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根据GenBank中发表的E.coli K88、K99基因序列,分别设计合成1对引物.利用PCR技术,以大肠杆菌C83907和C83644的质粒为模板分别扩增不含信号肽的K88及K99基因.通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切,连接和转化,构建了含K88-K99串联表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pETK88CK99).结果显示,经酶切,PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETK88CK99中含有K88K99融合基因,且基因序列和阅读框架均正确.经过SDS-PAGE分析,串联表达蛋白含量占菌体蛋白的40%左右,经Western blotting检测,该串联表达蛋白能被大肠杆菌K88、K99标准血清识别.结果表明,构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株. 相似文献
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为了从分子水平上掌握我国H9亚型禽流感的变异情况和流行规律,本研究汇集近年来从我国部分省市养殖场分离的10株禽流感H9N2亚型毒株,采用RT-PCR技术对其HA和NA基因进行扩增、克隆和测序,并对所得全序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,本试验分离到的10株病毒的HA和NA基因变异程度不大,变异概率大;在遗传进化树中均属于欧亚分支中的类CBJ194亚分支,与CBJ194的HA基因核苷酸同源性在88.8%~95.8%,NA基因核苷酸同源性在93.4%~97.6%,可能与CBJ194由同一毒株进化而来。由于基因突变使ACHB101毒株的HA基因出现了新的糖基化位点,ACHN102毒株的保守受体结合位点发生变异。NA基因推导氨基酸序列中第63、64、65位有T、EI、3个氨基酸的缺失,导致61位糖基化位点的丢失。唾液酸吸附位点上有明显的突变。HA和NA基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。 相似文献
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鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用 总被引：1，自引：0，他引：1
鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)是一种新发现可引起鸭产蛋下降的新型黄病毒,建立一种病原学检测方法对于疫病的诊断和流行病学研究具有重要意义。在对DTMUV序列的比对分析的基础上,设计了1对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立了DTMUV的一步法RT-PCR检测方法。该方法具有特异、快速、敏感、准确等特点,可以检出1.82个TCID50的病毒核酸。对2010年至2011年6月份前的106份产蛋下降鸭群临床病料进行了检测,结果显示样品阳性率为46.2%,表明DTMUV在浙江及其周边省份的产蛋鸭群具有较高的感染率。 相似文献
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为了解QX基因型鸡传染性支气管炎病毒(QX-IBV)致弱的分子机制,本研究对SDZB0808分离株在鸡胚中连续传100代的子代病毒P100进行了致病性试验和全基因组测序分析。致病性试验结果显示P100对3日龄SPF鸡无明显致病性,而亲本株SDZB0808对3日龄SPF鸡致死率为40%。序列比对结果显示,以亲本株SDZB0808为参考株,P100基因组发生3个有义突变,导致ORF 1a编码的蛋白(I3 047L)、S蛋白(N76Y)、E蛋白(L29I)发生了氨基酸替换;此外,P100在第3 244 nt~3 273 nt位点连续性缺失30个核苷酸,导致ORF 1a编码的蛋白在906~915位缺失10个氨基酸。本研究结果表明QX-IBV分离株SDZB0808毒力致弱可能与其基因组序列突变和缺失有关。 相似文献
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传染性法氏囊病穴infectiousbursaldisease熏IBD雪是由传染性法氏囊病病毒穴IBDV雪引起的鸡和火鸡的一种急性高度接触性传染病。该病主要侵害3～6周龄雏鸡与青年鸡,以损害法氏囊中的淋巴细胞为特征;临床上出现增重减少、死亡、机体严重脱水和骨骼肌出血眼1演。除直接引起鸡死亡与生产性能下降外,还可引起其免疫力下降,增加感染鸡对其他病原体的易感性和对疫苗的免疫应答能力下降眼2演。该病由Cosgrove于1962年作为一种新的疾病报道;1970年,Hitchner建议将该病命名为传染性法氏囊病。1980年,有人报道IBDV存在第二个血清型,至今未能证明… 相似文献
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