呈下降趋势;PCV2阳性率变化趋势则是在2005~2006年出现一个峰值。在公猪精液方面,PRRSV、PRV、PCV2阳性检出率呈逐年下降趋势。不同年份内不同疫病对种猪场的影响程度也存在差异。可见,以PCR和RT—PCR来监控种猪场疫病具有较高的可行性。 相似文献
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O型口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1的克隆与原核表达(英文) 总被引:6,自引:1,他引:5
According to the complete genome of foot-and-mouth disease virus(FMDV)type O,a pair of special primers was designed to amplify VP1 gene.The VP1 gene was amplified by RT-PCR and subsequently inserted into the expression vector pGEX-6p-1 and induced by IPTG.Then SDS-PAGE showed the expressed protein was 51 kD in molecular weight.Then the product was purified by GSTrap FF columns.The product was detected through Western-blot that showed the protein has antigenicity.It provided fundamental data and materials for further investigation on diagnosis method of FMDV. 相似文献
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广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告 总被引:2,自引:0,他引:2
为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。 相似文献