拟南芥抗菌核病突变体的筛选   总被引：1，自引：0，他引：1  

高荣村  董彩华  胡胜武  刘胜毅 《中国油料作物学报》2006,29(4):388-391

为筛选模式植物拟南芥抗菌核病基因源，建立了两种抗性鉴定筛选方法：菌丝体直接接种离体叶法和菌核病毒素草酸-病菌接种两步法。后者是先用2 mmol/L草酸在MS培养基上筛选，存活的植株经PCR验证，阳性植株移栽培养15 d 后，再用菌丝体接种鉴定。采用第一种方法筛选了5 000株突变体，发现了抗感差异明显的个体；采用第二种方法筛选了46 600株，发现2株对菌核病高抗的功能缺失型突变体。野生型对照在接种后12h即出现病斑，而突变体在36h才出现，其病斑大小仅为对照的六分之一。  相似文献   

油菜不同器官高质量总蛋白提取方法和双向电泳体系的优化   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘海衡  胡胜武  刘胜毅  黄军艳  董彩华 《中国油料作物学报》2009,31(4):426-433

以显性核不育油菜Shaan-GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA（三氯醋酸）-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG（固定pH梯度）胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明,采用理想的蛋白质裂解液（7 mol/L 尿素,2 mol/ L 硫脲,4% CHAPS（3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐）,65mmol二硫苏糖醇,0.5% IPG缓冲液 pH 3~10或pH 4~7,全蛋白酶抑制片剂 (片／10 ml)）裂解蛋白,以150μg上样,按IEF程序Ⅱ(30V,12Hr;200V,1Hr;500V,1Hr;1000V,0.5Hr;10000V,2Hr;10000V,80000VHr)进行等电聚焦,10%SDS-PAGE胶浓度进行第二向电泳,银染方法检测,可得到背景清晰、分辨率较高的油菜花蕾、花药及叶片蛋白质电泳图谱。高质量油菜蛋白的提取方法和蛋白质分离双向电泳体系的优化可为油菜蛋白质组学研究奠定技术基础。  相似文献   

枯草芽胞杆菌在油菜根茎叶的定殖动态和生防作用研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

胡小加  江木兰  刘胜毅  余常兵  张银波  廖星 《中国油料作物学报》2009,31(1):61-64

采用常规方法跟踪枯草芽胞杆菌Tu-100在缩影系统油菜根际的定殖情况。Tu-100在油菜不同根段部位的定殖密度从上到下呈现了逐渐递减的规律。随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8cm以外的根区几乎检测不到接种菌。在油菜播种后3d,定殖密度可达最高水平（8.3×105 个/g）,然后急速下降,30d后保持相对稳定的较低水平（1.3×102 个/g）。 在油菜三片真叶时喷雾接种一次,20d后,在茎和叶上不能检测到所接种的Tu-100,并且抗菌核病的能力也逐渐减弱。  相似文献   

甘蓝型油菜BnEIN3基因的克隆及菌核病诱导表达研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

许李明  黄军艳  刘学群  覃瑞  刘胜毅 《农业科学与技术》2009,10(2):33-36

乙烯不敏感转录调节基因（EIN3）是定位于细胞核上的乙烯信号转导下游元件,其作为转录因子启动一系列转录级联反应,从而激活乙烯诱导的防御相关基因的表达。拟南芥EIN3功能缺失突变体表现出对死体营养型病原菌高度敏感,表明该基因在抗死体营养型病原菌中发挥一定作用。为克隆甘蓝型油菜EIN3（BnEIN3）基因,该研究采用荧光定量PCR研究菌核病不同抗性的油菜品种接种核盘菌后,BnEIN3的表达变化及差异,初步探讨了BnEIN3在油菜菌核病防卫反应中的作用。  相似文献   

枯草芽孢杆菌Tu-100对油菜根系分泌物所含氨基酸的趋化性研究     

胡小加  余常兵  李银水  刘胜毅  廖星 《土壤学报》2010,47(6):1243-1248

应用水培的方法采集油菜根系分泌物;采用高效液相色谱测定出油菜根系分泌物中所含的16种氨基酸;使用烧杯法和平板趋化法进行趋化性试验,分别测定枯草芽孢杆菌Tu-100对16种氨基酸、油菜根系和油菜菌核的趋化性。结果表明Tu-100仅对组氨酸、脯氨酸、精氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸等5种氨基酸有趋化性,其中组氨酸的趋化性最强;Tu-100对油菜根系和油菜菌核也有趋化性,对油菜根系的趋化性要大于油菜菌核。  相似文献   

甘蓝型油菜MAP激酶4的序列及其诱导表达分析   总被引：1，自引：3，他引：1  

王政  毛晗  董彩华  黄军艳  刘胜毅 《中国油料作物学报》2008,30(4):397-400

拟南芥MPK4（AtMPK4）在病害抗性中具有重要作用。本文克隆和分析了油菜MPK4（BnMPK4）的cDNA及其氨基酸序列和诱导表达变化。推导的氨基酸序列含有T201E202Y203磷酸化位点和CD锚定区域,与AtMPK4的序列相似性为95%。用化学物质苯丙噻重氮、甲基茉莉酸、草酸以及核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）分别处理油菜品种中双9号,采用荧光定量PCR方法测定BnMPK4在各诱导或处理后的表达量。结果表明,苯丙噻重氮快速诱导该基因的表达,甲基茉莉酸抑制其表达;草酸和核盘菌均快速诱导该基因上调表达,并且二者的上调表达趋势相似。结果表明油菜MPK4可能在油菜菌核病防卫反应中起作用。  相似文献   

黑胫病弱毒种Leptosphaeria biglobosa通过不同的信号途径诱导油菜抗性     

刘胜毅  刘仁虎  Hans Cools  Huang Y J  Bruce D L Fitt  John A Lucas 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2005,33(Z1):257

油菜黑胫病是由两种类型病原引起的,分别为A型强致病株(L.maculans)和B型弱致病株,B型现命名为一个新种L.biglobosa。本试验研究了弱致病株诱导的针对强致病株的抗性及其分子信号途径。油菜叶分别用弱致病株子囊孢子预接种和及病害防御反应信号分子水杨酸类似物(acibenzolar-S-methyl, ASM)与维生素K3(menadione sodiumbisulphate,MSB)处理,然后挑战接种强致病株子囊孢子。在控制条件下的试验中,预接种和预处理均推迟了由强致病株引起的病害症状的出现,减小了局部叶和系统叶上的病斑大小。2年的田间试验表明,弱致病株和ASM不仅减少了…  相似文献   

四种油料作物中的细菌型PEPC基因的鉴定及在发育种子中的表达     

王志慧  童超波  袁午舟  刘学群  程晓辉  于景印  董彩华  刘胜毅 《中国油料作物学报》2013,35(1):8-16

鉴定和获取了四种油料作物（油菜、大豆、花生和芝麻）中的细菌型PEPC基因,分析了所编码蛋白的保守结构域（BOX I-IV）和蛋白作用功能位点。基因包括甘蓝型油菜的Bna10093361、Bna1009749和Bna10093360,大豆的Glyma10g34970.1, Glyma01g22840.1和Glyma02g14500.1,芝麻的SIN1018296和花生的AhPPC5。这8个基因含有19～21个内含子,内部插入一个约350～600bp的高度变异区,编码的蛋白在C端形成R/KNTG结构域,在N端缺乏磷酸化作用位点。在种子发育的不同时期,油菜中仅Bna10093360表达,但其表达量不到油菜BnActin表达量的0.1%;大豆中Glyma10g34970.1表达量最高（接近大豆GlymaActin的2%）,Glyma02g14500.1次之;花生AhPPC5表达量为花生AhActin的32%～175%,在种子不同发育时期表达量为早期>中期>晚期;芝麻SIN1018296表达量为芝麻SINActin的3%～18%,在种子发育时期的表达趋势和花生AhPPC5相似。8个基因种子中的表达模式差异明显,说明细菌型PEPC基因可能存在着广泛的功能分化。    相似文献   

油菜基因BnWRI1的克隆及RNAi对种子含油量的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

柴国华  白泽涛  蔡丽  郭学兰  张学江  石磊  董彩华  刘胜毅 《中国农业科学》2009,42(5):1512-1518

 【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384 bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中,【结果】获得3棵转基因植株,PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-PCR和改进的索氏提取法分别检测转基因T1代植株的BnWRI1基因表达量和种子含油量,结果表明：与非转基因对照相比,转基因植株的BnWRI1基因均受抑制,种子含油量有所降低。【结论】采用RNAi技术可使油菜内源基因BnWRI1沉默,表明油菜基因BnWRI1能有效调控种子含油量。  相似文献   

植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因研究进展     

柴国华  付先虎  白泽涛  黄军艳  刘胜毅 《中国农业科技导报》2009,11(5):17-22

植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因在植物生长发育过程中扮演重要角色。近年来,随着分子生物学的不断发展,对其研究也取得了重要进展。综述了植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、功能、表达调控以及编码蛋白质的结构、底物等方面的研究进展,可为进一步阐明该基因对植物生长发育的影响提供依据。  相似文献