稳定表达猪SARM1的MARC-145细胞系的建立     

周翔  纪立凯  李振红  王鹏  刘榜 《农业生物技术学报》2015,(4):538-545

猪(Sus scrofa)SARM1基因是重要的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)候选基因,建立稳定表达SARM1的猴胚胎肾上皮细胞系(MARC-145)是进行SARM1功能研究的基础。本研究成功构建p EGFP-N1-p SARM1真核表达载体,并在MARC-145细胞中瞬时转染,结果显示,猪SARM1-GFP融合蛋白定位于MARC-145细胞的线粒体。使用浓度为800μg/m L的G418对转染p EGFP-N1-p SARM1的细胞进行加压筛选6 d,并进一步使用单克隆法筛选出稳转细胞系,结果显示,稳转细胞系形态正常,绿色荧光稳定表达。RT-PCR和Western blot检测结果均显示SARM1基因在稳转细胞系中稳定表达。应用q RT-PCR方法在PRRSV感稳转细胞系12 h后可以检测到PRRSV开放阅读框7(open reading frame 7,ORF7)在稳转细胞系中表达,并且稳转细胞系中ORF7的表达量在感染后12、24和48 h极显著低于普通MARC-145细胞中的表达量(P<0.01)。组织半数感染量(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定进一步证明PRRSV在稳转细胞系中复制能力较低。本研究为进一步开展猪SARM1在PRRSV感染过程中的功能研究提供了基本材料。  相似文献   

一种改良的从LongSAGE标签中鉴定猪新基因的GLGI方法   总被引：3，自引：0，他引：3  

唐中林  李勇  赵书红  刘榜  樊斌  李奎 《农业生物技术学报》2007,15(1):15-19

将长的基因表达序列标签(LongSAGE)和结合标签的基因序列延伸(GLGI)技术相结合,对GLGI的方法进行改良。(1)将原始GLGI方法中正向引物中长为10bp的SAGE标签特异序列改为17bp的LongSAGE标签;(2)针对不同LongSAGE标签,在PCR反应中给定相应不同的退火温度;(3)在PCR反应中用普通的DNA聚合酶代替高保真酶(Pfu);(4)在PCR反应的克隆中,使用普通的T载体和感受态细胞代替原始方法中特异的载体和感受态细胞。利用改良的GLGI方法分离的EST位于cDNA的3′末端并带有加尾信号和ploy(dA)尾巴。该方法在鉴定低丰度表达的基因时比普通的EST测序方法具有更高的灵敏性。  相似文献   

对藏鸡开发利用的思考   总被引：11，自引：0，他引：11  

刘榜 《中国家禽》2004,26(18):49-51

西藏有“世界屋脊”之美称，是青藏高原的主体部分，平均海拔在4000米以上。西藏高原复杂多样的地形外貌，形成了独特的高原气候。除呈现西北严寒干燥，东南温暖湿润的总趋势外，还有各种各样的区域气候和明显的垂直气候带。西藏特殊的生态环境孕育了丰富而独特的物种资源。  相似文献   

随机扩增微卫星DNA多态标记(RAMPs)及其应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

樊斌  刘榜  李奎 《中国牛业科学》2002,28(2):27-29

随机扩增微卫星DNA多态标记是在微卫星DNA基础上衍生出的一种新型分子标记。它综合了微卫星DNA和随机扩增多态DNA（RAPD）两种标记的优点，可用来快速检测动植物群体的遗传变异及分离新的微卫星DNA。本文介绍了随机扩增微卫星DNA多态标记的种类及其应用。  相似文献   

猪人工授精中心在育种值跨群比较中的应用     

彭中镇  刘榜  赵书红  朱猛进 《猪业科学》2007,24(5):66-69

本文在概述人工授精(AI)技术在猪遗传改良中所起作用的基础上,重点分析了猪AI中心在育种值跨群比较中的突出作用;讨论了在大型猪AI中心引领下形成AI网以及联合组成行业组织的必要性;阐述了对联合育种的理解,建议在着眼于完全实现全国种猪遗传评估的大目标下,先试点推行片区"AI中心 场内测定 跨场评估"联合育种模式,再扩大这种实质上的联合育种的范围;并建议采取实际步骤加强大型AI中心的规范化建设.  相似文献   

猪Sar1b基因的分子克隆、序列分析及原核表达     

王学敏  刘榜  赵书红  樊斌  朱猛进  余梅  熊统安  李奎 《畜牧兽医学报》2007,38(7):625-629

根据GenBank已发表的猪Sar1b基因序列（GenBank登录号：AY819557）设计1对引物,以猪肝脏组织总RNA的反转录产物为扩增模板,用RT-PCR方法扩增出猪Sar1b基因cDNA全长编码区,经过EcoRI-SalI双酶切后定向克隆于pET28a原核表达载体,获得pET28a-Sar1b重组原核表达载体。将携带有重组原核表达载体的大肠杆菌BL21（DE3）通过1 mmol/LITPG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大小大约为26 ku,与预期表达蛋白大小一致。Western blot检测显示该蛋白为His融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。猪Sar1b基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。  相似文献   

我国养猪业的特点及若干思考   总被引：3，自引：0，他引：3  

朱猛进  刘榜  彭中镇 《中国畜牧兽医》2005,32(6):24-27

猪肉是我国城乡居民动物性蛋白的主要来源，养猪业的发展在我国具有极其重要的理论和实践意义。作者对我国养猪业的特点进行了较为系统的归纳和总结，并指出了目前我国养猪业面临的主要问题。在此基础上，对我国养猪业发展的方向性问题进行了思考，提出了发展“优质猪肉”生产是我国在加入WTO后受国外养猪企业冲击的严峻形势下实现可持续发展的重要出路的观点，最后提出了调整我国猪育种目标的建议。  相似文献   

通城猪保种与利用信息管理系统的研制与应用     

黄廷华  樊斌  徐三平  李奎  刘榜 《中国畜牧杂志》2006,42(3):50-51

通城猪是我国著名地方猪品种，具有肉质嫩美、繁殖力高、杂交配合力好、适应性强等特点，是“华中两头乌”中最具代表性的一个类群，于2000年被列入全国第1批地方品种资源保护名录。据统计，通城猪现有15个血统，每个血统保留2头公猪，其中县种畜场和6个生猪品种改良站各保存每个血统的1头公猪，各乡镇种猪场和农户保存每个血统的另1头公猪；存栏纯种通城母猪约1万头，其中县种畜场饲养80头，乡镇种畜场、保种基地及保种专业户饲养约6000头，农村分散养殖3000余头。  相似文献   

猪分子育种研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘榜 《猪业科学》2010,27(1):90-91

<正>分子育种主要是一种利用DNA水平上的分子标记对生物群体进行遗传改良。动物分子育种方法主要包括标记辅助育种、转基因育种和体细胞克隆育种。本文主要从标记辅助  相似文献   

一种适于PCR扩增的快速提取猪基因组DNA的碱裂解法     

赵金艳  刘榜  王文君  张宇  张庆德 《华中农业大学学报》2017,36(4):90-94

以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。  相似文献